Дифференциальные признаки возбудителей холеры

Признаки	V. cholerae cholerae	V. cholerae eltor	V. cholerae bengalii
Р-ция Фогеса-Проскауэра (образование ацетоина при ферментации глюкозы)	± (чаще-)	± (чаще+)	± (чаще+)
Чувствительность к полимиксину (50 ЕД)	+	-	-
Чувствит к классическому монофагу (С или 4 группа по Мукерджи)	+	-	-
Чувствит к монофагу Эль- Тор II (5 группа по Мукерджи)	-	+	-
Гемолиз эритроцитов барана	-	+	-
Агглютинация куриных эритроцитов	-	+	+
Гексаминовый тест (в бульонной культуре с глюкозой, гексамином и индикатором бромтимоловым синим через 6-8 часов зеленый цвет изменяется на желтый)	-	+	-
Агглютинация с О-сывороткой:	+	+	+
О1	+	+	-
О139	-	-	+

Роль в патологии. Холера – острое инфекц особо-опасное заб с тенденцией к эпидем и пандемическому распространению, протекающее по типу острого гастроэнтерита с резким нарушением водно-солевого обмена, сопровождающееся обезвоживанием и тяжелой интоксикацией.

Эпидемиология. Антропоноз. Ист инф – больной чел или вибриононоситель. Механизм заражения: фекально-оральный (пути – водный, алиментарный, контактно- бытовой). Опред роль в распростр холеры играют мухи. Ист инфекции – больной чел, бактерионосители.

Патогенез и клинич особенности. Вход ворота – тонкий кишечник, основная роль принадлежит холерогену, вызывающему дегидратацию и обессоливание орг. Вибрион находится только в тонком кишечнике, размножается, не распространяясь по организму, вибрионемия отсутствует.

Холера — острая инфекц болезнь, характер поражением тонкой кишки, наруш водно-солевого обмена и интоксикацией. Это особо опасная карантинная инф. Инкубац период от 2 ч до 6 д. Болезнь развивается остро с повыш Т тела до 38—39 ˚С, рвоты, поноса, болей в животе, тенезм. Стул имеет вид рис. отвара. Резкое обезвоживание приводит к наруш деят серд-сосуд и дых сис-м, развитию почечной недостат. При отсут леч болезнь может перейти в стадию холерного алгида (algidus — холодный), характерным признаком кот явл сниж Т тела до 34 °С. При отсут леч холерный алгид заканчивается летально. Клинич периоды холеры: 1. Холерный энтерит: на фоне норм Т редкий жидкий стул, боли в животе, тенезмы, через 1-2 дня присоединяется рвота. 2. Острый гастроэнтерит: частая рвота, урчание в животе, испражнения приобретают вид «рис отвара» (мутная жидкость с плавающими остатками слизи и кл эпителия), акты дефекации учащаются (выделяют до 30 л в с), язык покрывается налетом, кол-во мочи уменьшается, выраженная жажда, обезвоживание.

3. Холерный алгид – t 35C, кожные покровы серые, синюшные, морщинистые, лицо Гиппократа (facies hippocratica): нос заострен, глаза запавшие, выступающие скулы, афония, гипотония. Смерть наступает от сердечно-сосудистой и почечной недостаточности в результате обезвоживания и интоксикации. Иммунитет. Постинфекц иммун – напряженный, непродолжит, антимикробный и антитоксический. Микробиологич диаг. Исслед материал – фекалии, рвотные массы, желчь, секционный материал, мухи, пищ продукты, вода, ил, гидробионты, сточные воды. Для выявл бактерионосит исслед испражнения. Испражнения отбирают резиновыми катетерами, стеклянными трубочками с оплавленными краями или ректальными тампонами. Из объектов внеш среды чаще всего исслед воду открытых водоемов и сточные воды. При отборе и транспортировке материала необход соблюдать след правила: - материал следует доставлять в лаб не позднее 2 ч после забора, т к возбуд быстро погибает, особенно в испражнениях. При невозможности быстрой доставки материала в лаб пробы помещают в транспортные среды (1% пептонная вода с рН 8,2-8,6); - ёмкости для материала нельзя обеззараживать хим в-вами, т к возбуд чувствителен даже к следовым кол-вам дезинфектантов; - после доставки в лаб исслед материал в возможно короткие сроки высевают на пит среды. Исслед материала проводят по схеме: I этап. Из испражнений и рвотных масс готовят мазки, высушивают на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова и окрашивают вод р-ром фуксина или по Граму. Подвижность бак опред методом раздавленной капли. Исслед материал высевают в 1ую среду накопления - пептонную воду (ПВ), на щелочной МПА и на элективную среду (СЭДХ или TCBS). Посевы инкубируют при Т 37ОС. По результатам проведенных исслед выдают 1ое предварительное заключение о наличии в исслед материале вибрионов.

