- •Рецензенты:
- •1.2. Статус клинико-диагностической лаборатории
- •1.4. Организация рабочих мест и оснащение клинико-диагностической лаборатории
- •1.5. Правила безопасной работы в лаборатории
- •1.5.1. Санитарно-противоэпидемический режим в клинико-диагностической лаборатории
- •1.5.2. Средства индивидуальной защиты
- •1.5.3. Правила обеззараживания использованного биологического материала
- •1.5.4. Способы и средства дезинфекции и стерилизации изделий медицинского назначения в кдл
- •1.5.5. Противопожарная безопасность в кдл
- •1.5.6. Правила безопасной работы с едкими веществами (кислоты, щелочи)
- •1.5.7. Первая помощь пострадавшим в лаборатории
- •2.2. Средства пробоподготовки в лаборатории. Дозирующие устройства
- •2.3. Центрифугирование
- •2.4. Перемешивающие и термостатирующие устройства
- •2.5. Весоизмерительная техника
- •2.6. Лабораторные реагенты
- •Правила хранения химических реактивов
- •2.7. Правила приготовления растворов
- •Например, широко используемый для работы с клетками крови фосфатный буфер (рН 5,8-8,2) приготавливается следующим образом:
- •2.7.1. Определение рН растворов
- •2.7.2. Фильтрование
- •2.7.3. Определение плотности растворов
- •2.7.4. Измерение температуры растворов
- •2.8. Оборудование клинико-диагностической лаборатории
- •3.2. Запрос на анализ
- •3.3. Взятие материала
- •3.6. Выбор метода и режима исследования
- •3.7. Обеспечение качества лабораторных исследований
- •3.7.1. Система управления качеством лабораторных исследований
- •3.8. Представление результатов лабораторных исследований
- •3.9. Принципы оценки результатов лабораторных исследований
- •3.9.2. Референтные интервалы лабораторных показателей
- •4.1.1. Основные условия измерений при работе с фотометрической аппаратурой
- •4.1.2. Способы измерений, расчета и представления результатов фотометрии
- •4.2.1. Способы детекции результатов иммунохимической реакции
- •4.2.2. Краткий обзор некоторых иммунохимических тестов
- •4.2.3. Радиоиммунологический анализ
- •4.2.4. Иммуноферментный анализ
- •4.2.5. Иммуноблотинг
- •4.3. Методы фракционирования биологических жидкостей
- •4.3.2. Электрофорез
- •Иммуноэлектрофорез
- •Электрофорез с последующей иммунофиксацией
- •4.4. Методы микроскопии в клинико-диагностической лаборатории
- •4.4.1. Методы световой микроскопии
- •4.4.2. Современные микроскопические приборы
- •Инвертированные микроскопы проходящего света
- •Люминесцентный микроскоп
- •4.4.3. Уход за микроскопом
- •4.5. Сухая химия
- •4.6. Молекулярно-биологические методы исследований
- •4.6.1. Применение пцр в клинической практике
- •4.6.2. Пцр в реальном времени
- •Глава 1. Введение
- •Глава 2. Цель, задачи, критерии контроля качаства
- •Глава 3. Контрольные материалы
- •Глава 4. Этапы лабораторных исследований, подлежащие контролю качества
- •Глава 5. Проведение внутрилабораторного контроля
- •Глава 6. Стадии внутрилабораторного контроля
- •Глава 1. Введение
- •Глава 2. Цель и задачи
- •Глава 3. Организация внешнего контроля качества
- •Глава 4. Мероприятия внешнего контроля качества
- •Глава 5. Статистическая обработка и оценка результатов внешнего контроля качества
4.1.1. Основные условия измерений при работе с фотометрической аппаратурой
1. Материал оптической кюветы и толщина рабочего слоя. Оптическая плотность вещества в растворе находится в прямо пропорциональной зависимости от толщины рабочего слоя, то есть чем толще рабочий слой кюветы, тем выше будет оптическая плотность измеряемых в ней растворов вещества. Поэтому при расчете результатов фотометрии толщина рабочего слоя (так называемая «длина оптического пути») должна обязательно учитываться. При проведении измерения в видимом спектре применяют оптические кюветы из обычного стекла, с толщиной 5, 10, редко 3 мм. Оптимальным в смысле чувствительности, точности и удобства работы оказываются кюветы с длиной оптического пути 1 см, что и реализовано в большинстве фотометров.
Для измерений в ультрафиолетовой области спектра используется материал, не поглощающий ультрафиолетовые лучи – увиолевое, реже кварцевое стекло, толщина кюветы 10 мм.
2. Длина световой волны. Как правило, для фотометрии выбирается та область спектра, где поглощение анализируемого вещества максимально. Это увеличивает точность количественного измерения и повышает его чувствительность. С другой стороны, учитывается возможность адсорбции света холостой пробой (реактивом сравнения). Для уменьшения интерференции посторонних веществ производят вычитание значений холостой пробы из опытной (холостая проба содержит то же, что и опытная, за исключением анализируемого материала).
В рутинной клинической практике необходимая для осуществления той или иной методики длина волны указывается в описании к выполнению метода и зависит, в первую очередь от физико-химических свойства исследуемых растворов. Визуально они могут быть: а) прозрачные неокрашенные; б) мутные неокрашенные; в) прозрачные окрашенные. Вариант «мутные окрашенные» растворы в строгом смысле исследованию не подлежит.
Прозрачные неокрашенные растворы фотометрируют обычно в ультрафиолетовом диапазоне (например, определение содержания молекул средней массы в сыворотке или плазме крови).
Мутные неокрашенные растворы подлежат нефелометрическому (турбидиметрическому) анализу. Наиболее часто используется длина волны 540 нм (зеленый светофильтр) или 640 нм (красный светофильтр).
Если в результате биохимических реакций получают прозрачные окрашенные растворы, то концентрацию веществ определяют колориметрически. Используемая при этом длина волны обусловлена принципом дополнительности цветов исследуемого раствора и светофильтра. Например, для растворов, окрашенных в желтый цвет, используется синий светофильтр (440 нм); для растворов синего цвета – желтый (590нм), иногда красный – 640 нм.
Справка: видимая область спектра – 400-700 нм;
более 700 нм – инфракрасная (в КДЛ практически не используется);
300-400 нм – УФ длинноволновая;
220-300 нм – УФ коротковолновая.
3. Оптическая плотность исследуемого раствора. Если оптическая плотность исследуемого раствора слишком высока, то количество прошедшего через него света соответственно уменьшается и, следовательно, может плохо улавливаться фотоприемником, что резко увеличивает погрешность измерения. Работа с растворами, имеющими слишком низкую оптическую плотность, тоже может увеличивать погрешность измерения, так как закон Ламберта-Бера в таких условиях не выполняется. Поэтому при налаживании методики анализа важно выбрать условия измерения, обеспечивающие максимальную точность.