- •Тема 1. Предмет, задачи, основные этапы и современные направления развития биохимии. Цель и методы проведения биохимических исследований, их клинико-диагностическое значение.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 2. Исследование строения и физико-химических свойств белков-ферментов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Изучить физико-химические свойства белков-ферментов.
- •Тема 3. Определение активности ферментов. Единицы измерения каталитической активности ферментов. Исследование ферментативных процессов по типу реакций основных классов ферментов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 4. Исследование механизма действия ферментов и кинетики ферментативного катализа.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 5. Исследование регуляции ферментативных процессов.
- •Алгоритм лабораторной работы.
- •Тема 6. Медицинская энзимология.
- •Изменение активности ферментов в тканях может служить критерием биохимической диагностики, а изучение динамики этих изменений указывает на эффективность лечения.
- •Чистые ферменты и их смеси широко используются как лекарственные препараты в терапии, хирургии, офтальмологии и других областях медицины.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 7. Исследование роли кофакторов и коферментных витаминов в каталитической активности ферментов.
- •Тема 8. Исследование роли кофакторов и коферментных витаминов в каталитической активности ферментов.
- •Актуальность темы.
- •Тема 9. Фундаментальные закономерности обмена веществ. Общие пути превращений белков, углеводов, липидов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 10. Исследование функционирования цикла трикарбоновых кислот.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 11. Биоэнергетические процессы: биологическое окисление, окислительное фосфорилирование.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 12. Хемиосмотическая теория окислительного фосфорилирования. Ингибиторы и разобщители окислительного фосфорилирования.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 13. Исследование гликолиза – анаэробного окисления глюкозы.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 14. Исследование аеробного окисления глюкозы.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 15. Альтернативные пути обмена моносахаридов. Метаболизм фруктозы и галактозы.
- •Тема 16. Исследование катаболизма и биосинтеза гликогена. Регуляция обмена гликогена.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 17. Глюконеогенез.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 18. Исследование механизмов метаболической и гормональной регуляции обмена углеводов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 19. Исследование катаболизма и биосинтеза триацилглицеролов. Установление молекулярных механизмов регуляции липолиза.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 20. Транспортные формы липидов.
- •Актуальность темы.
- •Количественное определение β- и пре-β-липопротеидов имеет большое значение для диагностики атеросклероза, ишемической болезни сердца (ИБС), ожирения, хронических заболеваниях печени, так как позволяет выявить повреждение паренхимы печени.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 21. Бэта-окисление жирных кислот. Исследование обмена жирных кислот и кетоновых тел.
- •Тема 22. Биосинтез жирных кислот. Обмен сложных липидов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 23. Биосинтез и биотрансформация холестерола. Исследование нарушений липидного обмена: стеаторея, атеросклероз, ожирение.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 24. Исследование превращений аминокислот (трансаминирование, дезаминирование, декарбоксилирование).
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 25. Биосинтез глутатиона и креатина.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 26. Исследование процессов детоксикации аммиака и биосинтеза мочевины.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 27. Биосинтез порфиринов. Наследственные нарушения обмена порфиринов.
- •БИОХИМИЯ ТКАНЕЙ И ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙ
- •Тема 1. Строение и функции нуклеиновых кислот.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 2. Исследование биосинтеза и катаболизма пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Определение конечных продуктов их обмена.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Знать биохимическую динамику превращения нуклеотидов, основы их патохимии и биохимической диагностики.
- •Индивидуальная самостоятельная работа студента.
- •Подготовить реферат на тему: «Подагра, возможные причины и клинические проявления».
- •Тема 3. Исследование репликации ДНК и транскрипции РНК.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 4. Биосинтез белка на рибосомах. Исследование процессов инициации, элонгации и терминации в синтезе полипептидной цепи. Ингибиторное действие антибиотиков.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 5. Регуляция экспрессии генов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 6. Анализ механизмов мутаций, репараций ДНК. Усвоения принципов получения рекомбинантных ДНК, трансгенных белков.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 7. Исследование молекулярно-клеточных механизмов действия гормонов белково-пептидной природы на клетки-мишени. Гормоны гипоталамуса и гипофиза.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 8. Исследование молекулярно-клеточных механизмов действия стероидных гормонов на клетки-мишени. Стероидные гормоны.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 9. Исследование роли тиреоидных гормонов и биогенных аминов в регуляции метаболических процессов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 10. Гормоны поджелудочной железы. Гормоны пищеварительного тракта.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 11. Гормональная регуляция гомеостаза кальция.
- •Тема 12. Физиологически активные эйкозаноиды.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 13. Исследование процесса переваривания питательных веществ (белков, углеводов) в пищеварительном тракте.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 14. Исследование процесса переваривания питательных веществ (липидов) в пищеварительном тракте.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 15. Исследование функциональной роли жирорастворимых витаминов в метаболизме и реализации клеточных функций.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 16. Исследование белков плазмы крови: белков острой фазы воспаления, собственных и индикаторных белков.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 17. Исследование кислотно-основного состояния крови и дыхательной функции эритроцитов. Патологические формы гемоглобинов.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 18. Исследование азотистого обмена и небелковых азотосодержащих компонентов крови – конечных продуктов катаболизма гема.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 19. Исследование биохимических закономерностей реализации иммунных процессов. Иммунодефицитные состояния.
- •Тема 20. Биохимия печени. Патобиохимия желтух.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •17,1 34,2 51,3 68,4 85,5 102,6 мкмоль/л
- •Тема 22. Исследование нормальных компонентов мочи.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 23. Исследование патологических компонентов мочи.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 24. Биохимия мышц и мышечного сокращения.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 25. Биохимия соединительной ткани.
