Возбудители инфекционных болезней дыхательных путей

Таксономическое положение и морфология возбудителей дифтерии. Основные биологические свойства дифтерийных бактерий и питательные среды для их культивирования. Микробиологическая диагностика дифтерии. Выявление антитоксического иммунитета.

Таксономия.

Они относятся к типу (филуму) Actinobacteria, классу Actinobacteria, порядку Corynebacteriales, семейству Corynebacteriaceae, роду Corynebacterium, C. Diphtheria.

Морфология.

прямая или слегка изогнутая палочка, которая имеет вздутия на концах и напоминает булаву или гантели. После деления клетки коринебактерий не расходятся, а располагаются в мазках под углом, напоминая латинские буквы L, X, V, Y или растопыренные пальцы рук, иероглифы. Возбудитель дифтерии обладает полиморфизмом: в препаратах могут встречаться нитевидные, ветвящиеся, кокковидные, дрожжеподобные формы. Дифтерийные палочки неподвижные, спор не образуют, имеют микрокапсулу и пили.

В состав клеточной стенки возбудителя дифтерии входят специфичные только для коринебактерий липиды: эфиры коринемиколовой и коринемиколиновой кислот, димиколат трегалозы, фосфатиды маннозы и инозита. Клеточная стенка содержит также пептидогликан и арабиногалактан – полимеры полисахаридной природы. Поверхностная белковая структура C. diphtheriae представляет собой капсульную субстанцию – микрокапсулу. В микрокапсуле располагаются пили (фимбрии). У C. diphtheriae выделяют три типа пилей, различающихся по структуре: SpaA, SpaD, SpaH.

C. diphtheriae представлен кольцевой молекулой ДНК.

Тинкториальные свойства.

По Граму они окрашиваются в фиолетовый цвет, то есть являются грамположительными. При окраске препаратов щелочным метиленовым синим или по методу Нейссера на полюсах коринебактерий обнаруживаются зерна волютина (зерна Бабеша-Эрнста). Количество зерен волютина у дифтерийной палочки не превышает 6, непатогенные коринебактерии содержат 18-20 зерен. При использовании щелочного метиленового синего тело клетки окрашивается в голубой цвет, а зерна волютина – в темно-синий (темно-бордовый) или черный цвет. При люминесцентной микроскопии зерна волютина окрашиваются корифосфином в оранжево-красный цвет, в то время как тела бактерий - в желто-зеленый цвет.

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы, хорошо растут в аэробных условиях. Оптимальная температура роста - 35-37ºС. Возбудитель дифтерии не растет на простых питательных средах, так как не продуцирует протеазы, расщепляющие белки до аминокислот.

Элективными средами для выращивания C. diphtheriae являются: - свернутая кровяная сыворотка (среда Ру); - сыворотка с добавлением сахарного бульона (среда Ру-Лёффлера); - кровяной агар (КА); - кровяной теллуритовый агар (среда Клауберга II); - теллурит-шоколадный агар Маклеода; - хинозольная среда Бучина; - цистин-теллурит-сывороточная среда Тинсдаля-Садыковой.

На этих средах рост коринебактерий отмечается уже через 10-12 часов. На кровяном агаре возбудитель дифтерии формирует мелкие серо-белые колонии, а на кровяных теллуритовых средах колонии окрашены в темно-серый или черный цвет. Высокие концентрации теллурита калия подавляют рост посторонних микроорганизмов, не оказывая влияния на C. diphtheriae. Колонии возбудителя дифтерии на средах с теллуритом окрашиваются в темно-серый или черный цвет в результате восстановления теллурита до металлического теллура, который накапливается внутри бактерий в виде кристаллов.

На среде Бучина через 24-48 часов C. diphtheriae образует колонии синего цвета и на месте колоний среда также приобретает фиолетовый цвет. На среде Тинсдаля-Садыковой C. diphtheriae образуют серые или темнокоричневые колонии, окруженные темно-коричневым ореолом.

В настоящее время для выявления коринебактерий широко используется специальная питательная среда – коринебакагар. Эта среда содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, стимулятор роста, натрия хлорид, глюкозу и агар. Перед использованием в среду добавляют теллурит калия. На этой среде коринебактерии образуют шероховатые колонии темно-серого цвета со складчатой поверхностью и неровными изрезанными краями (вид “маргаритки”) или темно-серые (серовато-черные) блестящие гладкие колонии с ровными краями.

В бульоне рост коринебактерий проявляется либо в виде равномерного помутнения, либо бульон остается прозрачным, а на его поверхности образуется нежная пленка, которая постепенно утолщается, крошится и хлопьями оседает на дно пробирки.