- •Лабораторная работа № 2
- •По курсу «Основы биотехнологии»
- •Микроскопический метод исследования морфологии микроорганизмов.
- •Методические указания
- •Волгоград 2003
- •1. Цель работы
- •2. Микроскоп и техника микроскопирования
- •Общие правила работы с микроскопом
- •3. Приготовление препарата
- •4. Окрашивание препарата
- •Окраска клеток микроорганизмов го граму
- •5. Порядок проведения работы
- •6. Приборы и реактивы для выполнения лабораторной работы
- •1) Цель работы.
- •7. Техника безопасности
- •8. Контрольные вопросы
- •9. Список используемой литературы
Общие правила работы с микроскопом
Место для микроскопа выбирают дальше от прямого солнечного света. Работа на столе с темной поверхностью меньше утомляет глаза. Лучше смотреть в окуляр левым глазом, не закрывая правого. При работе с бинокулярной насадкой сначала регулируют расстояние между окулярами в соответствии с расстоянием между глазаминаблюдателя так, чтобы поля зрения обоих окуляров сливались в одно.
Переносят микроскоп, держа одной рукой за штатив, другой – за основание микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, соприкосновения с сильнодействующими веществами типа кислот, щелочей. Не рекомендуется вынимать окуляр из трубы, чтобы не загрязнять пылью трубу и объективы. Во время работы желательно защищать микроскоп от дыхания, т.к. конденсация паров ведет к его порче. Линзы должны быть всегда чистыми. Нельзя касаться пальцами оптических поверхностей.
При работе с иммерсионным объективом (90х) устанавливают зеркало плоской стороной и поднимают коненсор. Каплю иммерсионной жидкости (кедрового масла) наносят на препарат, не размазывая по стеклу. Погружать в иммерсионную жидкость можно только иммерсионные объективы (не сухие!).
Глядя сбоку на предметное стекло, опускают объектив до поверхности масляной капли. Далее, глядя в окуляр осторожно опускают объектив при помощи макровинта, следя при этом за появлением изображения. Когда оно появится, для регулирования изображения пользуются микровинтом. Если изображение нерезкое, тусклое или плывет, что-то сделано неправильно: загрязнена фронтальная линза объектива, мешают пузырьки воздуха в масле, случайно закрыта диафрагма, сдвинута лампа или зеркало. Причину некачественного изображения надо устранить.
По окончании работы поднимают тубус, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива хлопчатобумажной салфеткой, смоченной очищенным бензином.
3. Приготовление препарата
Техника взятия культура для приготовления препарата. Пробирку с культурой держат в левой руке почти в горизонтальном положении вблизи спиртовки. Обожженной в пламени бактериологической петлей из пробирки берут небольшое количество микробной массы. Перед взятием культуры правой рукой вынимают ватно-марлевую пробку из пробирки, зажимая ее между мизинцем и ладонью, а края пробирки обжигают на пламени спиртовки. Петлю держат в правой руке большим, указательным и средним пальцем. После взятия культур» края пробирки и пробку обжигают в пламени и закрывают пробку.
Приготовление мазка.
На чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю дистиллированной воды. Прокаленной бактериологической петлей из пробирки с культурой берут небольшое количестве микробной массы и вносят в каплю. Каплю тщательно размазывают петлей по стеклу на площади приблизительно 4 см2. Густую суспензию сначала разводят водой. Для этого стерильной петлей берут немного суспензии и переносят в каплю воды на другое предметное стекло. После приготовления мазок сушат на воздухе при комнатной температуре или слабом нагревании, держа препарат высоко над пламенем спиртовки. Сильное нагревание препарата при сушке не рекомендуется, так как белки коагулируют, искажая структуру и форму клеток. Высушенный препарат фиксируют, медленно проводя три-четыре раза нижней стороной стекла над пламенем спиртовки. Возможна фиксация мазка при помощи химических соединений (хромовые соединения, формалин, ацетон, 96% этиловый спирт или смесь Никифорова - смесь равных объемов этилового спирта и эфира). Для этого препараты погружают на некоторое время в фиксирующую жидкость.