3 курс / Фармакология / Диссертация_Куркин_Д_В_Противодиабетические_свойства_и_некоторые

173

При гистологическом исследовании ткани поджелудочной железы у животных, получавших соединение ZB-16 в дозах 0,1 и 1 мг/кг, размеры панкреатических островков и их количество были сопоставимы с интактной группой (или выше). У животных, которые курсом получали соединение ZB16, фиксировалась большая относительно контрольной группы (СД+физ.

раствор) абсолютная и относительная площадь иммунореактивного материала, а также количество инсулин-позитивных β-эндокриноцитов в панкреатических островках во всех отделах железы. При морфометрическом исследовании отмечалось достоверное увеличение площади и периметра панкреатических островков на 510% (p < 0,01) и 140% (p < 0,001)

соответственно, а также возрастание абсолютной и относительной площади инсулин-позитивных эндокриноцитов в панкреатических островках при окрашивании антителами к инсулину по сравнению с контрольной группой

(СД) на 1136% (p < 0,001) и 18,7% (p < 0,001), соответственно. По сравнению с интактной группой площадь панкреатических островков в группе ZB-16 (1

мг/кг) была незначительно выше (на 4,5% (p > 0,05)), отмечена тенденция к снижению периметра панкреатических островков на 3,6% (p > 0,05),

абсолютной площади инсулин-позитивных эндокриноцитов на 44,0% (p > 0,05), а относительная площадь инсулин-позитивных эндокриноцитов была ниже на 25,5% (p < 0,001). Содержание Ki-67 и каспаза-3 в исследуемых образцах группы, получавшей соединение ZB-16, было выше и соответственно ниже, чем в контрольной группе, что свидетельствует об активации процессов регенерации и снижении апоптотических процессов в ткани поджелудочной железы после стрептозотоциновой интоксикации

(рис.37, рис.38, рис.39, рис.40, рис.41, рис.42).

При морфометрическом исследовании ткани поджелудочной железы животных, получавших соединение ZB-16 в дозе 1 мг/кг, отмечалась более низкая абсолютная и относительная площадь каспаза-3-позитивных эндокриноцитов на 41,9% (p < 0,05) и на 4,9% (p < 0,001), соответственно,

что свидетельствует об уменьшении количества эндокриноцитов

174

панкреатических островков в состоянии апоптоза при пероральном введении

ZB-16 (1 мг/кг). В то же время значения относительной площади каспаза-3-

позитивных эндокриноцитов в панкреатических островках были практически равны зафиксированным в контрольной группе. Следует отметить, что абсолютная площадь каспаза-3-позитивных эндокриноцитов была меньше на

35,9% (p < 0,001) по сравнению с интактной группой, что может отражать уменьшение количества и/или размеров иммунореактивных эндокриноцитов при нормализации размеров островков.

Рисунок 37. Эндокринная часть (островок) поджелудочной железы крысы СД+ZВ-16 (1 мг/кг). Увеличение количества инсулин-

позитивных β-эндокриноцитов. ИГХ с АТ против инсулина. Об. Х 40

175

Рисунок 38. Эндокринная часть (островок) поджелудочной железы крысы СД+ZВ-16 (1 мг/кг). ИГХ с АТ против Ki-67. Об. Х 40

Рисунок 39. Эндокринная часть (островок) поджелудочной железы крысы СД+ZВ-16 (1 мг/кг). Отсутствие цитоплазматической экспрессии каспаза-3 в эндокриноцитах. ИГХ с АТ против каспаза-3. Об. Х 40

При проведении иммуногистохимического исследования с использованием антител против инсулина выявлена умеренно выраженная экспрессия иммунореактивного материала, большая абсолютная и

176

относительная площади иммунореактивного материала, количество инсулин-

позитивных β-эндокриноцитов в панкреатических островках во всех отделах железы по сравнению с значениями, зафиксированными в ткани животных,

не получавших лечения.