II этап. Через 6-8 ч инкубирования посевов в термостате производят пересев с 1ой среды накопления во 2ую среду накопления (пептонную воду). Высеваемость холерного вибриона в этом случае повышается на 10%. С 1ой среды накопления производят также пересев на плотные пит среды (щелочной МПА, среду TCBS). Из пленки на поверхности ПВ готовят мазки и препараты раздавленной капли. Пленку на ПВ исслед в р-ции агглютинации с 31 О-холерной сывороткой. Выдают 2ое заключение о природе выделенного вибриона. Подозрительные колонии с плотных пит сред пересевают на среды Ресселя или Клиглера для выделения чистых культур.

III этап. Через 12-16 ч от начала исслед производят пересев со 2ой среды накопления на щелочной МПА, повторно изучают морфологию, подвижность и агглютинабельность культуры, выросшей на 2ой среде накопления и на плотных пит средах. При «+» результатах исслед агглютинабельности колоний выдают 3е заключение о результатах исслед. IV этап. Через 18-24 ч с начала проведения работ подозрительные колонии с плотных пит сред исслед в р-ции агглютинации с холер сыворотками (О1, О139, Инаба, Огава) и пересевают на двууглеродные среды (лактозосахарозная, глюкозолактозная, Клиглера) и щелочной агар для выделения чистой культуры и ее идентификации.

V этап. Через 24-36 ч от начала исслед отбирают подозрительные колонии и проводят идентиф культур по морфологич, культурал, биохим св-вам, подвижности, агглютинации с пом диагностич агглютинирующих сывороток О, ОR, Инаба и Огава, фаголизабельности с холерными диагностическими фагами. VI этап. Через 36-48 ч от начала исслед учитывают результаты идентификации выделенных культур и выдают окончательный ответ о возбудителе.

Бактериоскопический метод. Бактериологичекий метод (основной). Экспресс-методы – РИФ, реакция иммобилизации вибрионов О1-сывороткой и бактериофагом, ПЦР. Серологический метод – РА, РПГА, РИФ, ИФА. Идентификация культур холер вибрионов. Культуры, выделенные на различных этапах, идентифицируют с целью определения их принадлежности к виду Vibrio cholerae соответствующей серогр (О1, О139 или др). Патогенетическая терапия холеры: Основой современной патогенетической терапии холеры явл борьба с дегидратацией, кот должна начинаться в максимально ранние сроки. Терапевт тактика всецело опред состоянием больного –степенью его обезвоживания и потерь электролитов. Основные методы патогенетической терапии холеры – оральная и внутривенная регидратация. Среди наиболее адаптированных кристаллоидных р-ров в патогенетическом лечении испол трисоль, квартасоль, хлосоль, ацесоль, раствор Рингера.

