- •Министерство сельского хозяйства
- •Раздел I. Общая микробиология
- •Бактериологическая диагностика
- •1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
- •1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
- •1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Сопроводительное письмо на патологический материал
- •Задания для самостоятельной работы
- •2.1. Устройство оптического микроскопа.
- •2.2. Виды микроскопии и их назначение
- •Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
- •3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
- •3.2. Бактериологические краски
- •3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
- •3.4. Основные формы бактерий
- •Задания для самостоятельной работы
- •Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
- •Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
- •4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
- •4.2. Окрашивание по Граму
- •Задания для самостоятельной работы
- •Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
- •5.1. Окраска спор
- •5.2. Окраска капсул
- •Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
- •6.1. Назначение и классификация питательных сред
- •Классификация питательных сред
- •6. 2. Приготовление питательных сред
- •Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
- •7.1. Физические методы
- •7.2. Химические методы
- •7.3. Механические методы
- •Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)
- •8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
- •8.2. Методы культивирования бактерий
- •8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
- •9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
- •9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
- •Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
- •1. Определение ферментации углеводов
- •2. Определение протеолитических свойств
- •3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
- •Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)
- •11.1. Методы серийных разведений
- •Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
- •11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
- •Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
- •В. Биологические методы исследований
- •Тема 13. Методы заражения лабораторных животных (13.1). Определение вирулентности микроорганизмов (13.2). Бактериологическое исследование трупа животного (13.3)
- •13.1. Методы заражения лабораторных животных
- •13.2. Определение вирулентности микробов
- •13.3. Бактериологическое исследование трупа
- •Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
- •Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
- •Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
- •16.1. Методы изучения риккетсий
- •16.2. Методы изучения хламидий
- •16.3. Методы изучения микоплазм
- •Раздел II. Основы санитарной микробиологии
- •Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
- •17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-бактериологические показатели почвы
- •Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)
- •19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
- •19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
- •Классификация молока по редуктазе
- •Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
- •20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
- •Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
- •Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)
- •21.1. Реакция кольцепреципитации
- •21.2. Реакция диск-преципитации
- •21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
- •Тема 22. Реакция агглютинации: пробирочный метод (22.1). Другие модификации постановки реакции (22.2)
- •22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
- •22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
- •Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
- •Главный опыт рск
- •Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
- •Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
- •Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
- •Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
- •Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
- •Тема 28. Патогенные стафилококки.
- •Тема 29. Патогенные стрептококки
- •Тема 30. Возбудители эшерихиозов
- •Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
- •Тема 32. Возбудитель листериоза
- •Тема 33. Возбудитель рожи свиней
- •Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
- •Тема 35. Возбудители гемофилезов
- •Тема 36. Возбудитель пастереллеза
- •Тема 37. Возбудитель туляремии
- •Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
- •Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)
- •40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
- •40.2. Возбудители злокачественного отека
- •40.3. Возбудитель брадзота овец
- •40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
- •Тема 41. Патогенные анаэробы – возбудители столбняка (41.1), ботулизма (41.2), некробактериоза (41.3), копытной гнили (41.4)
- •41.1. Возбудитель столбняка
- •41.2. Возбудитель ботулизма
- •41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
- •41.4. Возбудитель копытной гнили
- •Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
- •42.1. Возбудитель туберкулеза
- •42.2. Возбудитель паратуберкулеза
- •Тема 43. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 44. Возбудитель сапа
- •Тема 45. Возбудитель лептоспироза
- •Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
- •Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
- •Тема 48. Возбудители микоплазмозов
- •Тема 49. Возбудители риккетсиозов
- •Тема 50. Возбудители хламидиозов
- •Тема 51. Возбудители микозов
- •Тема 52. Возбудители микотоксикозов
- •Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
- •Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
- •Оглавление
Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить возбудителей сальмонеллезов и методы их бактериологической диагностики.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации таблица-схема проведения исследования на сальмонеллез, биопрепараты. Питательные среды: МПА, МПБ, Эндо, Плоскирева, Кларка и Симмонса, среда с лактозой, индикаторные среды для определения индола и сероводорода, диагностические агглютинирующие сыворотки для видовой дифференциации сальмонелл.
При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:
1. Виды сальмонелл, имеющие наибольшее значение в патологии животных.
2. Сальмонеллы, их морфологические и культуральные свойства, их роль в возникновении кишечных заболеваний у молодняка сельскохозяйственных животных.
3. Схема бактериологической диагностики болезней, вызванных сальмонеллами.
