Тема: «Санитарно-микробиологический контроль в фармацевтических учреждениях. Микробиологический контроль лекарственного сырья и готовых лекарственных средств»

1. Какие объекты в аптеках подвергаются микробиологическому исследованию?

• Вода дистиллированная для приготовления ЛС, кроме инъекционных растворов и глазных капель.

• Вода дистиллированная для приготовления инъекционных растворов и глазных капель — инъекционные растворы до стерилизации; глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах (изготовляемые в самих аптеках).

• Сухие ЛС, используемые для приготовления инъекционных растворов.

• Аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие вспомогательные материалы.

• Инвентарь, оборудование, руки и санитарная одежда персонала.

• Воздух аптечных помещений.

2. Кто проводит микробиологические исследования в аптеках?

Контроль осуществляется бактериологическими лабораториями учреждений Роспотребнадзора и лечебно-профилактических учреждений выборочно, по мере необходимости, но не реже 1 раза в квартал.

3. Расскажите обо всех исследуемых объектах: отбор проб, методика исследования, какие показатели определяются, какие требования предъявляются?

1. Дистиллированная вода, используемая для изготовления ЛС (кроме лекарств для инъекций и глазных капель). Пробы отбирают в количестве 300 мл в стерильные бутылки с последующим закрытием ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки (или трубопровода), конец которой предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом.

Определение количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри, затем заливают растопленным МПА. После застывания агара чашки выдерживают сутки при 37°С и ещё сутки при комнатной температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний как на поверхности, так и внутри питательной среды. При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках.

Для выявления плесневых и дрожжевых грибов засевают по 0,5 мл исследуемой воды на 2 чашки со средой Сабуро и инкубируют при 20-22°C в течение 3-4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых и дрожжевых грибов на обеих чашках.

Результаты оценивают путём суммирования числа бактерий и грибов. Определение титра бактерий группы кишечной палочки (БГКП) проводится по методике для питьевой воды. Оценка результатов проводится в соответствии с требованиями ГОСТ «Вода питьевая».

2. Дистиллированная вода для приготовления инъекционных растворов и глазных капель. Инъекционные растворы до стерилизации.

Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах.

Пробы дистиллированной воды отбирают в стерильные флаконы в количестве 15-20 мл. Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают во время их приготовления, но не позднее 1,5 часов, и доставляют в лабораторию в тех же флаконах, в которых они будут подвергнуты стерилизации. Глазные капли доставляют в аптечной упаковке.

Определение количества мезофильных аэробов и факультативных анаэробов проводят так же, как в предыдущем исследовании.

Определение наличия БГКП в 1 мл проводится следующим образом. Исследуемый материал в количестве 1 мл засевают в 9 мл разведённой среды Эйкмана. Посевы выращивают при 37°С в течение суток, затем высевают на среду Эндо и после суточного инкубирования чашек при 37°C отбирают на чашках подозрительные колонии бактерий и определяют их принадлежность к БГКП.

Количественное определение БГКП проводится следующим образом. 1 мл исследуемого материала наливают в стерильную чашку Петри и заливают растопленной средой Эндо. После застывания среды её инкубируют при 37°С в теҷение суток и учитывают количество типичных колоний.

Предельно допустимые количества микроорганизмов 1 мл: дистиллированная вода, используемая сразу же после перегонки, не более 15, используемая после стерилизации для изготовления асептическим способом глазных капель - не более 3, растворы для инъекций до стерилизации не позднее 1,5 часов после изготовления - не более 30.

Наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки и протея в данной группе исследуемых материалов недопустимо.

3. Инъекционные растворы и глазные капли после стерилизации доставляются для исследования в аптечной упаковке. Материалы этой группы д.б. стерильными.

4. Отбор сухих ЛВ производят по показаниям. Стерильными ложками в стерильную посуду лаборатории отбирают 30-50 г вещества. Если вещество таблетированное, отбирают фламбированным пинцетом в стерильную посуду лаборатории в таком же количестве.

5. Аптечную посуду, подготовленную для разлива инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в момент приготовления их в количестве 3 штук одинаковой ёмкости. Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом аптечные пробки и прокладки.

