Физико-химические свойства белков

10. Уметь объяснить амфотерные свойства белков и изменение суммарного заряда белков при различных значениях рН.

11. Знать, что белки являются амфолитами, то есть содержат как положительно, так и отрицательно заряженные группы. Степень ионизации катионных и анионных групп, а следовательно, заряда молекулы белка зависит от значения рН среды. Вспомнить аминокислоты, радикалы которых содержат в своем составе ионогенные группы.

12. Рассмотреть на схеме, как изменится заряд белка при изменении рН среды.

Определить суммарный заряд белка при каждом значении рН.

13. Усвоить понятие:

А) Изоэлектрическое состояние – состояние, когда в белковой молекуле количество положительно заряженных групп равно количеству отрицательно заряженных групп.

Б) Изоэлектрическая точка (рI) – значение рН, при котором белок находится в изоэлектрическом состоянии.

14. Определить, какому положению на схеме соответствует изоэлектрическое состояние белка и в какой области находится его рI. Будет ли белок при этом значении рН перемещаться в электрическом поле?

15. Знать факторы, от которых зависит растворимость белков.

1. Усвоить, что растворимость белков определяется наличием на их поверхности полярных групп, способных взаимодействовать с водой.

2. Знать, что растворимость белков зависит от:

а) свойств белковой молекулы (молекулярной массы, формы молекулы, заряда, количества гидрофильных групп).

б) факторов среды (значения рН раствора, солевого состава раствора, температуры).

16. Знать методы разделения и очистки белков и физико-химические свойства, лежащие в их основе.

1. Систематизировать прочитанный материал с помощью таблицы 3 "Методы разделения и очистки белков".

2.Уметь объяснить принцип каждого метода, основываясь на физико-химических свойствах белков.

3. В основе всех методов разделения белков лежат различия в их физико-химических свойствах.

Таблица 3

методы разделения и очистки белков

№№ пп	Название метода	Принцип метода
1.	Высаливание	Метод основан на способности белков осаждаться при различной степени насыщения растворов белков сульфатом аммония, а также солями щелочных и щелочно-земельных металлов.
2.	Диализ	Метод основан на неспособности белков проходить через полупроницаемую мембрану, в то время как низкомолекулярные вещества проходят через нее. Применяется для очистки от низкомолекулярных соединений.
3.	Гель-фильтрация	Метод основан на различии в размерах молекул белков. Применяется для разделения белков по молекулярной массе, для определения молекулярной массы белков, для очистки от низкомолекулярных соединений.
4.	Ультрацентрифугирование	Метод основан на зависимости скорости седиментации молекул под действием центробежной силы от их молекулярной массы.
5.	Ионнообменная хроматография	Метод основан на взаимодействии заряженных групп белка с ионными группами полимеров - ионообменников.
6.	Электрофорез в полиакриламидном геле	Метод основан на различиях в скорости движения белков по заряду и молекулярной массе.
7.	Афинная хроматография	Метод основан на связывании белка специфическим лигандом, ковалентно присоединенным к нерастворимому полимеру.

Задания

1. Указать аминокислоты, которые принадлежат изображенным ниже радикалы:

2. Классифицировать аминокислоты по полярности радикалов.

1. Иле А. Полярная с катионной группой

2. Аси В. Полярная с анионной группой

3. Глу С. Полярная незаряженная

4. Гис Д. Неполярная

5. Сер

6. Про

7. Мет

8. Цис

3. Написать трипептиды

Гис-Асп-Гли, Ала-Про-Арг, Мет-Глу-Лей, Про-Цис-Лиз

4. Подобрать каждому пронумерованному названию уровня структурной организации белка соответствующее понятие, обозначенное буквой:

1. Первичная структура 2. Вторичная структура 3. Третичная структура 4. Четвертичная структура	А. Пространственное взаиморасположение -спиралей, -структур, обусловленное образование связей между радикалами аминокислот.
	В. Порядок чередования аминоксилот в полипептидной цели.
	С. Объединение в определенном порядке двух или большего количества протомеров в молекулу олигомерного белка.
	Д. Способ укладки пептидной цепи в виде -спиралей, -структур.
	Е. Конформация полипептидной цепи, в образовании которой участвуют эфирные связи.

5. Какому уровню структурной организации белка соответствует каждый пронумерованный тип связи? Подобрать пары.

