729

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ, БИОЛОГИЧЕСКИЕ И КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА САЛЬМОНЕЛЛ,

ОБОГАЩЕННЫХ В СКОНСТРУИРОВАННОЙ СРЕДЕ И СРЕДАХ СРАВНЕНИЯ

На этапе неселективного обогащения установлена способность сконструированной среды влиять на скорость размножения сальмонелл. Визуально разработанная нами среда после инкубации с бактериями рода Salmonella была более мутной, чем среды ставнения.

Измерив степень мутности сконструированной среды (опыт) и сред сравнения (контроль) на анализаторе DensiLaMeter, подтвердили свойство пропиленгликоля катализировать процесс размножения сальмонелл (табл. 14).

Таблица 14

Прирост бактериальной массы Salmonella spp. при культивировании в питательных средах

Видно, что разработанная питательная среда для этапа предобогащения сальмонелл положительно влияет на их развитие. Прирост бактериальной массы в опытных образцах среды для серотипов S. Typhimurium, S. Infantis, S. Virchow

составил более 40 % по сравнению с контролем. Наибольшая степень размножения отмечена при работе со штаммами серотипа S. Hamburg – 66,50 %. Однако, штаммы серотипа S. Choleraesuis показали слабую способность ферментировать пропиленгликоль, что отразилось на результате: прирост бактериальной массы бактерий в опытной среде всего на 8,97 % оказался выше, чем в контрольной.

Таким образом, выявлена существенная разница между скоростью размножения бактерий опытных и контрольных образцов. Исключение составили образцы со штаммами серотипа S. Choleraesuis: как контрольные, так и опытные пробы были примерно одинаковой мутности.

Определенный интерес вызывает способность пропиленгликоля влиять на деление кишечной палочки, протея, шигелл, золотистого стафилококка и листерий. После 24часового инкубирования контрольных и опытных образцов ЗПВ со штаммами вышеперечисленных микроорганизмов оказалось, что пропиленгликоль отрицательно влияет на наращивание биомассы данных бактерий (табл. 15).

Таблица 15

Прирост бактериальной массы при культивировании микробов-ассоциантов на питательных средах

Из таблицы 15 следует, что пропиленгликоль сдерживает размножение золотистого стафилококка на 17,53 %, литерий на 34,21 %, шигелл – более, чем на 50 %. По результатам опыта выявлено свойство пропиленгликоля сдерживать прирост бактериальной массы протея и кишечной палочки на 20 %. Данный факт имеет огромное значение в повседневной лабораторной практике, т.к. часто именно БГКП и рода Proteus подавляют развитие сальмонелл, что приводит к ложноотрицательным результатам исследований.

Для объективности оценки полученных данных, необходимо было засеять смесь микроорганизмов на разработанную нами неселективную среду. Для этого сальмонеллы и взятые в опыт штаммы прочих микроорганизмов в равных количествах (по 1х101 МТ/см3) инокулировали в опытные и контрольные флаконы с ЗПВ (табл. 16).

Таблица 16

Прирост бактериальной массы сальмонелл в ассоциации с сопутствующими микроорганизмами

Таким образом, очевидна позитивная роль пропиленгликоля, добавленного в среду для неселективного размножения сальмонелл. Прирост бактериальной массы сальмонелл в опытных образцах был на 13,64 - 64,89 % больше, чем в контроле. Исключение составили пробы с серотипом S. Choleraesuis, который не обладает способностью ферментировать пропиленгликоль. Более наглядно результаты данного опыта отражены на рисунке 9

Рис. 9. Влияние сконструированной среды на размножение сальмонелл в ассоциации с другими родами микроорганизмов, ед. мутности McF

Разработанная среда способствовала увеличению чистой культуры сальмонелл в среднем на 38,57 %. При работе с Salmonella spp. в ассоциации с сопутствующей микрофлорой также получили прирост бактериальной массы сальмонелл в опытных образцах. Причем разница биомассы сальмо-

65

нелл составила от 15,04 до 61,54 %, в пользу испытуемой питательной среды. Исключение составили образцы со штаммами S. Choleraesuis. Чистые культуры данных штаммов показали прирост бактериальных клеток в опытных образцах на 8,97 % больше, чем в контрольных. При работе с S. Choleraesuis в ассоциации с другими микроорганизмами как контрольные, так и опытные пробы были примерно одинаковой мутности, однако, количество бактериальных клеток составило 1,3х108. Принимая во внимание тот факт, что разрешающая способность бактериологического метода составляет 105 МТ/см3 [106], а экспесс-методов около 105 -106 МТ/см3 [40], наша разработка может быть с успехом применима в испытательных лабораториях.

