Тема 8: форма и строение интерфазного ядра. Хроматин ядра, ядрышко

ИЗУЧЕНИЕ ФОРМЫ ЯДЕР КЛЕТОК В МАЗКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (препарат 19)

(окрашено гематоксилин-эозином)

При малом увеличении в поле зрения мазка крови преобладают округло-овальные клетки, окрашенные эозином в розовый цвет. Это эритроциты. У млекопитающих, в том числе и у человека, зрелые клетки не содержат ядра. Среди большого числа эритроцитов следует найти ядросодержащие клетки крови - лейкоциты и рассмотреть их при большом увеличении.

Наиболее часто встречаются сегментоядерные нейтрофилы, имею­щие темно-фиолетовое сегментированное на 3-5 долей ядро и слаборозовую мелкозернистую цитоплазму. Значительно реже встречаются эозинофилы, отличающиеся ярко выраженной оксифилией цитоплазмы. Ядро эозинофилов, как правило, имеет два, реже три сегмента. Еще реже можно увидеть базофилы, характеризующиеся крупнозернистой базофильной цитоплазмой и слабоокрашенным не полностью сегменти­рованным ядром. Лимфоциты - клетки с крупным округлым ядром и небольшим обод­ком цитоплазмы. Вследствие сильной конденсации хроматина в яд­рах лимфоцитов на препаратах они имеют интенсивную темно-фиоле­товую окраску. Моноциты представляют собой крупные клетки с бобовидным бледно окрашенным ядром и серовато-голубой обширной зоной цитоплазмы.

ИЗУЧЕНИЕ ЯДЕР В КЛЕТКАХ ЛЕГКОГО (препарат 20)

( окраска на ДНК реактивом Шиффа по Фельгену)

ДНК хроматина можно идентифицировать с помощью метода, пред­ложенного Фельгеном и заключающегося в специфической реакции альдегидных групп дезоксирибозы, освободившихся после мягкого гидролиза ткани, с реактивом Шиффа. Этот метод позволяет не только идентифицировать ДНК, но и представить внутриядерное распределе­ние хроматина. При такой окраске хроматин ядра приобретает пурпурный или фиолетово-пурпурный цвет, тогда как цитоплазма ос­тается бесцветной (концентрация митохондриальной ДНК слишком мала для проявления).

При малом увеличении на срезе легкого видны бронхи разного калибра, сосуды, заполненные эритроцитами, и межальвеолярные перегородки, разделяющие альвеолы. Стенка альвеолы наиболее удобна для рассмотрения ядер при большом увеличении. Клетки альвеолярного эпителия имеют довольно крупные оваль­но-округлые ядра, окрашенные на препарате в пурпурный цвет. Струк­туру ядер клеток следует рассмотреть под иммерсионным объективом. Ядра клеток относительно светлые, так как основная масса хромати­на в них тонкоструктурирована. Конденсированный гетерохроматин выявляется в виде интенсивно окрашенных глыбок.

Тема 9. Репродукция клеток. Митоз, амитоз изучение митоза в клетках корешка лука (препарат 21)

(окрашено железным гематоксилином)

В корешке лука при малом увеличении микроскопа можно разли­чить три зоны: 1 (концевую часть, состоящую из тонкостенных кле­ток, слущивающихся на периферии) 2 ( зону деления клеток - мерис­тему) и 3 ( зону роста, или растяжения, состоящую из вытянутых прямоугольных клеток). Деление клеток происходит только во вто­рой зоне.

При большом увеличении следует детально рассмотреть клетки как неделящиеся, находящиеся в стадии интерфазы, так и клетки во всех стадиях митоза. В интерфазе клетки имеют прямоугольные очертания и четко обозначенную оболочку. Ядра округлой или овальной формы содер­жат мелкие глыбки хроматина и более интенсивно окрашенные в тем­ный цвет 1-2 крупных ядрышка.

В ранней профазе в ядре еще хорошо заметны ядрышки и ядерная оболочка, а также более крупные, чем в интерфазе глыбки хромати­на. Затем ядрышки и ядерная оболочка исчезают, и в результате конденсации ДНК появляется клубок сначала тонких, а позднее бо­лее толстых нитей хромосом. На препарате позднюю профазу можно идентифицировать по рыхлому клубку хромосом, свободно лежащих в цитоплазме клеток.

В метафазе хромосомы перемещаются в плоскость экватора клет­ки. В экваториальной пластинке хромосомы располагаются центромерными участками друг к другу, а плечи их обращены наружу. В ре­зультате они формируют фигуру, напоминающую звезду (материнская звезда). В метафазе завершается формирование митотического аппа­рата деления, который представлен микротрубочками, тянущимися от полюса к полюсу и от кинетохоров хромосом к полюсам. Следует заметить, что у высших растений митотический аппарат функциони­рует без участия центриолей, которые у них не обнаруживаются.

В анафазе происходит расхождение к полюсам половинок хромо­сом - хроматид, которые появились в результате репликации ДНК еще в синтетический период интерфазы. На полюсах хромосомы повернуты центромерными участками к полюсам, а их плечи обращены к центру клетки. Формируются, так называемые дочерние звезды, хорошо различимые на препаратах.

Телофаза начинается с деконденсации хромосом и продолжается до полной реконструкции ядра: восстановления ядерной оболочки и ядрышка и полной деконденсации хромосом.

Одновременно в центре клетки начинает образовываться перего­родка, которая у растительных клеток растет от центра к перифе­рии и делит клетку на две дочерние. Перегородку можно заметить, слегка опустив конденсор. У растительных клеток в отличие от жи­вотных образуется не перетяжка цитоплазмы, а именно перегородка, вследствие чего форма клеток всегда остается прямоугольной.

ИЗУЧЕНИЕ МИТОЗА В КЛЕТКАХ ПЕЧЕНИ АКСОЛОТЛЯ

(препарат 22)

(окрашено железным гематоксилином)

При рассмотрении препарата на малом увеличении микроскопа следует остановить внимание на краевой зоне среза печени аксо­лотля. В этой зоне, состоящей из 3-4 рядов клеток, можно увидеть фигуры митоза. В центральной зоне, представленной крупными клетками с округлыми интенсивно окрашенными ядрами, митотически делящихся ядер не обнаруживается. При большом увеличении в краевой зоне среза печени можно отыскать клетки в стадии интерфазы и на различных стадиях митоза.

ИЗУЧЕНИЕ ПРЯМОГО ДЕЛЕНИЯ (АМИТОЗА) В КЛЕТКАХ ДЕСЦИМЕТОВОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА ЛОШАДИ (препарат 23)

(окрашено гематоксилин – эозином)

В препарате, полученном путем отпечатывания внутренней сторо­ны оболочки глаза на предметном стекле с его последующей фик­сацией и окраской, видны крупные клетки. Это эпителиальные клет­ки, находящиеся в состоянии деления. Вокруг них сконцентрированы более мелкие клетки - лейкоциты.

При большом увеличении следует рассмотреть эпителиальные клет­ки. В них видны бледно - фиолетовые ядра со слабо различимыми ядрышками. В некоторых клетках обнаруживается два и больше ядер, имеющих различную форму и размеры. Двуядерные клетки появляются в результате амитоза - прямого деления клетки. В них ядра либо близко расположены друг к другу, либо уже отошли на некоторое расстояние. Это зависит от того, насколько далеко продвинулось деление клетки. Можно увидеть клетки с сильно вытянутыми и реже перешнурованными ядрами.

Прямое деление интерфазных ядер без равномерного распределе­ния наследственного материала между дочерними клетками встреча­ется, как правило, в старых или обреченных на гибель клетках.