Доставленные в лабораторию флаконы последовательно ополаскивают 10 мл стерильной водопроводной воды. Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки, тщательно ополаскивая каждый флакон.

Пробки (корковые и полиэтиленовые) и прокладки отбирают в момент приготовления инъекционных растворов и глазных капель фламбированным пинцетом и помещают по 5 штук в широкогорлые стерильные колбы или банки c последующим закрытием стерильными ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками. В лаборатории в колбы или банки наливают 10 мл стерильной водопроводной воды и тщательно ополаскивают.

Используемые в аптеках пипетки прополаскивают несколько раз в пробирке, содержащей 10 мл стерильной водопроводной воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лабораторию.

Определение в смывной жидкости количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий проводится, как описано в пункте 1. Число колоний, установленное в 1 мл смывной жидкости, умножают на 10, что соответствует содержанию бактерий на всей смывной поверхности. Количество бактерий не должно превышать 150.

Определение наличия БГКП: 8 мл оставшейся смывной жидкости засевают в 1 мл концентрированной среды Эйкмана, инкубируют при 37°С в течение суток и в дальнейшем идентифицируют БГКП. Наличие бактерий группы кишечной палочки не допускается.

6. Смывы с инвентаря, оборудования, рук персонала (во время приготовления ЛФ), санитарной одежды осуществляют с помощью ватных тампонов, помещённых в пробирки с физраствором. Влажным тампоном протирают исследуемую поверхность, затем тампон помещают в среду Кесслера или Кода. После инкубации в термостате пересевают на среду Эндо и определяют наличие БГКП.

Определение патогенных (золотистых) стафилококков осуществляют путём посева смыва в пробирку с солевым МПБ. После инкубации в термостате определяют наличие стафилококков.

Количественные определения их не проводятся. Наличие БГКП и стафилококков не допускается.

7. Исследование воздуха. Отбор проб воздуха производится при соблюдении следующих условий: - чистое подготовленное к работе помещение; - закрытые форточки и двери; - уровень высоты отбора воздуха соответствует высоте рабочего стола.

8. Методы микробиологического контроля ЛС. Присутствие микробов в ЛС нежелательно, за исключением тех, в которых наличие микробов специально имеется в виду.

Поэтому необходим контроль. Контроль проводится в соответствии с Государственной фармакопеей (ХП издание, 2010).

ЛС, стерилизуемые в процессе производства, испытывают на стерильность, а инъекционные растворы - также и на пирогенность.

ЛС, не стерилизуемые в процессе производства, м.б. контаминированы микроорганизмами и поэтому д.б. испытаны на микробную чистоту.

4. Каковы источники и пути загрязнения микробами растительного лекарственного сырья?

• воздух помещений. В 1 л воздуха в большом городе содержит от 1 тыс. до 1 млн. разных частиц, которые являются носителями микрофлоры – 1 микроорганизм приходится на 1000 взвешенных частиц;

• исходные лекарственные и вспомогательные вещества животного, растительного и синтетического происхождения (сильно контаминированы – панкреатин, пепсин, глюкоза, тальк, крахмал, агар);

• дисперсионные среды, в том числе вода очищенная, микробная контаминация которой происходит при транспортировке, хранении;

• вспомогательные материалы (фильтрующие – вата, бумага, марля; упаковочные – бумага, флаконы, банки, коробки, пробки);

• человек. В спокойном состоянии человек в 1 мин выделяет до 200 тыс. разных частиц (чешуйки, клетки эпидермиса), при движении – до 1 млн., поэтому присутствие в торговом зале аптеки значительного количества посетителей, занос извне пыли, грязи приводит к увеличению в воздухе микрофлоры, проникающей и в производственные помещения;

• персонал аптеки. Даже в специальной одежде в чистых помещениях в окружающую среду сотрудники выделяют до 2 млн. частиц размером от 0,5 мкм до 5 мкм, 300 тыс. частиц размером 5 мкм и более 160 частиц, на которых находятся микроорганизмы.