1. Связь между карбоксильными и аминогруппами радикалов аминокислот.	А. Первичная структура
2. Связь между -амино и -карбоксильными группами аминокислот.	В. Вторичная группа
3. Связь между радикалами цистеина.	С. Третичная группа
4. Водородные связи между атомами пептидного остова
5. Водородные связи между радикалами аминокислот.
6. Межрадикальные гидрофобные взаимодействия.

6. Центр связывания белков с лигандами представляет собой:

1. Совокупность радикалов аминокислот, сближенных на уровне третичной структуры.

2.Фрагмент пептидного остова.

3. Участок поверхности белковой молекулы, комплементарный лиганду.

4. Простетическу небелковую группу белка.

Выбрать наиболее полный и правильный ответ.

7. Подобрать к каждому белку соответствующую функцию, основываясь на классификации белков по функциям.

1. Коллаген А. Структурная

2. Иммуноглобулим В. Сократительная

3. Инсулин С. Транспортная

4. Гемоглобин Д. Каталитическая

5. Актин Е.Защитная

6. Кератин F. Рецепторная

7. Трансферрин G. Регуляторная

8. Мозин

9. Церулоплазмин

10. Каталаза

11. Альбумин

8. Белки клеток, находясь в водном растворе, приобретают такую конформацию, благодаря которой большая часть гидрофобных радикалов аминокислот ориентирована внутрь молекулы. Многие же антисептические средства содержат в своем составе гидрофобные радикалы.

А) Объясните возможный механизм их бактерицидного действия?

Б) Сравните строение двух антисептических средств:

Какой из препаратов лучше растворим в воде? Как из них должен обладать более сильным бактерицидным действием?

9. Денатурация белка сопровождается:

1. Изменение конформации белка.

2. Уменьшением растворимости белка

3. Нарушением связывания белка со специфическими лигандами.

4. Нарушением первичной структуры белка.

10. Установлено, что сродство к кислороду при оксигенации гемоглобина изменяется следующим образом: HB < HbO₂ < Hb(O₂)₂ < Hb(O₂)₃. Причиной увеличения сродства к кислороду каждого из последующих протомеров является (Выбрать один наиболее полный ответ):

1. А. Изменение третичной структуры протомеров.

2. В. Изменение связей, стабилизирующих четвертичную структуру.

3. С. Изменение взаимоположения протомеров.

4. Д. Кооперативные изменения конформации протомеров.

5. F. Изменение расположения атома железа в геме.

11. Какие особенности строения гемоглобина позволяют ему осуществлять функцию переноса кислорода тканям?

1. Олигомерное строение.

2. Способность взаимодействовать с несколькими лигандами в

разных участках молекулы.

3. Согласованность (кооперативность) изменения конформации протомеров при взаимодействии с любым из лигандов.

4. Изменение валентности железа при взаимодействии с кислородом

12. Определить суммарный заряд пентапептида при рН=7:

глу-арг-лиз-вал-асп

Как изменится суммарный заряд этого пептида

а) при рН << 7

б) при рН >>

13. Сравнить направление движения в электрическом поле при рН=? двух пептидов:

а) вал-глу-ала и б) лей-фен-арг.

14. Сравнить растворимость двух пептидов:

I сер-ала-глу-тир-асп

II тре-арг-фен-гис-три

15. С каким из двух пептидов может взаимодействовать Са⁺², при каком значении рН?

16. Подобрать к каждому пронумерованному методу разделения и очистки белков соответствующие различия в свойствах белков, обозначенные буквой:

1. Ультрацентрифугирование А. Различия по растворимости

2. Электрофорез В. Различия по величине заряда

суммарного заряда

3. Гель-фильтрация

4. Ионообменная хроматография С.Различия по молекулярной массе

5. Солевое фракционирование

17. Решить задачу. Дана смесь белков:

Название белка	Молекулярная масса	рI
Церулоплазмин	151000	4,4
-глобулин	150000	6,3
-лактоглобулин	37000	5,2

Выбрать методы, с помощью которых можно разделить смесь белков на индивидуальные белки: указать физико-химические свойства белков, лежащие в основе каждого метода.

Ситуационные задачи.

1. Установлено, что ключевую роль в регуляции биологической активности белков играет процесс фосфорилирования/дефосфорилирования. При этом местом включения фосфатной группы в белок являются гидроксиаминокислоты. Назовите известные Вам гидроксиаминокислоты и напишите их формулы.