1. Классификация возбудителей
Сем: Enterobacteriaceae
Род: Salmonella
Виды сальмонелл, имеющих наибольшее значение в патологии животных:
1. S. enteritidis (dublin) - у телят.
2. S. choleraesuis (suipestifer)- у поросят.
3. S. typhisuis- у свиней.
4. S. typhimurium- у водоплавающей птицы.
5. S. abortus egui- аборт кобыл.
6. S. abortus ovis- у овец.
7. S. pullorum- у птиц.
2. Общая характеристика болезни:
Сальмонеллезы – группа инфекционных болезней преимущественно молодняка с.-х. животных и промысловых животных, характеризующихся при остром течений лихорадкой и профузным поносом, при хроническом – воспалением легких. У взрослых животных болезнь может протекать бессимптомно (сальмонеллоносительство), а у беременных самок возможны аборты. У человека могут возникать пищевые токсикоинфекции при употреблении продуктов, содержащих токсины сальмонелл.
3. Восприимчивые животные:
- все виды животных, особенно молодняк, включая птиц, промысловых животных и человека.
4. Патогенез и факторы вирулентности:
- Основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, возможно внутриутробное и трансовариальное.
- Размножаются в тонком кишечнике и гематогенным и лимфогенным путями разносятся в паренхиматозные органы, где вновь размножаются. При распаде их высвобождаются эндотоксины, которые вызывают патологические процессы.
- Сальмонеллы образуют два вида токсинов: экзо- и эндотоксины.
Методы диагностики (рис. 84)
А. Бактериологический метод:
1. Материал для исследования:
- при жизни – кал, сыворотка крови;
- посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод.
2. Микроскопия
а) методы окраски: простой метод, по Граму;
б) микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно (рис. 85);
в) грамотрицательные;
г) спор не образуют;
Рис. 84. Схема лабораторной диагностики сальмонеллезов
Рис. 85. Возбудитель сальмонеллеза (чистая агаровая культура). Увеличение х900
д) капсулу не образуют;
е) подвижны (за исключением S. pullorum).
3. Культивирование:
а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др., накопительные.
б) особенности выделения возбудителя
- факультативные анаэробы;
- оптимальная температура 37°С;
- срок культивирования 18-20 ч.
в) культуральные свойства:
все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихиям:
- на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка,
- на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии,
- на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина - светло-фиолетовые колонии.
После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и сероварианта. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация).
г) биохимические свойства:
- обладают высокой сахаролитической активностью;
для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса). При этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу;
- дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты;
- сальмонеллы не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол;
- дают положительную реакцию с метиловым красным: среда окрашивается в розово-красный цвет, отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра — желтое окрашивание среды.
д) биопроба:
- в необходимых случаях заражают подкожно белых мышей.
Б. Серологический метод:
- используют РА с сывороткой крови (кровью) при диагностике паратифозного аборта кобыл, поллуроза у кур;
- используют РА для дифференциации выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и сероварианта;
- у сальмонелл различают соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный Н-антиген;
- культуру сальмонелл предварительно проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими О-сыворотками в РА на стекле. На основе общего для нескольких видов сальмонелл О-антигена они подразделяются на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытания той же культуры, выросшей на скошенном МПА с отдельными монорецепторными О-сыворотками, входящими в смесь поливалентной сыворотки. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными Н-сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами;
- используют реакцию иммунофлуоресценции (РИФ).
В. Аллергический метод:
- не применяется.
4. Биопрепараты для специфической профилактики:
- инактивировшная концентрированная формолвакцина против паратифа телят и поросят;
- живая вакцина против паратифа свиней из штамма ТС-177.
5. Биопрепараты для специфической терапии:
- поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа и колибактериоза в двух вариантах:
а) для телят, ягнят, овец и птиц;
б) для телят, поросят, ягнят, овец и птиц:
- бактериофаг против паратифа и колибактериоза телят
- бактериофаг против пуллороза – тифа птиц.
Задания для самостоятельной работы
1. Изучить культуральные свойства сальмонеллы на обычных и дифференциально-диагностических средах.
2. Приготовить препараты-мазки из суточных культур сальмонелл, окрасить их по Граму и провести микроскопирование.
3. Приготовить препараты «висячая» капля из суточной культуры сальмонелл и исследовать на подвижность.
4. Приготовить препарат-отпечаток из органов белой мыши, павшей от сальмонелл, окрасить по Граму, провести микроскопию.
5. Изучить биохимические свойства сальмонелл на средах «короткого» и «длинного» цветного ряда.
6. Провести видовую дифференциацию сальмонелл в РА с поливалентными и монорецепторными сыворотками.