3 курс / Фармакология / Диссертация_Куркин_Д_В_Противодиабетические_свойства_и_некоторые

111

соединения ZB-16 и ZB-18 в дозе 1 мг/кг, скорость утилизации глюкозы достоверно превосходила зарегистрированную в контрольной группе (на 29,9

и 16,7% соотвественно, p < 0,05).

После 4 недель введения у животных, получавших соединение ZB-16,

отмечалось значимое снижение уровня гликемии (соответственно на 16 и

16,6% при введении в дозах 1 и 10 мг/кг) и значения AUC (на 38 и 36,6% при введении в дозах 1 и 10 мг/кг) по сравнению с контрольной группой (рис.11А

ирис.12А).

Вгруппах, получавших метформин и ситаглиптин, по сравнению с контрольной группой, выраженное снижение уровня гликемии наблюдалось только через 28 дней введения, а значимое улучшение утилизации глюкозы –

через 14 дней (рис.11Е и рис.12Е).

При анализе обобщенных графиков (рис.11Ж и рис.12Ж) отмечено, что по влиянию на уровень тощаковой гликемии и скорость утилизации глюкозы наиболее выраженным гипогликемическим действием обладает соединение

ZB-16 в дозе 1 мг/кг. При этом выраженность гипогликемического действия у него была сопоставима или незначительно уступала метформину.

Остальные исследуемые агонисты значимо улучшали (p < 0,05) утилизацию глюкозы у животных после 7 (ZB-18), 14 (ZB-18, ZB-19) и 28 (ZB-17, ZB-18 ZB-19, ZB-20) дней перорального введения.

115

Исследование острой токсичности потенциальных лекарственных препаратов является основой в обосновании степени безопасности новых веществ, проходящих доклиническое исследование. Выяснение уровня ЛД50

вещества позволяет определить класс его токсичности, а при наличии данных по терапевтической активности рассчитать терапевтический индекс, условно отражающий степень безопасности нового средства.

С учетом нормативных требований, принятых в Российской Федерации

[Миронов А. Н., 2012], острую токсичность нового агониста GPR119

рецептора – соединения ZB-16 исследовали на двух видах половозрелых животных: мышах (самцах и самках массой 18-22 г) и крысах (самцах и самках массой 180–220 г). При проведении исследований использовали энтеральный (внутрижелудочно) путь введения. Исследуемую субстанцию вводили в максимально допустимых объемах растворителя мышам и крысам,

с использованием атравматического металлического зонда двукратно внутрижелудочно. Для наблюдение за животным, которым было введено соединение ZB-16 в соотвествующей дозе, их помещали в изолированные плексигласовые боксы 15х25х15 см. До начала эксперимента все испытуемые животные в течение 12 часов находились на пищевой депривации.

Оценка клиники токсических признаков включала в себя мониторинг:

-общего состояния, поведения: характер шерстного покрова –

изменения окраса, гладкости, плотности, опрятности; слизистых оболочек – окраска, отечность, наличие и характер выделений; подвижность; масса тела;

- параметров нервно-мышечной возбудимости: рефлекторные реакции на внешние раздражители – звуковые (постукивание по клетке),

тактильные (прикосновения к коже), болевые (раздражение острой иглой различных участков кожи и сдавливание кончика хвоста), изменения положения тела (прострация, скованность), положение конечностей, наличие судорог, парезов, тремора, подергиваний;

116

- вегетотропных реакций: реакции зрачка, цвет кожи, наличие уринаций, дефекаций, саливаций.

По окончании 14-дневного периода наблюдения была произведена некропсия.

3.3 Изучение острой токсичности агониста GRP-119 рецептора на

мышах

В проведенном исследовании на мышах, которым вводилось соединение ZB-16 в дозах 500; 1000 и 2000 мг/кг двукратно,

внутрижелудочно (плохо растворимые дозы в максимально допустимых

[Миронов А.Н., 2012] объемах растворителя – дистиллированной воды),

случаев смерти не отмечалось, а в общем состоянии и поведении наблюдались признаки слабой седации, снижения подвижности, угнетения реакций на тактильные раздражители. Данные изменения в поведении и общем состоянии мышей были отмечены у животных, которым вводили исследуемое соединение в дозах 1000 и 2000 мг/кг, и отсутствовало у мышей,

которым вводили ZB-16 в дозе 500 мг/кг. При внешнем осмотре мышей – шерстной покров и слизистые оболочки, а также кожные покровы не различалось с таковым контрольной группы. По окончании первых суток наблюдений общее состояние данных животных, их двигательное поведение и нервно-мышечные реакции приближались к таковым у контрольной группы. В дальнейшем (в течение 2-недельных наблюдений) у этих животных также не были отмечены какие-либо различия с контрольными мышами. При вскрытии животных на 14-е сутки эксперимента не обнаружено наличия субстанции соединения ZB-26 на всем протяжении кишечника, при этом на слизистой желудка и кишечника не были выявлены кровоизлияния и эрозия. При осмотре видимых слизистых (оболочки глаз,

ротовая полость) и кожных покровов также не было обнаружено признаков сыпи, гиперемии и эффектов, указывающих на раздражающее действие (отек,

117

набухание, локальное расширение сосудов и пр.). Не выявлено также каких-

либо изменений и в паренхиматозных органах.

