- •03.02.12 Микология
- •Оглавление
- •Глава 1. Инвазивный кандидоз (обзор литературы)
- •Глава 2 Материалы и методы исследования
- •Глава 3. Результаты собственных исследований
- •3.7 Этиология внутрибольничного инвазивного кандидоза……………………….66
- •Глава 4. Заключение…………………………………………………………………..87
- •Введение
- •Глава 1 инвазивный кандидоз (обзор литературы)
- •1.1 Современное представление о распространенности инвазивного кандидоза
- •1.1.1 Популяционные исследования
- •1.1.2 Многоцентровые исследования
- •1.2 Факторы риска развития инвазивного кандидоза
- •1.3 Этиология инвазивного кандидоза
- •1.2.1 Candida albicans
- •1.2.2 Candida не-albicans
- •1.4 Клинические проявления инвазивного кандидоза
- •1.4.1 Кандидемия и острый диссеминированный кандидоз
- •1.4.2 Кандидозный перитонит
- •1.4.3 Кандидозный менингит
- •1.4.4 Кандидозный эндокардит
- •1.4.5 Кандидозный эндофтальмит, ретинит
- •1.4.6 Кандидоз почек – кандидозные нефриты
- •1.4.7 Кандидозный артрит
- •1.4.8 Поражение кожи
- •1.5 Диагностика инвазивного кандидоза
- •1.5.1 Культуральная диагностика и микроскопия
- •1.5.2 Некультуральные методы исследования
- •1.6 Противогрибковые препараты, используемые для лечения инвазивного кандидоза
- •1.6.1 Полиены
- •1.6.2 Азолы
- •1.6.3 Эхинокандины (ингибиторы синтез глюкана)
- •1.7 Противогрибковая терапия
- •1.7.1 Профилактическая терапия
- •1.7.2 Превентивное лечение
- •1.7.3 Эмпирическая терапия
- •1.7.4 Этиотропная терапия
- •1.8 Летальность больных инвазивным кандидозом
- •Глава 2 материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика исследования
- •2.2 Характеристика обследованных больных
- •2.3 Методы обследования больных
- •2.3.1 Критерии включения и исключения в исследование
- •2.3.2 Клинические исследования
- •2.3.3 Инструментальные методы обследования
- •2.3.4 Микробиологические (микологические) исследования
- •2.3.5 Определение вида Candida spp.
- •2.3.6 Определение чувствительности Candida spp.
- •2.3.7 Серологическая диагностика
- •2.3.8 Методы патоморфологического исследования
- •2.3.9 Критерии диагностики «доказанного» инвазивного кандидоза
- •2.4 Статистическая обработка результатов
- •Глава 3 результаты собственных исследований
- •3.1 Характеристика обследованных больных внутрибольничным инвазивным кандидозом
- •3.2 Частота внутрибольничного инвазивного кандидоза
- •3.3 Фоновые заболевания у больных внутрибольничным инвазивным кандидозом
- •3.4 Факторы риска развития внутрибольничного инвазивного кандидоза
- •3.4.1 Применение внутрисосудистых катетеров
- •3.4.1 Применение антибактериальной терапии
- •3.4.2 Использование искусственной вентиляции легких
- •3.4.3 Оперативные вмешательства
- •3.4.4 Дополнительные факторы риска
- •3.5 Клиническо – лабораторные проявления внутрибольничного инвазивного кандидоза
- •3.5.1 Клинические проявления
- •3.5.2 Лабораторные проявления
- •3.5.3 Выявление очагов диссеминации
- •3.6 Диагностика внутрибольничного инвазивного кандидоза
- •3.7 Этиология внутрибольничного инвазивного кандидоза
- •3.8 Чувствительность возбудителей инвазивного кандидоза к антимикотическим препаратам (clsi m27-a3)
- •3.9 Лечение внутрибольничного инвазивного кандидоза
- •3.9 Оценка выживаемости больных внутрибольничным инвазивным кандидозом
- •3.9.1 Определение выживаемости методом Каплан - Мейера
- •3.9.2 Комплексный анализ суммарного балла благоприятного исхода
- •1 Умершие
- •3.11 Алгоритм диагностики и лечения инвазивного кандидоза
- •3.11 Описание клинических случаев инвазивного кандидоза
- •30 Ноября 2012 г. Впервые консультирован гематологом локб. 04 декабря
- •13 Декабря 2012 г. Больной переведен в отделение онкогематологии-1
- •Глава 4. Заключение
- •Выводы:
- •Список литературы
- •1. Аравийский, р. А. Диагностика микозов. Пособие для врачей. / р. А.
