3 курс / Фармакология / Диссертация_Куркин_Д_В_Противодиабетические_свойства_и_некоторые

211

Комбинация метформина с ситаглиптином, вводимая перорально в течении 28-дней «лечения», более существенно, чем каждый препарат,

вводимый отдельно, ограничивала развитие сенсомоторного дефицита у животных с эксприментальным СД и ХНМК. Так, животные этой группы на

32% и 36%; 19% и 25% быстрее обнаруживали и снимали пластырь,

закрепленный на волярной поверхности передних лап. При этом они делали это только на 20% и 6%; 13% и 6% дольше по сравнению с результатами тестирования, проведенного через 14 дней после начала лечения. Менее половины (33%) животных не сняли пластырь за 3 минуты с одной лапы и менее четверти (22%) с двух.

Курсовое введение животным с экспериментальным СД и ХНМК соединения ZB-16 оказывало более выраженное церебропротективное действие, чем применение метформина и ситаглиптина, значительнее уменьшая время обнаружения и удаления инородного предмета с лап животными. Так, они обнаруживали инородный предмет на 16% и 22%

быстрее контрольных и быстрее удаляли его на 16% и 21%, для левой и правой лапы соответственно. Обнаруживали и удаляли пластырь с лапки животные на 29% и 18%; 10% и 8% (для левой и правой лап соответственно)

медленнее, чем через 14 дней после начала лечения. При этом только 33%

животных не сняли пластырь с одной лапки и 22% с двух, что соответствует показателям группы, которую 28 дней лечили комбинацией метформина и ситаглиптина.

Комбинированное введение ZB-16 с метформином, но не с ситаглиптином, оказывает более выраженное гипогликемическое и церебропротективное действие, чем применение препаратов поотдельности или комбинации метформина с ситаглиптином. Так, животные с экспериментальным СД и ХНМК, которым в течение 28-дней перорально вводили ZB-16 в комбинации с метформином, на 37% и 35%; 30% и 33%

быстрее контрольных обнаруживали и удаляли лейкопластырь с лапок, но на

17% и 29%; 2% и 13% делали это медленнее, чем через 14 дней после начала

212

лечения, что было быстрее, чем в остальных группах с комбинированной патологией вне зависимости от проводимой терапии. Таким образом,

соединение ZB-16, и более выраженно его комбинация с метформином,

оказывает не только гипогликемическое действие, но и ограничивает развитие сенсомоторных нарушений вследствие экспериментального СД и ХНМК, отмеченных у животных, не получавших «лечение». При этом необходимо отметить, что оказываемое влияние соединения ZB-16 в

отношении ограничения развития сенсомоторного дефицита было более выражено, чем у метформина, а гипогликемическое менее, что указывает на наличие дополнительного и иного, чем снижение гипергликемии, механизма церебропротективного действия ZB-16.

Рисунок 59. Скорость мозгового кровотока животных СД и ХНМК через 28 дней лечения соединением ZB-16, метформином, ситаглиптином и их комбинациями. Обозначения: различия достоверны при р ≤ 0,05,

критерий Дана

На завершающем этапе данного исследования у всех экспериментальных животных оценивался уровень мозгового кровотока.

Этот показатель достоверно различался у интактных животных, тех, которым только стенозировали ОСА или моделировали экспериментальный СД, а

214

Рисунок 60. Единичные гиперхромные клетки коры больших полушарий. Моторная область коры головного мозга крысы

(экспериментальный сахарный диабет). Окраска тионином по методу Ниссля. Увеличение x 400

Нейроны пирамидного слоя СА1 поля располагались компактно, имели округлую форму ядра с четко визуализируемым ядрышком, равномерным распределением хроматина (Рисунок 60). Перикарионы нейронов имели близкую к округлой форму, с равномерным распределением субстанции Ниссля в цитоплазме. Как и у интактных животных, у крыс с месячным экспериментальным СД визуализировались единичные гиперхромные нейроны. В СА3 поле нейроны пирамидного слоя располагались менее компактно, часть клеток имело округлую, а часть полигональную форму с четко визуализируемым ядром. Большинство нейронов характеризовалось неравномерной базофилией цитоплазмы, с более интенсивной окраской по периферии перикарионов. Также, как и в СА1 поле, обнаруживались гиперхромные клетки, характеризующиеся незначительным уменьшением размеров перикариона, усилением базофилии цитоплазмы, наличием темных и пикноморфных ядер. Выраженная гиперхромия нейронов обнаруживалась редко. Со стороны нейронов других зон гиппокампа, зубчатой извилины значимых патоморфологических изменений выявлено не было.