Сальмонеллы отлично растут на универсальных питательных средах (МПА, МПБ, средах Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит агаре и др.), за исключением несколь-

ких сероваров (S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Typhisuis, S.

Sendai, S. Gallinarum и некоторых других). На плотный средах они формируют небольшие (диаметром 2-4 мм), в типичных случаях гладкие, блестящие, гомогенные колонии (S- форму) [3, 66]. На МПА образуют небольшие, диаметром 1…2 мм, круглые колонии с ровными краями, серо – белого цвета с голубоватым оттенком. У некоторых видов сальмонелл по краю колонии заметен выпуклый слизистый вал. На среде П-65 – оливковые, на энтеритном агаре Гектоена – черные, синие или сине-зеленыс с черным центром, на ХLDагаре – розовые с/без черным центром, а на среде ВильсонаБлера у разных сероваров цвет вариабельный – от черной с металлическим блеском до светло-зеленого. Мутантные ше-

66

роховатая (R) и переходная (SR) формы на плотных средах растут в виде тусклых, сухих, шероховатых колоний неправильной формы с неровными краями [66].

Для изучения культуральных свойств сальмонелл, подвергнутых неселективному обогащению в сконструированной среде, использовали следующие плотные питательные среды: XLD-агар, ВСА, агар Эндо, Плоскирева и Левина. Контролем традиционно служили идентичные штаммы сальмонелл, обогащенные в неселективном и селективном питательных бульонах согласно ГОСТ 31659-2012 .

При культивировании отмечена морфологическая идентичность между колониями опытных и контрольных образцов. Все пробы дали характерный рост. Колонии бактерий рода Salmonella на XLD-агаре имели черный центр и слегка прозрачную зону красноватого цвета. На ВСА все используемые в работе штаммы сальмонелл образовывали черные колонии с характерным металлическим блеском. На среде Эндо испытуемые бактерии рода Salmonella образовывали слегка розоватые прозрачные колонии. На среде На среде Левина мы обнаруживали голубые или розовато-фиолетовые колонии (рис. 10). На агаре Плоскирева бактерии Salmonella spp. образовывали круглые бесцветные мутные колонии.

Единственным существенным отличием между культуральными свойствами контрольных и опытных образцов явилось время колониеобразования. В частности нами отмечено более быстрое формирование колоний в опытных образцах по сравнению с контрольными (табл. 17).

67

Рис.10. Рост колоний Salmonella spp. на плотных питательных средах

Таблица 17

Рост колоний сальмонелл на твердых питательных средах

Окончание таблицы 17

+++ обильный рост ++ несколько колоний + единичные колонии - отсутствие роста

69

Биохимические и серологические свойства сальмонелл, обогащенных в сконструированной среде

и средах сравнения

Сальмонеллы обладают следующими биохимическими свойствами: D-глюкозу ферментируют с образованием кислоты и газа. (S. Typhi газа не образуют); ферментируют рамнозу, ксилозу, арабинозу, мальтозу, дульцит, сорбит, трегалозу, маннит. Сальмонеллы – оксидазонегативные, каталазопозитивные, индол и Фогес-Проскауэр (VP) негативные, метиловый красный и цитрат позитивные, продуцируют сероводород и не расщепляют мочевину [3].

Для биохимической идентификации предварительно получали агаровые 24-часовые культуры. Из чистых колоний готовили суспензию в физиологическом растворе, соответствующую 1 ед. мутности по шкале McFarland. Мутность бактериальной суспензии определяли оптически на приборе

Densi-La-Meter (Erba Lachema, Чехия). Биохимическую иден-

тификацию выполняли на микробиологическом анализаторе

Multiskan FC (ThermoFisher Scientific Inc., Финляндия) с по-

мощью набора ЭНТЕРОтест 24h (Arkray, Япония). При этом определяли β-ксилоксидазную активность, способность ферментации салицина, сорбита, мелибиозы, целлобиозы, лактозы, трегалозы, маннита, дульцита, адонитола, арабитола, сахарозы, инозитола, раффинозы, расщепления мочевины, глюкуронидазы, способность декарбоксилировать аргинин, орнитин, лизин, образовать сероводород, β-галактозидазу, утилизировать цитрат, малонат и эскулин (табл. 18).

70