2. Коллаген, количественно преобладающий над всеми другими белками в организме человека, имеет необычный аминокислотный состав. В отличие от большинства других белков он очень богат Pro и гидроксипролином. Поскольку гидроксипролин не входит в число 20 аминокислот, обычно присутствующих в белках, его включение в коллаген может идти двумя путями: 1) путем ферментативного гидроксилирования Pro в гидроксипролин перед его включением в коллаген и 2) путем гидроксилирования Pro, уже включенного в состав коллагена. Для того чтобы сделать выбор между этими двумя возможностями, были выполнены следующие эксперименты. Сначала в организм крысы с пищей вводили ¹⁴С-пролин и из хвоста выделяли коллаген. При этом оказалось, что новосинтезированный коллаген радиоактивен. Затем точно так же вводили ¹⁴С-гидроксипролин, но в этом случае в новосинтезированном коллагене радиоактивности не было обнаружено. Как на основе этих экспериментов сделать выбор между двумя рассматриваемыми возможностями?

3. Напишите формулы аминокислот: a) Glu; б) Lys; в) Ser; г) Cys; д) Arg и дайте названия функциональным группам, присутствующим в этих аминокислотах.

4. Пепсин желудочного сока (рН 1,5) имеет изоэлектрическую точку в кислой среде (при значениях рН значительно меньше 7), т.е. намного ниже, чем другие белки. Какие функциональные группы должны присутствовать в пепсине в относительно большом числе, чтобы этот фермент мог иметь такую низкую изоэлектрическую точку? Какие аминокислоты имеют эти группы в своем составе?

5. Аминокислота Gly часто используется в биохимической практике в качестве главной составной части буферного раствора. Аминогруппа Gly, имеющая рК 9,3, может существовать либо в протонированной форме (-NH₃⁺), либо в виде свободного основания (-NH₂), которые находятся между собой в равновесии:

В каком интервале рН Gly может быть использован в качестве эффективного буфера за счет его аминогруппы?

6. Выберите из перечисленных ниже аминокислот те, радикалы которых плохо растворимы в воде (неполярные) и хорошо растворимы в воде (полярные): Ser, Pro, Asp, Ala, Arg, Ile.

7. Смесь Gly, Ala, Glu, Lys, Arg и Ser разделяли методом электрофореза на бумаге при рН 6,0. Ответьте на следующие вопросы:

а) какие соединения двигались к аноду?

б)    к катоду?

в)    оставались на старте?

8. Напишите трипептид Tyr-Arg-Val. Укажите N- и С-концы пептида, пептидный остов и радикалы аминокислотных остатков. Напишите трехбуквенными символами и подсчитайте количество возможных вариантов трипептидов с аналогичным аминокислотным составом.

9. Глутатион играет важную роль в обезвреживании токсических перекисей, образующихся в эритроцитах. Напишите химическую структуру глутатиона, если известно, что он представляет собой трипептид - -глутамил-цистеинил-глицин. Какая функциональная группа, на Ваш взгляд, играет важную роль в его функционировании?

10. В 1900 году русский ученый В.С.Гулевич выделил из водной суспензии мясного фарша соединение, которое было легко растворимо в воде, имело щелочную реакцию и высаживалось из воды спиртом. Поскольку соединение было обнаружено в мясном фарше, оно получило название карнозин (от лат. carnis – мясо). В настоящее время показано сравнительно высокое содержание карнозина в мышечной ткани и некоторых отделах ЦНС, что свидетельствует о его физиологической важности. Напишите химическую структуру карнозина, если известно, что он представляет собой -аланил (-аминопропионовая кислота)–L-гистидин.

11. Для всех аминокислот, за исключением Gly, характерна стереоизомерия. Чем она обусловлена? В этом случае для каждой аминокислоты существуют две возможные конфигурации, известные под названием D- и L-форм (их называют также энантиомерами или стереоизомерами). Раствор одного из стереоизомеров поворачивает плоскость поляризованного света в одном направлении, а раствор другого – в противоположном. Этот эффект носит название оптической активности. Какие стереоизомеры аминокислот входят в состав белков? Как различить D- и L-конфигурации аминокислот?