215

Рисунок 61. Умеренно выраженная гиперхромия нейронов пирамидного слоя вентрального гиппокампа (СА3). Головной мозг крысы (экспериментальный СД). Окраска тионином по методу Ниссля.

Увеличение x 400

У животных, которым кровоток по сонным артериям ограничивали до

50% от начального, микроскопическое исследование выявило различие в выраженности морфологических изменений в структурных образованиях лимбической системы и коры головного мозга. В структурах гиппокампа наблюдались распространенные патоморфологические изменения, носящие умеренный характер, в то время как в церебральной коре они были более

выражены (Рисунок 61).

В моторной и соматосенсорной областях коры выявлялись участки некротических изменений, захватывающих все слои. Данные участки характеризовались тотальной гиперхромией и гомогенизацией цитоплазмы нейронов и глиальных клеток. Ядра в большинстве клеток не визуализировались. Отмечалось увеличение численной плотности клеток микроглии. Имели место выраженные признаки периваскулярного и перицеллюлярного отека. В случае отсутствия некрозов преобладали признаки гиперхромии и сморщивания клеточных тел, зачастую распространяющиеся на все слои коры. У части животных обнаруживались

очаги клеточного выпадения, затрагивающие преимущественно

216

ганглионарный слой, и в меньшей степени нейроны II, III, IV слоев коры

больших полушарий.

Рисунок 62. Выраженное сморщивание нейронов коры больших полушарий. Моторная область коры головного мозга крысы

(двусторонний стеноз ОСА). Окраска тионином по методу Ниссля.

Увеличение x 400

У животных со стенозом ОСА наблюдались умеренные изменения клеток пирамидного слоя СА1 поля вентрального и дорсального гиппокампа в виде появления отдельных нейронов с пикнозом и гиперхромией ядер и гомогенизацией цитоплазмы. В СА3 поле изменения носили более распространенный характер и выражались в деформации клеточных тел и ядер, усилении базофилии цитоплазмы нейронов. Существенных изменений ядерного аппарата нейронов пирамидного слоя не наблюдалось.

Морфологические изменения нервных клеток зубчатой извилины животных с ХНМК принципиально не отличались от изменений, наблюдаемых у интактных животных. Выраженные морфологические изменения в структурах, отвечающих за выполнение сенсомоторной функции, очевидно,

были причиной негативных результатов, полученных при проведении адгезивного теста (Рисунок 62).

217

Рисунок 63. Значительное количество деформированных пикнотических нейронов пирамидного слоя СА3. Головной мозг крысы

(двусторонний стеноз ОСА). Окраска тионином по методу Ниссля.

Увеличение x 400

При гистологическом исследовании структур головного мозга животных, которым был смоделирован стеноз ОСА и ЭСД, выявлены выраженные патоморфологические изменения. Прежде всего, обращает на себя внимание наличие выраженных кортикальных некрозов у 30%

экспериментальных животных. Как правило некротические изменения захватывали все слои церебральной коры и затрагивали преимущественно моторный и соматосенсорный отделы. Вокруг очагов некроза и клеточного опустошения отмечалась микроглиальная реакция. У 70% животных в данных отделах церебральной коры регистрировались стереотипные морфологические изменения. Большинство нейронов ганглионарного слоя характеризовалось сморщиванием клеточных тел, умеренным усилением базофилии цитоплазмы, наличием пикнотических, деформированных ядер с сохранным ядрышком. Встречались единичные клетки с резко гиперхромной цитоплазмой, в которой не определялось базофильное вещество. У

отдельных животных наблюдались распространенные изменения нейронов и глиальных клеток 1-го слоя энторинальной коры в виде сморщивания,

деформации и гиперхромии клеточных тел (Рисунок 63).