При анализ динамики изменений массы тела мышей (табл.14),

потреблением воды и пищи достоверно значимых различий между группами контрольных и опытных групп не установлено. Также не было выявлено различий в реакции на введение вещества ZB-16 внутрижелудочно у животных разного пола.

Таблица 14

Масса тела мышей (гр, M ± m), получавших внутрижелудочно в

токсических дозах соединение ZB-16

В связи с отсутствием гибели мышей, которым исследуемое соединение вводилось внутрижелудочно в максимальной дозе 2000 мг/кг

(практически нерастворимая доза вещества в максимально допустимых объемах растворителя), границы ЛД50 соединения ZB-16 были приняты условно и составили более 2000 мг/кг.

118

Таблица 15

Гибель мышей в экспериментах по изучению острой токсичности соединения ZB-16 (внутрижелудочный путь)

Примечание. Группа контрольных животных в таблицу не внесена; n –

количество погибших мышей; N – количество животных в группе

3.4 Изучение острой токсичности агониста GRP-119 рецептора на

крысах

Проведенное исследование позволило установить, что внутрижелудочное введение крысам соединения ZB-16 в дозах 500; 1000 и 2000 мг/кг (максимально растворимые дозы, в рекомендуемом максимально допустимом объеме растворителя – 50 мл/кг, который вводился животным дробно двукратно по 2,5 мл на 100 г) не вызывает гибели в ранние и отдаленные периоды наблюдений. При этом клиника токсических эффектов проявлялась в виде снижения двигательной активности (отсутствие перебежек и перемещений по камере наблюдений), снижении реакций на внешние раздражители (тактильные, слуховые и болевые), незначительной седации и мышечной релаксации. Зрачковый рефлекс, дефекции не изменялись. Со стороны вегетотропных реакций у животных опытных групп отмечено углубление дыхания, при этом ритмичность дыхания не нарушалась. При осмотре состояния шерстного покрова, видимых слизистых и кожных покровов различий с контрольной группой не выявлено. Указанное состояние у крыс, получавших соединения ZB-16 в дозе 500 мг/кг прослеживалось в течение 4-6 часов, а у крыс, получавших в дозах 1000 и 2000 мг/кг наблюдалось до окончании первых суток. Начиная со вторых

119

суток наблюдения, общее состояние опытных групп крыс практически соответствовало контролю. Шерстный покров у опытных животных был гладкий, ухоженный, белый и блестящий, слизистые – чистые, на кожных покровах отсутствовали признаки гиперемии и отечности. При этом акты уринаций и дефекаций у крыс в опытных группах соответствовали контрольной группе.

Результаты вскрытия животных, проведенного по окончании 14-ти дневного наблюдения, не позволили зафиксировать патологических изменений в расположении внутренних органов, их структуре и окраске.

Динамика изменений массы тела у опытных и контрольных крыс,

регистрируемая на 7-й и 14-й дни эксперимента, представлена в табл.16. Из приведенных данных следует наличие положительного прироста массы тела к концу периода наблюдения во всех испытуемых группах без достоверных значимых различий в исследуемых группах контроль и опыт, а также между самцами и самками.

С учетом отсутствия гибели особей в группах крыс, получавших исследуемое соединение, границы ЛД50 ZB-16 были рассчитаны ориентировочно по максимально введенной дозе в соответствии с рекомендациями [Миронов А.Н., 2012; Саноцкий И.В., 1970]. На основании этого было определено, что ЛД50 соединения ZB-16 при внутрижелудочном введении половозрелым крысам обоего пола ориентировочно составляет

2000 мг/кг.

3.5Заключение

В ходе выполненного исследования были ресинтезированы несколько серий соединений на основании данных химических библиотек. Все они протестированы на наличие агонистической активности к GPR119, а также оценены их базовые фармакокинетические свойства. Однако в результате ни одно синтезированное таким образом соединение не было признано

удовлетворяющим требуемым характеристикам.

После анализа строения молекул, зарегистрированных в клинических испытаниях в качестве агонистов GPR119, была синтезирована новая серия веществ, среди которых, посредством изменения структуры исходной молекулы, удалось создать несколько соединений, удовлетворяющих основным целевым требованиям (уровню агонистической активности,

лекарственной безопасности, базовым фармакокинетическим и