Требовательность к питательным средам.

Энтеробактерии не требовательны к питательной среде.

Растут на простых питательных средах, большинство хорошо культивируется при 37 °С, некоторые (род Yersinia) наибольшей метаболической активностью обладают при 25-30 °С.

Для выявления энтеробактерий существуют как элективные, так и дифференциально-диагностические среды.

Элективные (избирательные) среды. Принцип создания элективных питательных сред основан на удовлетворении основных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназначены. Определенный состав и концентрация питательных микроэлементов, ростовых факторов при строгом значении рН. При посеве на них материала, содержащего смесь различных микроорганизмов, раньше всего будет проявляться рост того вида, для которого данная среда будет электив­ной.

Дифференциально-диагностические питательные среды используют для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ.

Дифференциально-диагностические среды, применяемые для исследования при кишечных инфекциях: состав, назначение, характер изменений при росте различных представителей.

Среда Левина (эозин-метиленблау агар) = пит.агар + 1% лактоза + индикатор + метиленовый синий эозин — наличие в среде лактозы позволяет выделять патогенную микрофлору, не способную разлагать этот углевод. Входящие в состав среды Левина органические красители задерживают рост сапрофитов. Микроорганизмы, ферментирующие лактозу, образуют на среде колонии фиолетового цвета с металлическим блеском. Лактозоотрицательные энтеробактерии образуют прозрачные, бесцветные колонии. Стафилококки образуют на среде Левина -ГРМ мелкие колонии с темным центром.

Среда Кесслера (ГРМ) = 1% пептонная вода + 5% желчи + 0,25% лактозы + панкреатический гидролизат рыбной муки + кристаллический фиолетовый + натрий углекислый = предназначена для обнаружения бактерий группы кишечной палочки по признаку ферментации лактозы. Кишечная палочка и клебсиелла вызывают помутнение среды и газообразование, у ентеробактера газообразование выражено слабо, псевдомонас только слабое помутнение среды, другие знтеробактерии не растут. Газообразование определяют с помощью поплавка – перевернутого сосудика, который всплывает при наличии газов.

Среда Кода =натрия додецилсульфат + пептон сухой ферментативный + панкреатический гидролизат рыбной муки + лактоза + натрия хлорид + бромтимоловый синий + натрия карбонат = также предназначена для выделения и дифференциации энтеробактерий по признаку ферментации лактозы. Признаком роста лактозоположительных энтеробактерий (БГКП) является изменение цвета среды с темно-зеленого до ярко-желтого; лактозоотрицательных энтеробактерий (шигелл, сальмонелл) – помутнение среды без изменения цвета.

Среда Эндо (фуксин-сульфитный агар) = МПА + 1% лактоза + индикатор + основной фуксин = – при контроле санитарного состояния производства и качества готового продукта на предприятиях пищевой промышленности. По характеру колоний на среде Эндо судят о принадлежности микроорганизмов, давших рост на накопительных питательных средах, к лактозоположительным или лактозоотрицательным энтеробактериям. Характерным ростом для БГКП является образование красных или темно-красных колоний с металлическим блеском.

Висмут-сульфит агар= триптическийгидролизат кильки + глюкоза + неорганические соли + агар + бриллиантовый зелёный = - строго селективная среда для выделения сальмонелл. Дифференцирующее действие среды основано на том, что образуемый бактериями из сульфата железа сероводород, вызывает почернение индикатора – цитрата висмута – вследствие перехода его в сульфид висмута, вещество черного цвета. Поэтому бактерии, образующие сероводород, формируют черные или черные с коричневым или темно-зеленым оттенком колонии, обладающие часто металлическим блеском. Среда под колониями, при этом, окрашена в черный цвет.

Агар Плоскирева = МПА + 1% лактоза + индикатор + нейтральный красный + соли желчных кислот + бриллиантовый зелёный = — селективная среда для выделения шигелл и сальмонелл. Готовая среда прозрачна, имеет розовато-желтоватый цвет. В состав среды Плоскирева входят ингибирующие вещества (желчные соли, бриллиантовый зеленый, йод), вследствие чего она должна полностью подавлять рост грамположительной флоры, значительно задерживать (первые 24 ч) рост эшерихий и другой сопутствующей микрофлоры, подавлять роение протея. Дифференцирующие свойства агара Плоскирева основаны на изменении рН в кислую сторону при росте лактозоферментирующих бактерий, которые образуют колонии брусничного цвета (индикатор нейтральный красный). Лактозоотрицательные бактерии вырастают в виде бесцветных или слабоокрашенных колоний. Вегетирующие свойства среды недостаточны для роста Sh. dysenteriae и некоторых сальмонелл (S. cholerae-suis, S. pullorum).

Какие из бактерий кишечной группы подвижны и неподвижны?

Эйшерихии – подвижны Сальмонеллы – большинство подвижны, кроме S.Gallinarum

Шигеллы – неподвижны

Сальмонеллы – подвижны

Клебсиеллы – подвижны

Иерсении - неподвижны при 37°С, но подвижны при ниже 30°С

Род Salmonella: характеристика, классификация.