12. D-циклосерин относится к числу антибиотиков, подавляющих синтез клеточной стенки чувствительных бактерий. Он подавляет активность ферментов аланинрацемазы, превращающей L-Ala в D- Ala, и D-аланил-D-аланинсинтетазы, катализирующей образование пептидной связи между двумя молекулами D- Ala, и тем самым блокирует включение D- Ala в состав стенки бактерий. Напишите химическое строение молекулы D- Ala. Напишите реакции, ингибируемые D-циклосерином. Будет ли оказывать D-циклосерин аналогичное действие на организм человека и животных?

13. Д-изомер изопротеренола (синтетический аналог адреналина  производного аминокислоты Tyr) - лекарственного препарата, применяемого при легких приступах астмы, действует как бронхорасширяющее средство в 50-80 раз активнее, чем L-изомер.

У кажите хиральный центр в молекуле изопротеренола. Почему два энантиомера так сильно различаются по биологической активности?

14. Аномальные Hb, встречающийся в среднем у 1 из каждых 10000 индивидуумов, выявляют обычно электрофоретическим методом. Каковы будут различия в электрофоретическом поведении (в анионной подвижности) при рН 7,0 между нормальным гемоглобином человека и аномальными гемоглобинами S, C, I, E, M_{Милуоки}, D_{Пенджаб}, Цюрих?

    аномальный Hb	нормальный остаток и положение		замена
    -цепь
    I	16 Lys		Glu
    -цепь
    C	6 Glu		Lys
    S	6 Glu		Val
    E	26 Glu		Lys
    Цюрих	63 His		Arg
    ММилуоки	67 Val		Glu
    Dпенджат	121 Glu		Gly

15. Сравните аминокислотные последовательности и функции 2 сходных по структуре и эволюционно близких пептидных гормонов, секретируемых ядрами гипоталамуса, - окситоцина и вазопрессина. Сравните состав и аминокислотные последовательности 2 пептидов. Найдите сходство первичной структуры 2 пептидов и сходство их биологического действия. Найдите различия в структуре 2 пептидов и различие их функций. Сделайте вывод о влиянии первичной структуры пептидов на их функции.

    Гормон	Первичная структура	Физиологическое действие
    Окситоцин	Glu-Leu-Pro-Cys-Asn-Gln-Ile-Tyr-Cys	Сокращение гладкой мускулатуры матки и протоков молочной железы
    Вазопрессин	Glu-Arg-Pro-Cys-Asn-Gln-Phe-Tyr-Cys	Антидиуретическое и сосудосуживающее

16. Для каждой пары аминокислот определите, какая аминокислота в методе ионообменной хроматографии будет сходить с колонки первой (т. е. испытывать наименьшее торможение) при пропускании через колонку буфера с рН 7: а) Asp и Lys, б) Arg и Met, в) Gly и Leu.

17. Какой пептид указанной пары более растворим в заданных условиях, и почему:

а) (Gly)₂₀ или (Glu)₂₀ при рН 7;

б) (Ala-Ser-Gly)₅ или (Ala-Ser-His)₅ при рН 5?

18. При каком значении рН можно легко разделить с помощью электрофореза следующие три дипептида: Gly-Lys, Asp-Val, Ala-His?

19. Какой пептид из каждой пары более растворим в приведенных ниже условиях: а) (Asp)₃ и (Pro)₃ рН 7, б) (Lys-Ala)₂ и (Glu-Ala)₂ рН 2,5.

20. Укажите наиболее вероятное расположение (на поверхности или внутри глобулы) аминокислотных остатков Leu, Asp, Ser, Val, Phe, Lys. Приведите структурные формулы этих аминокислот и дайте обоснованный ответ на первый вопрос.

21. Термическая обработка пищевых продуктов облегчает их расщепление ферментами желудочно-кишечного тракта. Как Вы это объясните? Эту же функцию выполняет НСl, вырабатываемая клетками желудка.

22. Белки клеток, находясь в водном растворе, приобретают конформацию, при которой большая часть гидрофобных радикалов ориентирована внутрь молекулы. Многие же асептические средства содержат в своем составе гидрофобные группы. Объясните возможный механизм их бактерицидного действия. Сравните строение двух антисептических средств: фенола и резорцина.

Какой из препаратов лучше растворяется в воде? Какой из них должен оказывать более сильное бактерицидное действие?

