III. Порядок выполнения работы

1. Приготовьте раствор сыворочного альбумина (яичного альбумина или пепсина) в воде, имеющий концентрацию 5 мг/мл.

2. Измерить оптическую плотность раствора при 280 ммк в кварцевых прямоугольных кюветах, которая должна быть равна  0,5. При разведении раствора пользоваться формулой D = с  .

3. Установите в рабочее положение фотоэлемент и источник излучения, соответствующие выбранному спектральному диапазону измерений.

4. Закройте фотоэлемент, поставив рукоятку 17 шторки в положение ЗАКР., и рукояткой 8 установите ширину щели примерно 0,1 мм..

5. Включите тумблер СЕТЬ, должна загореться сигнальная лампа СЕТЬ и сигнальная лампа D или сигнальная лампа Н в соответствии с выбранным источником (стабильная работа СФ-26) или другого спектрофотометра после включения в течение 1 часа).

6. Для включения после лампы накаливания дейтериевой лампы переключите конденсор рукояткой 9; после минутного прогрева лампа автоматически загорается, одновременно загорается и соответствующая индикаторная лампа.

7. Установите требуемую длину волны, вращая рукоятку 6 в сторону увеличения длин волн. Если при этом шкала повернется на большую величину, то возвратите ее назад на 3-5 нм и снова подведите к требуемому делению.

8. Поставьте рукоятку 19 в положение «1» (рабочее положение). Если поток излучения недостаточен измеряемый и контрольный образцы значительно поглощают излучение, установите рукоятку в положение «2», «3» или «4». При работе в положении КАЛИБР или «х0,01» рукоятку 16 рукоятку 19 установите также в одно положение «2», «3», «4».

9. Установите на пути потока излучения контрольный образец, перемещая каретку 10.

10. При отсутствии образца сравнения величина потока, проходящего через свободное окно держатся фильтров, принимается за 100% пропускания.

11. Установите стрелку измерительного прибора на нуль рукояткой 18 НУЛЬ.

12. Откройте фотоэлемент, поставив рукоятку 17 шторки в положение ОТКР.

13. Установите стрелку измерительного прибора на деление «100%», вращая рукоятку 8 механизма изменения ширины щели.

14. Установите в рабочее положение измеряемой образец, перемещая каретку рукояткой 10, и снимите отсчет по шкале оптической плотности D через каждые 5 нм в интервале 220-320 нм.

15. Выведите из потока излучения измеряемый образец и введите контрольный образец при этом стрелка измерительного прибора должна вернуться к делению «100%».

16. Данные эксперимента занесите в таблицу 1.

17. Постройте кривую спектра поглощения, откладывая по оси абсцисс длину волны, а по оси ординат оптическую плотность раствора сывороточного альбумина.

Таблица 1

Результаты эксперимента

, нм	230	235	240	245	250
D, %

18. Сделать выводы.

IV Контрольные вопросы

1. Дайте понятие поглощения света.

2. Сформулируйте и объясните закон Бугера.

3. Сформулируйте и объясните закон Бугера-Бера.

4. Дайте понятие селективного поглощения и парникового эффекта.

5. Роль белка в организме.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 26

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ТИРОЗИНА И ТРИПТОФАНА В БЕЛКЕ

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: Изучить значение тирозина и триптофана в белке и определение их содержания .

ПРИБОРЫ И ПРИНАДЛЕЖНОСТИ: спектрофотометр СФ-26 (или аналогичный прибор), раствор яичного белка; 0,1 Н раствор NaOH.

I. Описание экспериментальной установки (СФ-26)

Смотреть лабораторную работу № 25

II. Краткие теоретические сведения.

Исследуя спектры поглощения можно производить количественный анализ смеси двух или нескольких веществ. Для данного анализа необходимо определить величину оптической плотности при двух или при нескольких длин волн

Оптическая плотность равна смеси равна сумме оптических плотностей компонентов:

Д = Д_а + Дв; тогда

и

Решая совместно вышеуказанные уравнения, получим выражение для концентрации веществ А (тирозин) и В (триптофан):

и

где - оптическая плотность смеси при двух длинах волн₁ и ₂;

- молекулярные коэффициенты экстинкции тирозина и триптофана соответственно при тех же длинах волн;

С_а и Св – молекулярные концентрации тирозина и триптофана соответственно.

Длины волн, при которых производятся измерения, выбираются так, чтобы при ₁, поглощая преимущественно тирозин. А при ₂ – триптофан. Точность определения тем больше, чем больше различие молекулярных коэффициентов экстинкции определяемых веществ при каждой из этих двух длин волн. Это условие выполняется в большинстве случаев, если длины волн ₁ и ₂ соответствуют максимумам поглощения компонентов.