218

Рисунок 64. Очаги некроза и мелких кровоизлияний, а также выраженное сморщивание нейронов коры больших полушарий.

Моторная область коры головного мозга крысы (комбинация двустороннего стеноза ОСА с экспериментальным СД). Окраска тионином по методу Ниссля. Увеличение x 400

При изучении структур лимбической системы выявлены умеренные патоморфологические изменения. Значимые изменения в виде сморщивания и деформации некоторых нейронов фиксировались только в пирамидном слое СА3 зоны гиппокампа. Зачастую клетки приобретали вытянутую и извитую форму. Деформированные, пикноморфные ядра хорошо визуализировались на фоне гиперхромной цитоплазмы. У половины экспериментальных животных выявлялись участки пирамидного слоя,

характеризующиеся резким сморщиванием и деформацией клеточных тел,

гомогенизацией цитоплазмы пикнозом и гиперхромией ядер. В единичных случаях изменения носили некробиотический характер с резким просветлением и гомогенизацией цитоплазмы признаками кариолизиса и, в

конечной стадии, распадом клетки на фрагменты. В других зонах гиппокампа встречались лишь единичные сморщенные, гиперхромные клетки.

Изменения нейронов зубчатой извилины носили минимальный характер и принципиально не отличались от интактных животных (Рисунок 64).

219

Рисунок 65. Значительное количество деформированных пикнотических гиперхромных нейронов пирамидного слоя СА3.

Головной мозг крысы (комбинация двустороннего стеноза ОСА с экспериментальным СД). Окраска тионином по методу Ниссля.

Увеличение x 400

Выраженные патоморфологические изменения у животных с ЭСД и ХНМК, которым в течение 28-дней перорально вводили ситаглиптин,

фиксировались в моторной области коры, что коррелирует с результатами,

полученными при проведении адгезивного теста. У отдельных животных наблюдались явления выраженных кортикальных некрозов с тяжелыми дегенеративными изменениями в виде сморщивания нервных клеток резко выраженной гиперхромии ядра и цитоплазмы. В то же время часть нейронов характеризовалась просветлением и гомогенизацией цитоплазмы перикарионов. У большей части крыс данной экспериментальной группы, в

моторных областях коры, выявлялись обширные области нейродегенеративных изменений, захватывающих преимущественно верхние слои (II, III), а иногда распространяющиеся на III, IV, V коры больших полушарий. В других функциональных отделах коры фиксировались умеренные изменения в виде мелких очагов гиперхромных клеток,

локализующиеся в наружном и внутреннем зернистом, пирамидном, а также ганглионарном слоях церебральной коры (Рисунок 65).

220

Рисунок 66. Выраженный гиперхроматоз нейронов коры больших полушарий. Моторная область коры головного мозга крысы

(комбинация двустороннего стеноза ОСА с экспериментальным СД на фоне лечения ситаглиптином). Окраска тионином по методу Ниссля.

Увеличение x 400

В СА1 поле гиппокампа патоморфологические изменения носили слабовыраженный характер. В пирамидном слое встречались единичные

«темные» нейроны, что было характерно и для животных без экспериментального воздействия (интакт). В то же время в СА3 изменения носили более значимый характер. Фиксировались протяженные участки пирамидного слоя со значительными дистрофическими изменениями.

Нервные клетки теряли сферичность, деформировалось и удлинялось ядро.

усиливалась базофилия цитоплазмы. В отдельных нейронах выраженные гиперхромные изменения цитоплазмы и ядер затрудняли визуализацию ядра.

Кроме того, обнаруживались нейроны с резкой деформацией клеточных тел,

тигролизом, гомогенизацией цитоплазмы и признаками кариолизиса

(Рисунок 66).