Ход работы
Берут пять пробирок:
в первую добавляют 5 капель разбавленного яичного белка,
во вторую – 5 капель раствора желатина,
в третью – 5 капель растительного альбумина,
в четвертую – 5 капель раствора казеина,
в пятую – 5 капель любой аминокислоты.
В каждую пробирку прибавляют 5 капель 10%-ного раствора NaOH и 2 капли 1%-ного раствора сульфата меди.
Все пробирки тщательно перемешивают. Наблюдают за изменением окраски в пробирках и отмечают, какой цвет появился в каждой из них. Фиолетовый цвет свидетельствует о наличии пептидных связей в белковых молекулах.
Внимание! В пробирки нельзя добавлять избыток сульфата меди, так как синий осадок гидрата окиси меди маскирует характерное фиолетовое окрашивание биуретового комплекса белка.
4.2. Нингидриновая реакция
Ход работы
Берут пять пробирок:
в первую добавляют 5 капель разбавленного яичного белка,
во вторую – 5 капель раствора желатина,
в третью – 5 капель растительного альбумина,
в четвертую – 5 капель раствора казеина,
в пятую – 5 капель любой аминокислоты.
В каждую из пробирок прибавляют 5 капель 0,5%-ного водного раствора нингидрина и кипятят 1–2 мин.
Наблюдают за изменением окраски и отмечают, какой цвет и почему появился в каждой из пробирок. При протекании реакции в пробирке сначала появляется розово-фиолетовое окрашивание, которое постепенно синеет, так как образуется сине-фиолетовый комплекс Руэмана, свидетельствующий о наличии в растворе α-аминокислот.
4.3. Ксантопротеиновая реакция (Мульдера)
Ход работы
Берут пять пробирок:
в первую наливают 5 капель раствора яичного белка,
во вторую – 5 капель раствора тирозина,
в третью – 5 капель раствора желатина,
в четвертую – 5 капель растительного альбумина,
в пятую – 5 капель раствора казеина.
Затем во все пробирки добавляют по 3 капли концентрированной азотной кислоты и осторожно кипятят.
Наблюдают за изменением окраски и отмечают, какой цвет и почему появился в каждой из пробирок. Появление осадка желтого цвета свидетельствует о присутствии циклических аминокислот. После охлаждения в каждую пробирку добавляют приблизительно 10–15 капель 20%-ного раствора щелочи NaОН. Желтое окрашивание растворов переходит в оранжевое вследствие образования натриевой соли динитротирозина. После окончания опыта делают вывод, какие из взятых для опыта веществ содержат циклические аминокислоты, а какие – не содержат.
4.4. Реакция на тирозин (Миллона)
Ход работы
Берут шесть пробирок:
в первую наливают 5 капель раствора яичного белка,
во вторую – 5 капель раствора тирозина,
в третью – 5 капель раствора желатина,
в четвертую – 5 капель растительного альбумина,
в пятую – 5 капель раствора казеина,
в шестую – 5 капель 0,1%-ного раствора фенола.
В каждую пробирку приливают по 3 капли реактива Миллона (раствор ртути в азотной кислоте) и осторожно нагревают.
Появление осадка кровавокрасного окрашивания, которое дает ртутная соль динитротирозина, свидетельствует о наличии циклических аминокислот. Наблюдают за изменением окраски в каждой из пробирок. Отмечают, какой цвет появился в каждой из них. Делают вывод о том, какие из белков – содержат, а какие – не содержат циклические аминокислоты.