• Источники загрязнения в основном – рот и нос. При разговоре количество частиц, выделяемых человеком, возрастает;

• технологический процесс (оборудование, приборы, аппараты)

5. Правила хранения лекарственного сырья.

1. Устройство, состав, размеры площадей, эксплуатация и оборудование помещений для хранения ЛС должны обеспечивать их сохранность с учетом физико-химических, фармакологических и токсикологических свойств, а также требований нормативного документа.

2. Отделка помещений для хранения ЛС (внутренние поверхности стен, потолков) д.б. гладкой и допускать возможность проведения влажной уборки. Полы помещений должны иметь не образующее пыль покрытие, устойчивое к воздействию механической и влажной уборки с использованием дез. средств, при этом не допускается использование деревянных неокрашенных поверхностей.

3. Помещения для хранения ЛС д. б. оснащены оборудованием, позволяющим обеспечить температурные и влажностные режимы хранения ЛС в соответствии с инструкциями по применению ЛП для ветеринарного применения , и условиями, указанными на вторичной (потребительской) упаковке – для ЛП, на первичной упаковке – для фармацевтических субстанций, либо помещения рекомендуется оборудовать принудительной или естественной вентиляцией (форточки, фрамуги, вторые решетчатые двери).

4. Помещения для хранения ЛС должны иметь системы электроснабжения, отопления и приточно-вытяжную вентиляцию. Не допускается обогревание помещений газовыми приборами с открытым пламенем или электронагревательными приборами с открытой электроспиралью.

5. Помещения для хранения ЛС д.б. обеспечены стеллажами, шкафами, поддонами, подтоварниками (не допускается хранение ЛС на деревянной неокрашенной поверхности).

6. Не допускается размещение ЛС на полу без поддона. Поддоны могут располагаться на полу в один ряд или на стеллажах в несколько ярусов, в зависимости от высоты стеллажа. Не допускается размещение поддонов с ЛС в несколько рядов по высоте без использования стеллажей.

7. В помещениях для хранения ЛС стеллажи (шкафы) д.б. установлены т.о. , чтобы обеспечить свободный проход и доступ к ЛС персонала и погрузочных устройств, а также доступность стеллажей (шкафов), стен, пола для уборки. Стеллажи для хранения ЛС д.б. установлены следующим образом: - расстояние до наружных стен – не менее 0,6-0,7 м; - расстояние до потолка – не менее 0,5 м; - расстояние от пола – не менее 0,25 м; - проходы между стеллажами – не менее 0,75 м. Стеллажи, шкафы, полки, предназначенные для хранения ЛС, д.б. пронумерованы и промаркированы. На всех стеллажах, шкафах, полках прикрепляется стеллажная карта с указанием наименования ЛС, номера серии, срока годности, количества единиц хранения. При использовании компьютерных технологий допускается идентификация при помощи кодов и электронных устройств.

8. При хранении в шкафах, на стеллажах или полках ЛП во вторичной (потребительской) упаковке, фармацевтические субстанции в первичной упаковке д.б. размещены этикеткой (маркировкой) наружу.

9. Помещения для хранения термолабильных ЛС д.б. оснащены холодильным оборудованием.

10. Холодильное оборудование д.б. укомплектовано термометрами (термографами, терморегистраторами).

11. Помещения для хранения ЛС д.б. оснащены приборами для регистрации параметров воздуха (термометрами, гигрометрами (электронными гигрометрами) или психрометрами). Измерительные части этих приборов должны размещаться на расстоянии не менее 3 м от дверей, окон и отопительных приборов. Приборы и (или) части приборов, с которых производится визуальное считывание показаний, должны располагаться в доступном для персонала месте на высоте 1,5 – 1,7 м от пола.

12. Показания приборов для регистрации параметров воздуха (термометров, гигрометров (электронных гигрометров) или психрометров) должны регистрироваться 2 раза в день в специальном журнале (карте) регистрации на бумажном носителе или в электронном виде с архивацией (для электронных гигрометров), который ведется ответственным лицом. Журнал (карта) регистрации заводится на один календарный год, следующего за годом ведения журнала (карты) регистрации. Контролирующие приборы д.б. сертифицированы, калиброваны и подвергаться поверке в установленном порядке.