23. Мышьяковистый ангидрид (As₂O₃) применяют в стоматологической практике для некротизации пульпы. На чем основано это действие?

24. В биохимических исследованиях перед определением в биологическом материале низкомолекулярных соединений (глюкозы, мочевой кислоты и др.) обычно из раствора удаляют белки. С этой целью чаще всего используется ТХУ. После добавления ТХУ к крови или сыворотке происходит денатурация белков, от которых легко освобождаются с помощью центрифугирования или фильтрования. Укажите механизм денатурирующего действия ТХУ. Есть ли отличия (и если есть, то какие) в действии кислот и высокой температуры как денатурирующих агентов?

25. В медицине денатурирующие агенты часто применяют для стерилизации медицинского инструмента и материала в автоклавах (денатурирующий агент – высокая температура) и в качестве антисептиков (спирт, фенол, хлорамин) для обработки загрязненных поверхностей, содержащих патогенную микрофлору. Каковы особенности действия вышеуказанных антисептиков как денатурирующих агентов? Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях образуют споры, нечувствительные к действию денатурирующих агентов. Есть ли выход из этого положения? В чем он заключается?

26. -казеин (мол. масса 23600) крупного рогатого скота – один из белков коровьего молока – не содержит остатков Cys и цистина. Кроме того, третичная структура этого белка слабо выражена: его нативная конформация напоминает беспорядочный клубок. В отличие от этого -кератины (белки, содержащиеся в волосах, шерсти, ногтях и т.д.) очень богаты остатками Cys и цистина. К тому же эти белки обладают высокоупорядоченной вторичной и третичной структурами. Объясните, каким образом свойства этих двух групп белков отражаются на их перевариваемости. Почему, в частности, молоко, выпиваемое котенком, служит для него прекрасным источником аминокислот, тогда как его собственный мех не переваривается (“волосяные пробки” могут даже закупорить кишечник).

27. Если шерстяной свитер или шерстяные носки постирать в горячей воде, а затем высушить в электросушилке, они становятся меньше. Исходя из того, что известно о структуре -кератина, как объяснить это явление? Вместе с тем шелк при тех же условиях не дает такой усадки. Объясните, почему.

28. В молекулах целого ряда природных белков содержится большое число остатков цистина. При этом наблюдается корреляция между механическими свойствами белков (прочностью на разрыв, вязкостью, твердостью и т.д.) и содержанием цистина. Например, глутенин (богатый цистином белок пшеницы) определяет вязкость и эластичность теста, приготовленного из пшеничной муки. Точно также твердый и прочный панцирь черепахи обязан этими свойствами высокому содержанию цистина в -кератине, из которого он состоит. Какова молекулярная основа наблюдаемой корреляции между содержанием цистина и механическими свойствами белка?

29. Гистоны - белки, содержащиеся в ядрах эукариотических клеток. Они прочно связаны с ДНК, содержащей много фосфатных групп. Изоэлектрическая точка гистонов  10,8. Какие аминокислотные остатки должны присутствовать в гистонах в относительно больших количествах? Каким образом эти остатки обеспечивают прочное связывание гистонов с ДНК?

30. На графике показана зависимость растворимости двух белков от концентрации (NH₄)₂SO₄.

Как можно использовать эти данные для разделения белков А и В?

31. Большая часть белков растворяется в 0,1 М сульфате аммония, но выпадает в осадок, если концентрация сульфата аммония повышается до 3 М. После удаления избытка сульфата аммония путем диализа белки снова растворяются. Объясните, почему добавление солей в высоких концентрациях приводит к понижению растворимости белка?

32. П атогенные анаэробные бактерии Clostridium perfringens, являющегося возбудителем газовой гангрены, при которой происходит разрушение тканей, выделяют фермент, эффективно катализирующий гидролиз пептидной связи:

где X и Y - любые аминокислоты. Каким образом этот секретируемый в среду фермент помогает бактерии проникать в ткани человека? Почему этот фермент не приносит вреда самой бактерии?

33. Hb S, обнаруженный в эритроцитах больных серповидноклеточной анемией, имеет низкую растворимость в условиях низкого парциального давления кислорода (как это имеет место в венозной крови), что приводит к образованию агрегатов данного белка. Эритроциты приобретают неправильную или серповидную форму и быстрее обычного разрушаются в селезенке. В результате возникает малокровие (серповидноклеточная анемия). Единственное различие в первичной структуре НbА и НbS - в последовательности их N-концевого участка -цепи гемоглобина.

