- •Инструкция к практическому занятию тема: коринебактерии дифтерии и микобактерии туберкулеза
- •Задание № 1 Методы выявления туберкулезной палочки
- •Подготовительный этап:
- •Задание № 2 Специфическая профилактика туберкулеза
- •Задание № 4 Специфическая профилактика дифтерии
- •Задание № 5 Закрепить навык работы с микроскопом
- •Решите задачи:
- •Задача № 5
- •Контрольные вопросы
- •Литература:
Задание № 2 Специфическая профилактика туберкулеза
Специфическая профилактика туберкулеза осуществляется ослабленной вакциной БЦЖ (бациллы Кальметта-Герена). Первичная вакцинация проводится в родильном доме на 3-4 день жизни ребенка. Вакцина вводится внутрикожно в дозе 0,05 мг. Не привитые в роддоме дети вакцинируются щадящей БЦЖ – М – вакциной. Она проводится тоже внутрикожно, но в половинной дозе (0,025 мг на кг). Дети ревакцинируются в возрасте 7 лет, но повторная вакцинация может проводиться и позже, вплоть до 14 лет. В каждом из этих случаев прививки делают лишь тем детям, которые реагируют на туберкулин отрицательной реакцией Манту.
ЗАДАНИЕ № 3 Методы выявления палочки Леффлера
Дифтерия – острая инфекция дыхательных путей, сопровождающаяся тяжелой интоксикацией, образованием в зеве дифтеритической пленки, резким отеком гортани, затруднением дыхания и асфиксией.
При заболеваниях, вызванных коринебактериями дифтерии в лабораторию доставляется следующий материал: отделяемое носоглотки, налет из очага воспаления при дифтерии (материал собирается двумя стерильными тампонами. Один из них используется для приготовления мазков, другой – для засева на среды).
Основной этап:
Бактериоскопическое исследование: Диагностика дифтерии начинается с микроскопии мазков. Обычно делают 2-3 мазка. Коринебактерии дифтерии по Граму окрашиваются в фиолетовый цвет, а другие красители воспринимают неравномерно, поэтому под микроскопом они кажутся зебровидными. Непатогенные коринеформы в цветах однотонны, так как не имеют гранул волютина; в мазках они располагаются беспорядочно.
Бактериологическое исследование: Посев материала производят на скошенную в пробирке лошадиную сыворотку, в чашку Петри с теллуритовым кровяным агаром (среда Клауберга) и на среду Тинсдаля. Состав среды Клауберга: 100 мл расплавленного и охлажденного до 500 2-3% агара, 5-10% дефибринированная кровь, 1 мл 2 % раствора теллурита калия (К2ТеО4). Среду тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри.
Состав среды Тинсдаля: 100 мл расплавленного и охлажденного до 500 МПА, 1 % раствор цистина, 0,1 % раствор НCl – 12 мл, 2% раствор теллурита калия, 2,5 % раствор гипосульфита натрия, нормальная лошадиная или бычья сыворотка – 20 мл. Среду перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри.
Колонии коринебактерии вырастают на свернутой сыворотке через 8-12 часов, имеют желтовато-кремовый оттенок и, что характерно, даже при большом их количестве несклонны к слиянию.
На плотных средах в чашках Петри колонии коринебактерий дифтерии вырастают через 24-48 часов. При этом на теллуритовом кровяном агаре могут формироваться 2 культуральных варианта:
Крупные серовато-черные, шероховатые колонии культиварагравис.
Мелкие черные колонии культивара митис с гладкой выпуклой поверхностью и ровным краем.
Непатогенные коринебактерии образуют сухие, мелкие колонии серого цвета. На среде Тинстадаля колонии коринебактерий дифтерии окружены темно-коричневым ободком.
Для получения чистой культуры микроскопируют и пересевают на сывороточную среду, а затем идентифицируют (определение цистиназы – проба Пинзу, определение фермента уреазы – проба Закса).
Серологическое исследование. Определяют токсигенность, испытывая культуру в реакции преципитации на пластинчатом фосфатно-пептонном агаре, подсевая ее бляшками к расположенной по диаметру чашки полоске фильтровальной бумаги, смоченной антидифтерийной сывороткой. Положительная реакция прямой гемагглютинаци проявляется образованием на границе взаимодействия антитоксина и продуцируемого экзотоксина равномерно сливающихся полос преципитатов.
Биологическое исследование. Токсигекнность штаммов коринебактерий дифтерии in vivo определяют на морских свинках. Введенная внутрикожно культура вызывает у них местный некроз, а подкожная инъекция – летальный исход с экссудацией в серозные полости и увеличение надпочечников до размера вишни.