13. При хранении ЛС используются следующие способы систематизации: - по фармакологическим группам;

- по способу применения (внутреннее, наружное); - в алфавитном порядке;

- с учетом агрегатного состояния фармацевтических субстанций (жидкие, сыпучие, газообразные).

14. Организациям и индивидуальным предпринимателям необходимо вести учет ЛС с ограниченным сроком годности на бумажном носителе или в электронном виде с архивацией. Контроль за своевременной реализацией ЛС с ограниченным сроком годности должен осуществляться с использованием компьютерных технологий, стеллажных карт с указанием наименования ЛС, серии, срока годности либо журналов учета сроков годности. Порядок ведения учета указанных ЛС устанавливается руководителем организации или индивидуальным предпринимателем.

15. При выявлении ЛС с истекшим сроком годности, фальсифицированных, контрафактных, в поврежденной упаковке составляется акт. Они должны храниться отдельно от др. групп ЛС в специально выделенной и обозначенной (карантинной) зоне или в специальном контейнере не более 3 месяцев с целью уничтожения таких ЛС в соответствии с законодательством РФ.

16. Помещения, мебель и оборудование для хранения ЛС должны содержаться в чистоте и убираться влажным способом с применением моющих средств не реже одного раза в день.

17. В помещениях для хранения ЛС не допускается хранение иных веществ (дезинфицирующих, моющих средств), а также оборудования и материалов.

18. Возможность доступа посторонних лиц в помещения для хранения ЛС д.б. исключена.

6. Чем опасно микробное обсеменение лекарств?

Загрязняя ЛП микроорганизмы могут изменять свойства лекарств, делая их неактивными или даже токсичными, благодаря ферментным превращениям ЛВ или образованию микробных токсинов и пирогенов. Патогенные микроорганизмы могут вызывать инфекционные заболевания у людей, использующих препараты загрязненные микроорганизмами родов Staphylococcus, Pseudomonas, Salmonella.

7. На какие категории делятся лекарственное сырьё в зависимости от требований к их микробной чистоте?

Лекарственный препарат (ЛП) представляет собой дозированную форму ЛС в первичной и Окончательной упаковке, предназначенной для продажи. Активная фармацевтическая станция (АФС) или лекарственная субстания – любое вещество или смесь веществ, предназначенные для производства ЛС и являющиеся их активной составляющей. Такие вещества проявляют фармакологическую активность при лечении, профилактике или диагностике заболеваний. Сырье — исходные материалы, предназначенные для изготовления АФС. Вспомогательные средства - материалы, испол. в качестве добавок при получении АФС. АФС получают химическим синтезом и биосинтезом с помощью клеток-продуцентов (бактерий, грибов) или выделяют из сырья природного происхождения (животного, растительного, минерального).

Одним из важнейших показателей качества ЛП, лекарственных субстанций является уровень их микробиологической чистоты. Микробиологические требования к ЛП, АФС и вспомогательным материалам и методы контроля регламентируются в соответсвующих статьях государственной фармакопеи РФ (ГФ ХИ).

По микробиологическим показателям ЛП делят на Стерильные и нестерильные, они распределены в ГФ на 4 Категории. Стерильные препараты включены в 1ю категорию, а нестерильные во 2, 3, 4ю категории.

Стерильные лекарственные препараты (СЛП) не должны содержать жизнеспособных микроорганизмов, выявляемых методами, которые указаны в соответствующих статьях ГФ. Стерильными д. б. ЛП следующего назначения: для инъекций и инфузий, глазные капли, мази, препараты, наносимые на открытые раны, ожоги и в полости тела, которые не содержат микроорганизмов. Инъекционные и инфузионные растворы д.б. стерильными и не содержать пирогенных веществ и механических частиц. Пирогены – вещества, вызывающие повышение температуры тела, а при тяжелой степени пирогенной реакциии, сложный комплекс патологических изменений, выражающихся в нарушении углеводного обмена, расстройстве сердечно-сосудистой системы, гипотонии, кровоизлияниях в ЖКТ, поражении печени и др органов и тканей. В большинстве случаев источниками пирогенных примесей в ЛП являются компоненты микробных клеток, сохранившихся после стерилизации. В наибольшей степени пирогенность инъекционных и инфузионных растворов обусловлена присутствием ЛПС (эндотоксинов) клеточных стенок грам-отрицательных бактерий.

