10. Понятие о моноклональных антителах. Гибридомная технология для их получения (клеточная инженерия). Применение в медицинской практике.

Моноклональные антитела яв­ляются однородными и высокоспецифичными. Их продуциру­ет гибридома — популяция гибридной клетки, полученной слиянием антителообразующей клетки определенной специ­фичности с «бессмертной» опухолевой клеткой миеломы. Гибридомы - бессмертные клоны клеток, синтезирующие моноклональные антитела.

Гибридомная технология - слияние с помощью полиэтиленгликоля лимфоцитов сёлезенки предварительно иммунизированных организмов определенным антигеном с раковыми клетками, способными к бесконечному делению. Отбирают клоны клеток, синтезирующие необходимые антитела.  Получение и использование моноклональных антител.С их помощью можно определить любое иммуногенное вещество. В медицине моноклональные антитела можно использовать для диагностики рака и определения локализации опухоли, для диагностики инфаркта миокарда. Для использования в терапии моноклональные антитела можно соединять с лекарством благодаря специфичности антител они доносят это вещество непосредственно к раковым клеткам или патогенным микроорганизмам. Можно использовать моноклональные антитела для стандартизации методов типирования тканей при трансплантации органов, при изучении клеточных мембран, для построения антигенных карт вирусов, возбудителей болезней.

Под клеточной инженерией понимают метод конструирования клеток нового типа на основе их культивирования гибридизации и реконструкции. Культура клеток — метод сохранения жизнеспособности клеток вне организма в искусственно созданных условиях жидкой или плотной питательных сред. Для культивирования могут быть использованы клетки различных органов, лимфоциты, фибробласты, эмбрионы и т. д. Культуры, приготовленные непосредственно из тканей организма, называются первичными. В большинстве случаев клетки первичной культуры можно перенести из культуральной чашки и использовать для получения вторичных культур.

11. Механизмы иммунного ответа. Взаимодействие т- и в-лимфоцитов и макрофагов. Их роль в клеточном и гуморальном иммунитете. Роль цитокинов.

Существует два класса лимфоцитов: Т-лимфоциты, прошедшие дифференцировку в тимусе, и В-лимфоциты - созревающие в костном мозге. Т-лимфоциты осуществляют реакции клеточного типа, обеспечивая защиту от внутриклеточных и грибковых инфекций, внутриклеточных паразитов, опухолевых клеток и чужеродных трансплантатов. В-лимфоциты осуществляют гуморальный иммунитет, вырабатывая антитела, направленные чаще всего против внеклеточных бактерий, вирусов и чужеродных белков.

Т-лимфоциты дифферен­цируются в тимусе. Т-лимфоциты имеют антиген-распознающий рецептор — TcR. TcR распознает антигенный пептид, свя­занный с МНС антиген-презентирующих клеток (АПК). В ре­зультате, при действии костимулирующих факторов, клетки дифференцируются в Т-хелперы или цитотоксические Т-лим­фоциты. Важными корецепторными взаимодействиями меж­ду Т-лимфоцитом и антиген-презентирующей клеткой являют­ся, так называемые, Т-регуляторные клетки (CD28 — CD80 и CD154 (CD40L) — CD40).

Т-хелперы имеют Т-клеточ­ный рецептор и корецептор CD4, которые участвуют в распознавании комплекса антигенный пептид + МНС II клас­са. Нативные Т-хелперы под действием различных факторов дифференциру­ются на Thl и Th2: Thl-лимфоциты отвечают за стимуляцию клеточного иммунитета; Тh2-лимфоциты — за стимуляцию гуморального иммунитета.

Цитотоксические Т-лимфоциты имеют Т-клеточный рецептор и корецептор CD8, которые участвуют в распознавании комплекса антигенный пептид + МНС I класса. Они вызывают гибель клеток-мишеней в результате контакта и участия перфорина, гранзимов, Fas-рецеп­торов (CD95) и факторов некроза опухолей.

К реакциям клеточного типа относятся инфекционная аллергия, отторжение трансплантатов, реакция «трансплантат против хозяина».

В-лимфоциты дифференцируются в костном мозге.Вы­полняют роль АПК и, в результате свя­зывания антигена дифференцируются в плаз­матические клетки, продуцирующие антитела.