Род получил название в честь Д. Сальмона, который в 1885 г описал микроб, выделенный из свиньи и известный в настоящее время под названием S. Choleraesuis.

Морфологические и культуральные свойства. Подвижные грамотрицательные палочки, размером 0,7x1,5x2—5 мкм. Капсулу не образуют. Хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных средах могут образовывать колонии в R-и S-формах, на жидких — диффузное помутнение.Колоний в S-форме средних размеров (некоторые серовары, например S.Abortusovis, формируют мелкие колонии), гладкие, блестящие, полупрозрачные, с голубоватым оттенком.Серовар S. Schottmuelleri (S.Paratyphi В) при росте на плотных средах образует слизистые валики. Жидкими средами обогащения при посеве крови является желчный бульон, при посеве содержащих дополнительную флору материалов (фе

калий, желчи, мочи) — селенитовый бульон. На лактозосодержащих средах образуют бесцветные колонии, на висмут-сульфитномагаре — колонии черного цвета.

Физиология. Обладают выраженной биохимической активностью. По биохимическим свойствам род однороден. Основные биохимические свойства, необходимые для идентификации:

— ферментация глюкозы до кислоты и газа (за исключением S.Typhi),

— отсутствие ферментации лактозы,

— продукция сероводорода,

— отсутствие индолообразования.

Антигенная структура и классификация.

Сальмонеллы обладаютсоматическимО-антигеном, жгутиковым Н-антигеном. Некоторые сальмонеллы обладают К-антигеном.

В связи с тем, что по основным биохимическим свойствам представители рода Salmonella однотипны, дифференциация внутри рода проводится по антигенной структуре.

Имеется несколько классификаций сальмонелл. Наиболее старой является классификация по Кауфману—Уайту. В основе этой классификации лежит подразделение сальмонелл на серогруппы по общности строения О-антигена, а внутри серогруппы — на серовары, в соответствии с различиями в строении Н-антигена.

О-антиген состоит из R-ядра и боковой S-цепи. К S-цепи присоединяются сахара, которые называют рецепторами и обозначают цифрами. Критерием для объединения в серогруппу является общность конечного сахара, который по химической природе является

3,6 -дидезоксигексозой.

Н-антиген является двухфазным. Это свя¬зано с тем, что его синтез кодируется двумя независимыми генами, работа одного из ко-торых исключает работу другого. Поэтому в каждой клетке может быть синтезирован только один белок (фаза). Первая фаза обозначается буквами, она считается специфической, вторая фаза — цифрами, ее принято считать неспецифической.

В таблице Кауфмана—Уайта (табл. 16.12) внутри серогруппысероварырасположены в алфавитном порядке. В прежнихклассифи-кациях каждый серовар соответствовал виду, которых насчитывалось более 2500.

Согласно последней классификации, рол Salmonella состоит из двух видов — вила S. enterica, в который включены все сальмонеллы, являющиеся возбудителями человека и теплокровных животных, и вида S. bongori. который подразделяется на 10 сероваров и включает в себя сальмонеллы, изолированные от холоднокровных животных.

Вид S. enterica разделен на 6 подвидов, которые в свою очередь подразделены на серо-вары. Все серовары подвида enterica имеют названия, которые соответствуют прежним видовым названиям. Например: S. typhi — S. Typhi.

Патогенность и патогенез. Сальмонеллы обладают множественностью факторов патогенности, многие из которых еще недостаточно изучены. Совокупность действия факторов патогенности обеспечивает сальмонеллам трансцитоз, т. е. инвазию слизистой через М-клетки, а также резистентность к фагоцитозу, позволяющую сальмонеллам сохраняться ж размножаться внутри фагоцитов. Трансцитоз: обеспечивается белками секреторной системы 3 типа, синтез которых детерминируете» «островком патогенности 1», имеется белок наружной мембраны инвазии Особенность в том, что он индуцируется в среде с высоким осмотическим давлением, соответствующих таковому в тонком кишечнике.

Резистентность к фагоцитозу обеспечивается многими факторами. В этом процессе принимают участие продукты генов, расположенных на «островке патогенности 2», синтез которых индуцируется внутрифагоцитарньш окружением. Установлено, что в формировании антифагоцитарной активности сальмонелл принимает также участие фермент супероксиддисмутаза, инактивирующая радикалы.

Все сальмонеллы обладают эндотоксином, который вызывает развитие лихорадки в случае бактериемии, вызванной сальмонеллами. При достижении критической концентрации эндотоксин активирует каскад арахидоновой кислоты в тканях.

