Хід роботи.
У дві пробірки наливають по 3 мл розчину яєчного білка і додають: у першу – 2 – 3 краплини розчину купрум сульфату, у другу – 2 – 3 краплини розчину плюмбум оцтовокислого. Спостерігають утворення осаду (із сіллю купруму – блакитного кольору, плюмбуму – білого). При додаванні надлишку розчинів цих солей відбувається розчинення утвореного осаду.
Дослід 3. Осадження білків органічними розчинниками
Мета роботи: засвоєння механізму осадження білків органічними розчинниками.
Завдання на виконання роботи: осадити білки етиловим спиртом та ацетоном з додаванням натрій хлориду.
Лабораторний посуд: пробірки; піпетки.
Матеріали та реактиви: 1%-ий розчин яєчного білка; кристалічний натрій хлорид; 96%-ий розчин спирту етилового; 95%-ий розчин ацетону.
Принцип методу. Білки осаджуються з розчинів при додаванні до них деяких органічних розчинників (ацетон, етанол, хлороформ тощо). Органічні розчинники зменшують діелектричну постійну водних розчинів білків. Присутність електролітів покращує осадження білків.
Якщо осадження білків проводиться за низьких температур (-15 – 0°С), то воно є оборотним, і білок відновлює свої біологічні функції.
Хід роботи.
У дві пробірки наливають по 3 мл розчину яєчного білка і вносять по 0,2 г кристалічного натрій хлориду. Вміст пробірок збовтують. Потім у першу додають краплинами 3 мл етилового спирту, у другу – ацетону і знову збовтують. Через 3 – 6 хв. спостерігається випадання білка в осад, який розчиняють, додаючи воду.
Дослід 4. Осадження білків реактивами на алкалоїди
Осадження білків реактивами на алкалоїди – це необоротна реакція. Алкалоїди являють собою азотисті основи, що містять у молекулі різні гетероцикли з атомами азоту. У білковій молекулі також є деякі гетероцикли, що містять азот, тому для білків характерні деякі реакції, притаманні алкалоїдам.
Мета роботи: засвоєння механізму осадження білків реактивами на алкалоїди.
Завдання на виконання роботи: осадити білки реактивами на алкалоїди з подальшим розчиненням утвореного осаду надлишком цих реактивів.
Лабораторний посуд: пробірки; піпетки.
Матеріали та реактиви: 1%-ий розчин яєчного білка; 10%-ий розчин пікринової кислоти; насичений розчин таніну; 5%-ий розчин калій гексаціано(ІІ)-ферату; 1,0%-ий розчин оцтової кислоти.
Принцип методу. Механізм осадження білків алкалоїдними реактивами (таніном, пікриновою, гексаціановою, фосфорно-вольфрамовою, фосфорномолібденовою, феритовою кислотами та їх солями) зумовлений утворенням нерозчинних сполук цих реактивів з азотистими групами білка. У таких сполуках алкалоїдні реактиви є аніонами, а білки – катіонами. Для надання молекулі білка позитивного заряду розчин білка підкислюють оцтовою кислотою. У результаті цього позитивно заряджені частки білка легко взаємодіють з негативно зарядженими молекулами осаджувача. Білки з позитивним зарядом (протаміни, гістони) добре осаджуються алкалоїдними реактивами в середовищі без попереднього підкиснення.
Хід роботи.
У три пробірки вносять по 2 мл розчину яєчного білка та по 0,5 мл розчину 1%-ої оцтової кислоти. Потім додають по 5 – 6 краплин: у першу розчину пікринової кислоти, у другу – насиченого розчину таніну, у третю розчину гексоціано-(ІІ)-ферату калію. Спостерігається випадіння осаду. При додаванні надлишку розчину гексаціано-(ІІ)-ферату калію і розчину таніну осад розчиняється.
Дослід 5. Осадження білків концентрованими мінеральними кислотами
Мета роботи: засвоєння механізму осадження білків концентрованими мінеральними кислотами.
Завдання на виконання роботи: осадити білки концентрованими нітратною, сульфатною і хлоридною кислотами з подальшим розчиненням осаду надлишком цих кислот.
Лабораторний посуд: пробірки; піпетки.
Матеріали та реактиви: 1%-ий розчин яєчного білка; концентровані розчини нітратної, сульфатної і хлоридної кислот.
Принцип методу. Мінеральні кислоти, крім ортофосфатної, осаджують білки в результаті денатурації й дегідратації білкових молекул. У надлишку всі мінеральні кислоти, крім нітратної, розчиняють утворений осад внаслідок перезарядження білка.