- •Цель и исходный уровень знаний.
- •Тема 26. Биохимия костной ткани. Факторы риска остеопороза.
- •Тема 27. Биохимия нервной ткани.
- •Цель и начальный уровень знаний.
- •ИТОГОВЫЙ КОНТРОЛЬ УСВОЕНИЯ МОДУЛЯ
- •СОДЕРЖАНИЕ
3. Изучение зависимости активности ферментов от рН среды.
Слюну развести в 10 раз (1 мл слюны + 9 мл воды). В 3 пробирки налить по 1 мл
буферных растворов с рН 3; 7,4; 14. В каждую пробирку отмерять по 1 мл разведенной слюны, по 1 мл 1% раствора крахмала, перемешать и инкубировать 10 мин. при
температуре 38 0 С. После этого под контролем индикаторной бумаги нейтрализовать содержание пробирки с рН 3 - раствором щелочи, а содержание пробирки с рН 14 – раствором 0,1н HCl.
Результат опыта выявить с помощью раствора Люголя, добавляя его по 1-2 кап. в каждую пробирку, размешать, отметить окраску и сделать выводы.
Тема 3. Определение активности ферментов. Единицы измерения каталитической активности ферментов. Исследование ферментативных процессов по типу реакций основных классов ферментов.
Актуальность темы.
Количественное определение активности ферментов в биологическом материале
используется для диагностики разных болезней. Так при остром панкреатите повышается активность амилазы в крови и моче.
Цель и исходный уровень знаний.
Общая цель.
Анализировать изменение активности фермента амилазы в биологических жидкостях. Изучение международной классификации ферментов по типу реакций.
Конкретные цели:
1.Количественно определять активность амилазы в моче за Вольгемутом,
трактовать полученные результаты.
2.Трактовать международную классификацию и номенклатуру ферментов по типу реакций.
Исходный уровень знаний-умений: знать постепенный гидролиз молекулы крахмала к мальтозе через стадию декстринов. Знать типы химических реакций.
Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.
Содержание |
|
и |
Указания к учебным действиям |
|
||
последовательность действий |
|
|
|
|||
1. |
Практическое |
изучение |
1.1. |
Определение активности |
амилазы |
|
определения амилазы слюны. |
слюны. |
|
|
|||
2. |
Методы |
определения |
2.1. На конкретных примерах объясните |
|||
активности ферментов. |
|
принципы методов определения активности |
||||
|
|
|
|
ферментов: |
|
|
|
|
|
|
а) по количеству продукта, который |
||
|
|
|
|
образуется под действием фермента за |
||
|
|
|
|
единицу времени; |
|
|
|
|
|
|
б) по количеству потраченного субстрата |
||
|
|
|
|
за единицу времени; |
|
|
|
|
|
|
в) |
спектрофотометрические |
методы |
|
|
|
|
|
8 |
|
|
|
определения активности ферментов и |
|
|
визуализация результатов ферментативной |
|
|
реакции. |
|
|
2.2. Единицы измерения активности и |
|
|
количества ферментов: |
|
|
а) международные единицы; |
|
|
б) катал; |
|
|
в) удельная активность фермента. |
3. |
Международная |
3.1. Объяснить принцип международной |
классификация |
и номенклатура |
классификации и номенклатуры ферментов. |
ферментов по типу реакций. |
3.2. Назвать шесть классов ферментов и |
|
|
|
объяснить типы катализированных реакций. |
Индивидуальная самостоятельная работа студентов.
Сделать реферативный доклад по теме: ”Роль поджелудочной железы в
возникновении гиперамилаземии и гиперамилазурии”.
Алгоритм лабораторной работы.
Количественное определение активности амилазы.
Принцип определения активности амилазы по Вольгемуту:
Метод основан на способности амилазы расщеплять (гидролизовать) крахмал. Находят такое разведение слюны, которое расщепляет 2 мг крахмала (в 2 мл 0,1% раствора крахмала) за 30 минут при t=38 0С. Потом рассчитывают количество крахмала, которое расщепляется 1 мл неразведенной слюны.
В норме активность амилазы слюны – 160-320 ус.ед.
Ход работы.
В 10 пробирок наливают по 1 мл воды. В 1 -ю пробирку добавляют 1 мл слюны, разведенной в 10 раз, перемешивают. Набирают в пипетку 1 мл смеси и переносят ее в 2-ю пробирку, из нее – таким же образом в 3-м и т.д до 10 -и пробирке. Из 10-и
пробирки 1 мл смеси выливают. Во все пробирки доливают по 1 мл воды и по 2 мл
крахмала, перемешивают и оставляют в термостате на 30 минут при t=38 0 С. Через 30 минут пробирки вынимают и добавляют по 1 капли раствора Люголя, перемешивают. Жидкость в пробирках окрашивается в желтоватый, розовый и фиолетовый цвета. Отмечают последнюю пробирку с желтым цветом, где гидролиз
крахмала прошел полностью и проводят расчет.
Расчет:
Отмечают пробирку, где гидролиз крахмала прошел полностью. Например,
желтый цвет появился в 4-й пробирке, где слюна разведена в 160 раз. Соответственно, 1/160 мл слюны расщепляет 2 мл 0,1% раствора крахмала, а 1 мл неразведенной слюны будет расщеплять Х мл 0,1% раствора крахмала:
1/160 мл - 2 мл
1мл - Х мл
Х= |
2 ×1×1 6 0= 320 мл 0,1% раствора крахмалю. |
|
1 |
Таким образом, амилазная активность слюны равняется 320 у.е.
9