- •4. Гепатолиенальный и ренальный кандидоз в детской гематологии/ л. В.
- •6. Кауфман, Кэрол а. Атлас грибковых заболеваний / под ред. Кэрол а.
- •8. Климко, н. Н. Микозы: диагностика и лечение. Руководство для врачей / н. Н.
- •37.Bille, j. New nonculture-based methods for the diagnosis of invasive candidiasis / j.
- •41.Blot, s. Management of invasive candidiasis in critically ill patients / s. Blot, k.
- •42.Bouza, e. Epidemiology of candidemia in intensive care units / e. Bouza, p. Muñoz
- •134. Incidence, risk factors, and predictors of outcome of candidemia. Survey in 2
- •143. Lass–Flörl, c. The changing face of epidemiology of invasive fungal disease in
2.3.5 Определение вида Candida spp.
Вид возбудителя определяли с применением микроскопического исследова- ния культуры, биохимической тест-системы Auxacolor 2 (BioRad, США), осно- ванной на биохимических свойствах гриба, методом MALDI-TOF масс- спектрометрии, основанном на определении масс-спектра гриба с помощью при- бора «Autoflex Speed» (Bruker, Германия) и сравнением полученных масс- спектров с масс-спектрами базы данных MALDI Biotyper.
При наличии роста проводили микроскопическое исследование, которое позволяет на основании морфологических признаков выявить Candida spp. и ис- ключить грибы другого рода Cryptococcus, Geotrichum, Malassezia, Trichosporon и Aureobasidium.
Auxacolor 2 (BioRad, США) позволяет определить более 30 видов Candida. С помощью этой системы время идентификации гриба составляет от 24 ч до 72 ч. Тест–система включает 13 тестов ассимиляции разных сахаров, среду с циклогек- симидом и тест на фенолоксидазную активность, а также требует учета ряда мор- фологических признаков и способности культуры к росту при температуре 370С.
MALDI–TOF-масс-спектрометрия на масс-спектрометре Autoflex speed TOF
/ TOF (Bruker Daltonics, Германия) в линейном режиме позволяет идентифициро- вать Candida spp. в течение 15 минут. Сбор масс-спектра с образца выполняли в автоматическом и ручном режимах. Идентификация гриба осуществляется при сравнении полученных спектров с референтной базой, с использованием пакета программ MALDI Biotyper 3.1 (Bruker Daltonics). Для дальнейшего анализа выби- рали один из двух масс-спектров с наибольшим коэффициентом достоверности. Для сравнения спектров выполняли построение диаграмм с помощью MALDI Biotyper OC. MSP-дендрограммы стро- или по объединенным выборкам масс-
спектров, полученных из авторских и референтных коллекционных штаммов, на основе которых была создана база для идентификации. В построении кластеров анализа главных компонентов масс-спектров был применен иерархический метод пятой степени [9].
2.3.6 Определение чувствительности Candida spp.
к антимикотическим препаратам (CLSI M27-A3)
Для определения чувствительности к противогрибковым препаратам in vitro использован метод CLSI M27-A3. Чувствительность определения к следующим препаратам: флуконазолу, вориконазолу, позаконазолу и каспофунгину. Для се- рийных микроразведений использовали среду RPMI 1640 с добавлением буфера MOPS до получения ph 7 +/- 0,1 при температуре 25ºC, после культивирования в течение 24 часов был приготовлен инокулят, финальный инокулят в каждой из ячеек содержал 5 х 102 – 2,5 х 103 КОЕ/мл. Инкубацию при температуре 35ºC про- водили в течение 24 и 48 часов. МИК каспофунгина интерпретировали, как наименьшую концентрацию лекарственного препарата, приводящую к достовер- ному снижению мутности, что трактуют как приблизительное снижение роста на
50% по сравнению с контролем, культивируемым без добавления препарата. Оценку чувствительности Candida spp. к флуконазолу, вориконазолу, каспофун- гину и позаконазолу проводили следующим образом: согласно критериям интер- претации метода M27-A3 МИК чувствительных к флуконазолу и каспофунгину штаммов < 2мкг/мл, умеренно чувствительных – 4 мкг/мл, устойчивых > 8 мкг/мл; МИК чувствительных к вориконазолу штаммов – <1 мкг/мл, умеренно чувствительных – 2 мкг/мл, устойчивых – > 4 мкг/мл, к позаконазолу < 1 мкг/мл. Контроль качества исследования проводили с использованием тест – культуры C. parapsilosis.