HbA: Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys-

НbS: Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys-

Сравните последовательность аминокислот N-концевого участка НbА и НbS. Выявите различия в их аминокислотном составе и сравните свойства этих аминокислот (полярность, заряд). Сделайте вывод о причине снижения растворимости НbS.

34. При употреблении большого количества сырого яичного белка может развиться (особенно у детей) гиповитаминоз биотина, сопровождающийся специфическим дерматитом (болезнь Свифта). Обнаружено, что в сырых яйцах содержится гликопротеин - авидин. В желудочно-кишечном тракте авидин образует нерастворимый комплекс с биотином. Почему вареные яйца такого эффекта не вызывают?

35. В основе аффинной хроматографии – метода, широко используемого для выделения и очистки белков, содержащихся в гомогенатах тканей в очень низких концентрациях (10^-3 – 10^-6 М), лежит способность белков обратимо связываться со своими лигандами с образованием прочных нековалентных комплексов белок - лиганд. По этому методу лиганд, специфически связывающийся с белком, который необходимо выделить, ковалентно присоединяют к нерастворимым полимерным гранулам диаметром 10-50 мкм. Для выделения этого белка из клеточного экстракта последний вносят в колонку, заполненную полимерными гранулами с присоединенным к ним лигандом, после чего колонку промывают несколько раз буферным раствором. При этом на колонке удерживаются лишь те белки, которые имеют высокое сродство к закрепленному на полимере лиганду; остальные же белки просто вымываются буфером. Поскольку сродство и специфичность белка к лиганду очень высоки, таким путем зачастую можно в один прием выделить и очистить чрезвычайно малые количества белка из клеточного экстракта, содержащего сотни других белков. Каким образом можно получить белок, оставшийся на аффинной колонке, в чистом виде? Объясните, какие принципы лежат в основе предлагаемой операции.

36. В состав многих белков входят остатки Cys, -SH группы которых располагаются на поверхности молекул. При контакте белков с О₂ воздуха происходит окисление -SH групп, в результате образуются дисульфидные мостики (-S-S-), не характерные для нативной структуры белка. Почему функциональная активность белков при этом падает?

37. Некоторые белки содержат в своем составе остатки Cys, участвующие в формировании третичной структуры этих белков (-S-S- связи). Молекула рибонуклеазы содержит 4 дисульфидные связи. В присутствии реагента -меркаптоэтанола (восстанавливающего -S-S- связи до свободных -SH- групп) в 8 М мочевине (разрушающей внутримолекулярные связи), активность фермента падает до нуля. После удаления из раствора реагентов и выдерживания белка в течение суток в определенных условиях происходит окисление -SH- групп кислородом воздуха. Каталитическая активность фермента при этом полностью восстанавливается. Почему обработка фермента -меркаптоэтанолом в 8 М мочевине приводит к падению его активности? Почему возможна ренатурация фермента, приводящая к восстановлению его нативной конформации?

38. У некоторых больных с наследственными нарушениями ферментов, участвующих в распаде глюкозы в эритроцитах, изменяется кривая связывания кислорода с гемоглобином. В эритроцитах таких больных изменяется концентрация 2,3-ДФГ.

Как влияет 2,3-ДФГ на сродство Hb к O₂? Сделайте вывод об изменении концентрации 2,3-ДФГ в случае I и II.

39. П ри физиологических условиях более высоким сродством к кислороду обладает HbF по сравнению с HbA. Если из препаратов HbA и HbF тщательно удалить весь 2,3-ДФГ, кривые их насыщения кислородом сместятся влево (сродство гемоглобинов к кислороду повысится). Однако у HbA сродство к кислороду при этом становится выше, чем у HbF. Если в препараты гемоглобинов вновь добавить 2,3-ДФГ, то кривые насыщения кислородом примут прежний вид, показанный на рисунке.

40. Решить задачу. Дана смесь белков:

Название белка	Молекулярная масса	рI
Церулоплазмин	151000	4,4
-глобулин	150000	6,3
-лактоглобулин	37000	5,2

Выбрать методы, с помощью которых можно разделить смесь белков на индивидуальные белки: указать физико-химические свойства белков, лежащие в основе каждого метода.

Тесты