Занятие 4. Лейкоцитарная формула. Морфология лейкоцитов.
Цель занятия: |
|
Работа 1. Классификация лейкоцитов.
Лейкоциты – белые клетки крови, имеющие ядро и цитоплазму.
Общее количество лейкоцитов в периферической крови значительно меньше, чем эритроцитов. У животных оно составляет примерно 0,1-0,2%, у птиц – около 0,5-1,0% от числа эритроцитов:
Крс 6-10 тыс/мкл
Лошадь 7-12 тыс/мкл
Мрс 6-11 тыс/мкл
Свинья 8-16 тыс/мкл
Различают несколько видов лейкоцитов, отличающихся друг от друга размерами, наличием или отсутствием зернистости в цитоплазме, формой ядра и др. признаками.
Зарисовать схему классификации лейкоцитов.
СХЕМА – классификация лейкоцитов
Работа 2. Знакомство с лейкоцитарной формулой.
Процентное содержание всех видов лейкоцитов в периферической крови называется лейкоцитарной формулой (лейкограмма, лейкоформула). У птиц вместо нейтрофилов учитывают соответствующие группы псевдоэозинофилов.
В нормальных условиях лейкоцитарная формула относительно постоянна для каждого вида животных (табл. 1) и зависит от индивидуальных особенностей организма с.-х. животных, времени суток, сезона года, условий кормления и содержания животных, породы, пола и др. условий.
Таблица 1 – лейкограмма с.-х. животных
Лейкоциты, % |
лошадь |
КРС |
МРС |
свинья |
Базофилы |
0-1,0 |
0-2,0 |
0,3-0,8 |
0-1,0 |
Эозинофилы |
2,0-6,0 |
3,8-8,0 |
4,0-12,0 |
1,0-4,0 |
Миелоциты |
- |
- |
- |
- |
Юные |
0-0,5 |
0-1,0 |
0-2,0 |
0-2,0 |
Палочкоядерные |
3,0-6,0 |
2,0-5,0 |
3,0-6,0 |
2,0-4,0 |
Сегментоядерные |
45,0-62,0 |
20,0-35,0 |
35,0-45,0 |
40,0-48,0 |
Лимфоциты |
25,0-44,0 |
40,0-65, |
40,0-50,0 |
40,0-50,0 |
Моноциты |
2,0-4,0 |
2,0-7,0 |
2,0-5,0 |
2,0-6,0 |
Отклонения лейкоцитарной формулы служат важным диагностическим признаком при различных заболеваниях.
Лейкограмма дает представление только об относительных величинах. Более объективное представление о составе лейкоцитов крови дает вычисление их абсолютного количества (лейкоцитарный профиль), т.е. содержание каждого вида лейкоцитов в определенном объеме крови.
Лейкоцитарную формулу определяют на основании дифференциального подсчета 200 лейкоцитов в окрашенном мазке [под микроскопом с иммерсией – объектив Х90, окуляр 7(10)] и последующего вычисления их процентного содержания.
Лейкоциты в мазке распределяются неравномерно: более тяжелые (базофилы, моноциты) располагаются по краю мазка, более легкие (лимфоциты) в середине. Поэтому микроскопию мазка следует вести в разных концах и в середине (рисунок 1).
Рис. 1 – подсчет лейкоцитов:
а- по четырехпольному методу Меандре (В. Шиллинг); б- по способу Филипченко; в- по середине мазка.
Для подсчета используют клавишный счетчик или специальную сетку Н. Н. Егорова (рисунок 2, 3).
Счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы имеет 11 клавиш с буквами, соответствующими названиям отдельных лейкоцитов (+ три клавиши для учета патологических форм). Над клавишами размещены табло, в которых при нажиме соответствующих клавиш появляются цифры. В крайних правых окошечках подсчитывается общая сумма нажатых при подсчете клавиш. При подсчете 200 клеток раздается звонок, указывающий на окончание подсчета. Сброс табло производится с помощью рукоятки.
Сетка Н. Н. Егорова изготавливается типографским способом или чертится от руки. Состоит из 100 квадратов (10Х10). Запись клеток проводят черточками. В каждую вертикальную графу записывают по десять клеток, располагая их в соответствии с наименованием форменных элементов крови.
Рис. 2 – клавишный счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы:
А – общий вид; Б – схема клавиатуры.
Рис. 3 – сетка Н. Н. Егорова для выведения лейкограммы.
Работа 3. Знакомство с морфологией лейкоцитов.
При подсчете лейкоцитов необходимо определить структурные особенности их цитоплазмы и ядра: вид зернистости, форму ядра, величину клетки и др.
При окрашивании лейкоцитов по Романовскому-Гимзе ядра всех клеток приобретают вишнево-фиолетовый цвет, тогда как окраска цитоплазмы для разных типов клеток неодинакова.
Базофильные лейкоциты имеют лопастевидное ядро, в цитоплазме видны крупные зерна, окрашенные в синий цвет.
У эозифильных лейкоцитов ядро сегментировано, зерна цитоплазмы интенсивно окрашены в ярко-красный цвет.
Миелоциты представляют незрелые формы гранулоцитов и характеризуются большой величиной клетки и крупным ядром. Встречаются в крови при различных заболеваниях организма.
Нейтрофильные лейкоциты - крупные клетки с резко очерченным темным ядром. Цитоплазма слегка розового цвета, содержит мелкие зернышки розовато – фиолетового цвета. Юные формы имеют большое бобовидное или колбасовидное ядро. У палочкоядерных форм ядро в виде подковы или палочки, не сегментировано. У сегментоядерных ядро разделено на отдельные, не связанные друг с другом участки.
Лимфоциты – небольшие клетки, ядро округлое или бобовидной формы. Цитоплазма не зернистая, окрашивается в нежно – голубой цвет, вокруг ядра имеется светлая зона.
Моноциты – это большие клетки с ядром неправильной формы, цитоплазма серовато – голубого цвета.
Зарисовать различные виды лейкоцитов.
Занятие 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ
Цель занятия: |
|
Перед началом выполнения задания заполнить таблицу
Группа крови |
Агглютинины (белки плазмы) |
Агглютиногены (белки эритроцитов) |
I (0) |
|
|
II (А) |
|
|
III (В) |
|
|
IV (АВ) |
|
|
Предметное стекло помещаем на белую бумагу и наносим на него по одной капле стандартных сывороток I, II и III группы либо используем стекло с лунками (рекомендуется предварительно подписать соответствующие лунки). Затем каплю крови при помощи стеклянной палочки переносим в каплю сыворотки I группы и тщательно размешиваем до тех пор, пока смесь не приобретет равномерно розовый цвет. Аналогичным образом (используя каждый раз новую палочку) переносим каплю крови в стандартные сыворотки других групп. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин.
При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группа крови устанавливается в зависимости от наличия агглютинации.
Заполняем таблицу, обозначая знаком «+» наличие агглютинации, знаком
«-» - ее отсутствие.
Группа крови |
Лунка 1 (α и β) |
Лунка 2 (β) |
Лунка 3 (α) |
I (0) |
|
|
|
II (А) |
|
|
|
III (В) |
|
|
|
IV (АВ) |
|
|
|
ВЫВОД (сделайте вывод о групповой принадлежности исследуемой крови)
___________________________________________________________________________________________________________________________