В-лимфоциты получают антиген при его рецептор-опосре­дованном поглощении или от фолликулярных дендритных клеток. В-лимфоциты экспрессируют следующие молекулы: 1) Анти­ген-распознающий В-клеточный рецептор 2) Ко-рецепторный комплекс мемб­ранных молекул [CD19 (CD21) 3) BcR-ассоциированные молекулы CD79a и CD79b, необходимые для сигнальной трансдукции; 4) Ко-стимулирующие молекулы (CD80, CD40 и др.) ; 5) Адгезивные молекулы для контакта клеток.

Иммунный ответ: гуморальный, клеточный

Иммунный ответ происходит в результате взаимодействия дендритных клеток, макрофагов, Т- и В-лимфоцитов, цитокинов. Различают гуморальный и клеточный иммунный ответ.

Презентация антигена

Презентация - представление антигена Т-лимфоцитам осуществляется в результате поглощения антигена антиген-презентирующей клеткой; расщепления его внутри клетки фермента­ми; связывания образующихся антигенных пептидов с моле­кулами МНС;выхода их на по­верхность клетки для контакта с Т-лимфоцитами.

Профессиональными антигенпрезентирующими клетками для лимфоцитов являются дендритные клетки, В-лимфоциты и макрофаги.

Антиген-распознающие рецепторы В- и Т-лимфоцитов

Антигенраспознающий В-клеточный рецептор В-лимфоцитов построен из молекулы мембранного иммуноглобулина и двух молекул CD79. BcR имеет трансмембранные и внутрицитоплазматические сегменты, пе­редающие внутриклеточные сигналы.

Антигенраспознающий Т-клеточный рецептор Т-лимфоцитов имеет две формы — которые соединены в мембране клетки с молекулой CD3. TcR совместно с корецепторами CD8 или CD4 распознает комплекс антиген-пептид + МНС первого (I) или второго (II) класса антиген-презентирующие клетки.

В иммунном ответе клетки взаимодействуют при межклеточ­ном контакте мембранами и с помощью цитокинов. Различают следующие молекулы межклеточной адгезии: селектины, муциноподобные адрессины сосудов, интегрины, кадгерины, хоминговые рецепторы и молекулы из суперсемейства иммуноглобулинов.

Селектины — молекулы (рецепторы) поверхности лимфоци­тов, нейтрофилов, моноцитов, эозинофилов, взаимодействую­щие с лигандами эндотелия сосудов. Участвуют в ос­тановке клеток для их миграции через эндотелий сосудов.

Интегрины — молекулы поверхности Т-лимфоцитов, моно­цитов, макрофагов, дендритных клеток, нейтрофилов, взаимо­действующие с молекулами клеточной адгезии, фрагментами комплемента или с компонентами внеклеточного матрикса.

Суперсемейство иммуноглобулинов представлено молекулами, сходными с иммуноглобулинами: молекулы МНС I и II классов, Т-клеточный рецептор, молекулы CD2, CD3, CD4, CD8 и др.

Кадгерины — кальцийзависимые адгезивные молекулы.

Хоминговые рецепторы — молекулы, ответственные за попадание лимфоцитов в лимфоидную ткань.

Гуморальный иммунный ответ (антителообразование). Основой гуморального иммунного ответа является активация В-лимфоцитов и их дифференцировка в антителообразующие плазматические клетки — плазмациты.

(BcR) распоз­нает антиген и клетка поглощает его. После процессинга (расщеп­ления поглощенного антигена) В-лимфоциты представляют об­разовавшийся комплекс Т2-хелперам, которые взаимодействуют с ним рецептором TcR и корецептором CD4. Т2-хелперы экспрессируют СD40-лиганд. Последний связывается с CD40 на В-лимфоците и клетки активируются комплексом CD40+CD40L. Происходит пролиферация В-лимфоцитов. Под вли­янием интерлейкинов, образуемых Т2-хелперами происходит переключение иммуноглобулиновых генов В-лимфоцитов, которые синтезируют иммуноглобулины раз­личных классов.

Клеточный иммунный ответ. При клеточном иммунном ответе участвуют популяции T1-хелперов CD4⁺ и цитотоксических Т-лимфоцитов CD8⁺ (ЦТЛ).

Цитокины — белки главным образом активированных клеток иммунной системы, обеспечивающие межклеточные взаимодействия, влияют на жизненный цикл клетки.