При проведении иммуногистохимического исследования с использованием антител к белку Ki-67 (маркер пролиферации) в ткани животных, получавших соединение ZB-16 в дозе 0,1 мг/кг, отмечалось большее количество ядерной экспрессии иммунореактивного материала в мелких (предположительно камбиальных) клетках панкреатических островков и в единичных эндокриноцитах. Иммуногистохимическое исследование с использованием антител против каспаза-3 показало, что у некоторых животных, получавших соединение ZB-16 в дозе 0,1 мг/кг,

отмечалось наличие единичных эндокриноцитов панкреатических островков с экспрессией иммунореактивного материала.

При морфометрическом исследовании была отмечена тенденция к увеличению абсолютной площади каспаза-3-позитивных эндокриноцитов на

51,1 % (p > 0,05) и значимое снижение относительной площади каспаза-3-

позитивных эндокриноцитов в панкреатических островках по сравнению с контрольной группой (СД) на 3,4 % (p < 0,001) соответственно, что свидетельствует об уменьшении количества эндокриноцитов панкреатических островков в состоянии апоптоза при коррекции ZB-16 (0,1

мг/кг) по сравнению с контрольной группой (СД). В то же время значения относительной площади каспаза-3-позитивных эндокриноцитов в панкреатических островках были сопоставимы с значениями,

зафиксированными в тканях животных, не получавших лечения. Следует отметить значимое увеличение абсолютной площади каспаза-3-позитивных эндокриноцитов на 66,5 % (p < 0,001) по сравнению с интактной группой, что может отражать увеличение количества и/или размеров иммунореактивных эндокриноцитов при нормализации размеров островков.

178

Рисунок 42. Эндокринная часть (островок) поджелудочной железы

крысы СД+ZВ-16 (0,1 мг/кг). ИГХ с АТ против каспаза-3. Об. Х 40

Таким образом, морфологические изменения, обнаруженные в группе,

получавшей плацебо, включают очаговую гиперемию поджелудочной железы (рис.43), связанную с фокальной лимфоидной инфильтрацией внутриполостной соединительной ткани или в некоторых случаях с интерстициальным отеком. Эндокринные клетки и их ядра были гипертрофированы. Окрестность островков поджелудочной железы частично инфильтрирована лимфоцитами. Островки поджелудочной железы имели неправильные формы и контуры, их размер и число резко уменьшались по сравнению с таковыми у интактной группы. Гипогликемическое действие

ZB-16, описанное выше, может быть связано с частичным восстановлением

β-клеток поджелудочной железы.

179

Рисунок 43. Обобщенные морфологические изменения в островках поджелудочной железы, окрашенных мышиными моноклональными антителами к инсулину с диаминобензидином в качестве хромогенного субстрата и дополнительной окраской с помощью гематоксилина в увеличении х10 и х40

Результаты морфометрического анализа, представленные на Рисунок

44, показывают, что размер и площадь островков поджелудочной железы у животных с экспериментальным СД значительно снижались по сравнению с интактной группой. Введение нового агониста GPR119 приводит к увеличению пролиферации и подавлению апоптоза в инсулинположительных эндокринных клетках, следствием чего, очевидно, является более интенсивное восстановление островков поджелудочной железы. Поскольку размер β-эндокринных клеток был сопоставим с размерами подобных клеток в контрольной группе, предполагается, что увеличение числа β-эндокринных клеток происходит из-за пролиферации и дифференциации камбиальных клеток, снижающих тяжесть атрофических изменений.

180

Рисунок 44. Обобщенные морфометрические данные изменений в островках поджелудочной железы

6.4Заключение

Патогенетические механизмы, вызывающие СД2, являются комплексными и помимо нарушения утилизации глюкозы,

инсулинрезистентности и повреждения инсулярного аппарата β-клеток поджелудочной железы включают и снижение инкретинового эффекта.

Известно, что инкретины стимулируют рост и дифференцировку β-

клеток поджелудочной железы, влияя на аналогичные процессы в стволовых/прогениторных клетках, а также оказывают цитопротективное,

антиапоптотическое воздействие на β-клетки.

В настоящем исследовании показано, что терапевтическое пероральное курсовое введение агониста GPR119 соединения ZB-16 повышает секрецию ГПП-1 и инсулина, оказывает выраженное гипогликемическое действие и подавляет секрецию глюкагона, а также оказывает защитное и/или репаративное действие на клетки поджелудочной железы крыс в условиях