Попав после перорального заражения в тонкий кишечник, сальмонеллы инвазируют трансцитозом слизистую кишечника через М-клетки без повреждения слизистой. Из М-клёток сальмонеллы транспортируются в субэпителиальное пространство, где захватываются макрофагами и привносятся в прилегающие к М-клеткам пейеровы бляшки, где, размножаясь в макрофагах, формируют первичный очаг инфекции

Резистентность. Сальмонеллы устойчивы к воздействию факторов внешней среды. Выдерживают pH в диапазоне 4—9; в водоемах, сточных водах, почве сохраняют жизнеспособность до 3 месяцев, в комнатной пыли — от 80 до 550 дней. Хорошо переносят низкие температуры. В зараженных продуктах сохраняются: в колбасе — 3 месяца, в замороженном мясе и яйцах — до 1 года, на овощах и фруктах — 5—10 дней. При нагревании до 56 °С сальмонеллы гибнут в течение 45-60 мин, температура 100 °С убивает их мгновенно. Растворы дезинфицирующих веществ (5% фенол, 3% хлора-мин, 3% лизол) убивают сальмонеллы в течение 2-3 мин. При неблагоприятных условиях сальмонеллы могут переходить в некультивируемую форму.

Написать по-латыни названия возбудителей брюшного тифа и паратифов.

S. Typhi

S. Paratyphi В

S. Paratyphi А

Морфология, отношение к окраске по Граму, факторы патогенности возбудителей брюшного тифа и паратифов.

Грамотрицательные, красные, беспорядочные

Возбудителем брюшного тифа является S. Typhi, впервые обнаруженный К. Эбертом в 1880 г. в срезах селезенки, лимфатических узлов и пейеровых бляшек людей, умерших от брюшного тифа. В 1884 г. Т. Гаффки выделил возбудитель в чистой культуре. S. Paratyphi

А и S. Paratyphi В, которые схожи с брюшным тифом по патогенезу, клиническим проявлениям и эпидемиологии заболевания. Брюшной тиф и паратифы явля-ются антропонозами, т. е. S. Typhi, S. ParatyphiA, S. Paratyphi В вызывают заболевание только у человека. Источником инфекции является больной илибактерионоситель, которые выделяют возбудитель во внешнюю среду с испражнениями, мочой, слюной. Возбудители этих инфекций, как и другие сальмонеллы, устойчивы во внешней среде, сохраняются в почве, воде. Благоприятной для них средой являются пищевые продукты (молоко, сметана, творог, мясной фарш, студень), в которых сальмонеллы способны размножаться. Передача возбудителей осуществляется водным путем, играющим в настоящее время существенную роль, а также алиментарным и контактно-бытовым путями. Заражающая доза равняется приблизительно 1000 клеток. Естественная восприимчивость людей к возбудителям тифа и паратифа высокая.

Морфология, культуральные, биохимические свойства. Сальмонеллы брюшного тифа и паратифов - это короткие палочки с закругленными концами, в среднем 1-2 мкм длиной. Все они подвижны (перитрихи), спор и капсул не образуют. Грамотрицательны. Факультативные ана­эробы. Хорошо растут на простых питательных средах, при рН 7,2-7,4, оптимум роста при 37°С. Элективной средой для них являются сре­ды, содержащие желчь, которая препятствует росту кишечных пало­чек и других бактерий.

Ферментативные свойства сальмонелл используются для опреде­ления вида (табл. 5). В отличие от эшерихий, сальмонеллы не сбраживают лактозу и сахарозу, сбраживают глюкозу и маннит, причем па­лочка брюшного тифа только до кислоты, а паратифозные палочки -до кислоты и газа. Палочка паратифа А, в отличие от палочки пара­тифа В, не образует сероводорода.

Антигены. Сальмонеллы содержат О-антигены, Н-антигены и К-антиген. Идентификация проводится по антигенной структуре в соот­ветствии с классификацией, разработанной Кауфманом и Уайтом (табл. 7). По этой схеме все сальмонеллы по О-антигенам разделены на группы: А, В, С, D, Е и т.д. каждая группа имеет специфический О-антиген (например, в группе D - это О9). Некоторые группы имеют общие О-антигены (например, группы А, В и D имеют общий антиген 012). S. typhi, ее вирулентные штаммы содержат Vi-антиген, который располагается более поверхностно, чем О-антиген. У Н-антигенов саль­монелл различают I и II фазу. По I (специфической) фазе внутри групп сальмонеллы делятся на виды.

Пользуясь схемой Кауфмана-Уайта, определяют виды сальмонелл: с помощью монорецепторныхО-сывороток определяют группу, к которой принадлежит выделенная культура сальмонелл, с помощью Н-сывороток определяют вид.

Факторы патогенности.Сальмонеллы не продуцируют экзотокси­на, содержат эндотоксин, который выделяется при их разрушении. Патогенность их связана также со способностью проникать в клетки и размножаться в них (инвазивность).

Устойчивость. Возбудители тифо-паратифозных инфекций отно­сительно устойчивы во внешней среде. В воде открытых водоемов, в в почве, куда они попадают с испражнениями людей, они могут сохра­няться в течение 1 -3 месяцев, на овощах и фруктах 5-10 дней, во льду -до 2 месяцев. При 50°С погибают в течение часа, при 100°С - немед­ленно. Дезинфицирующие вещества убивают их в течение нескольких минут.