В нестерильных лекарственных препаратах (НЛП) допускается содержание определенного количества микробных клеток при отсутствии некоторых видов бактерий, представляющих опасность для здоровья человека. Допустимый состав и количество микробных клеток в НЛП зависят от его назначения и происхождения лекарственной субстанции.

В зависимости от назначения НЛП разделяют на препараты, применяемые местно на неповрежденную кожу и слизистые оболочки, в полости уха, дыхательных путей, интравагинальные - 2-я категория и препараты для приема внутрь (перорально) и введения ректально - 3-я категория. В 4-ю категорию выделены НЛП, состоящие из одного вида растительного сырья (фасованная продукция) или нескольких видов (сборы), используемые после приготовления их в виде настоев и отваров.

Для каждой категории НЛП регламентируется ОМЧ бактерий и грибов в 1 г (мл), число энтеробактерий из семейства Enterobacteriaceae (для 2-й и 3-й категорий), а также нормируется содержание некоторых условно-патогенных и патогенных бактерий. ОМЧ бактерий и грибов определяется суммарно либо отдельно.

В группу условно-патогенных и патогенных бактерий включены Escherichia coli, Salmonella sp. и др. энтеробактерии, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, содержание которых в НЛП не допускается или количество которых нормируется.

В НЛП 2-й категории разрешается содержание не более 10 клеток энтеробактерий в 1 г (мл) и не допускается присутствие St. aureus,

Ps. aeruginosa. В лекарственных препаратах 3-й категории, изготовленных из субстанций синтетического происхождения, не допускается содержание E. coli. В НЛП из субстанций природного происхождения не д.б. Escherichia coli, Salmonella sp., Staphylococcus aureus и разрешается не более 100 клеток энтеробактерий в 1 г (мл). В 1 г лекарственных растительных средств 4-й категории, применяемых в виде настоев и отваров, приготовленных с использованием кипящей воды, допускается содержание до 100 клеток E. coli.

Содержание большого количества (выше допустимого уровня) жизнеспособных микроорганизмов и наличие патогенных и условно- патогенных бактерий в НЛП может привести к утрате или изменению их фармакологического действия, накоплению токсических веществ, возникновению инфекционных заболеваний. При употреблении ЛП, загрязненных большим количеством энтеробактерий, возможно возникновение токсикоинфекций и воспалительных процессов при попадании этих бактерий из кишечника в др. биотопы организма. Е. coli входят в состав нормальной микробиоты кишечника человека и теплокровных животных. Определенная часть штаммов данного вида являются патогенными, они различаются по факторам вирулентности и вызывают кишечные заболевания. Сальмонеллы могут вызывать брюшной тиф, паратифы, сальмонеллез (гастроэнтероколит). Золотистый стафилококк и синегнойная палочка м.б. причиной гнойно-воспалительных заболеваний, токсикоинфекций и интоксикаций, внутрибольничных инфекций.

Многие микроорганизмы, особенно Ps. aeruginosa, E. coli, плесневые грибы за счет действия своих ферментов могут вызывать разрушение и порчу ЛП. Признаками микробной порчи ЛП, сырья, вспомогательных материалов м. б. изменение цвета, комкование (порошков), помутнение, образование осадка или пленки (в жидкостях), появление несвойственного запаха. Для предупреждения микробной порчи ЛП необходимо использовать качественное по микробиологическим показателям сырье, вспомогательные материалы, субстанции, воду, контролировать технологии их получения и правила хранения, соблюдать условия асептики при получении ЛП.

В Государственной фармакопее регламентируются нормы микробиологической чистоты не только ЛП, но и для АФС и вспомогательных материалов. Нормируемые требования к АФС по количеству микроорганизмов и содержанию патогенных и условно-патогенных бактерий зависят от их происхождения и категории ЛП, в состав которого входит данная субстанция.