Предварительный полож ответ при диагностике холеры выдается через 5-6 ч на основании обнаружения в посевах культур, агглютинирующихся на стекле холерной О1-сывороткой (в разведении не менее 1:100) и полож результате ускоренных методов исслед. Окончательный полож ответ выдается через 18-48 ч на основании выделенных культур, имеющих типичные морфологические признаки с учетом данных развернутой р-ции агглютинации с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, пробы с холерными диагностич фагами, принадлежности к 1 группе Хейберга. Проф. Неспециф: раннее выявление больных и носителей, усиление санитарно- гигиенич надзора, санитарно-просветительская работа, введение карантинных мероприятий.

Специф – вакцинация по эпидемиологич показаниям 1ой из вак: холероген-анатоксин; холероген-анатоксин в сочетании с О-антигеном холерного вибриона Инаба и Огава; хим вакцина из штаммов классич вибриона и V. eltor (хим бивалентная таблетированная вакцина); убитая вак из штаммов Огава и Инаба или штаммов вибриона Эль-Тор. Используют также бактериофаг.

Лечение. Неспециф: восстановление водно-электролитного баланса, антибактериальные препараты (тетрациклин, левомицетин, ко-тримоксазал, фуразолидон и т.д.).

Специф – бактериофаги (в практике не применяются).

8. кампилобактериоза и хеликобактериоза: таксономия, морфология и тинкториал св-ва, ф-ры вирулентности, устойчивость к действию физ и хим ф-ров, способы заражения и клинич проявления болезни у чела, иммунитет, методы лабораторной диагностики, препараты терапии и профилактики.

Кампилобактериоз К роду Campylobacter (греч. campylo - изогнутая) относятся патогенные для человека виды: C. jejuni, C. fetus, C. coli, C. pylori (Helicobacter pylori).

Морфология, культурал, биохим св-ва. Кампило­бактерии - тонкие, длиной до 5 мкм, изогнутые по оси грам- палочки, напоминающие крылья летящей чайки. Спор и кап­сул не образуют. Жгутики, располож на 1ом конце или на обоих концах кл, создают характерные винтообразные движения.

Кампилобактеры - микроаэрофилы, т е растут при пониж концентрации кислорода (5-8%), углекис газ (10%), азот (85%). Оптимум рН=7,0, температурный оптимум для роста C. jejuni и C. coli равен 42-43^оС, для C. fe­tus и H. pylori 37^оС. Для культивирования применяется среда, со­держащая аминокислоты, кровь, активир уголь. Могут куль­тивироваться на среде, предназначенной для бруцелл. Элективные среды для кампилобактеров содержат полимиксин, линкомицин или триметоприм. Растут медленно, колонии появл через 2ое-3ое суток.

Оксидазо+, желатин и мочевину не гидролизуют, углеводы не расщепляют, продуцируют цитохромоксидазу, на растут на среде Расселя, м б каталазо- и каталазо+; энергию получают путем расщепления аминокислот. /выявление каталазы – добавление Н₂О₂ – шипение каталазо+ Хеликобактеры вырабатывают уреазу. Антигены. Содержат О- и Н-антигены, видоспецифические.

Ф-ры патогенности. Патогенность кампилобактерий связана с адгезивностью, инвазивностью, продукцией энтеротоксина, сход­ного с холерогеном,цитотоксин /только у кампилобактеров/ эндотоксин вырабатывается только при разрушении. Устойчивость. Во внеш среде - в испражнениях больных, в воде кампилобактерии сохр в теч нед, в заморожен­ном мясе - несколько мес, на различных предметах при комнат­ной Т - до 2ух нед. Чувствительны к дез в-вам, к высокой Т, при кипячении погибают. Устойчивы к действию желуд сока и желчи, что позволяет им преодолевать желудочный барьер и сохраняться в желчном пузыре. Заб у чела. Хедикобактеры – норм представители микрофлоры чела, этиологич ф-р для них – гастрит или язва. Кампилобактериозы - зоонозные заб. Ист инф явл животные, глав обр домашние и сельскохоз. От чела челу заб передается очень редко. У животных инфекц процесс про­текает или бессимптомно, или в виде кишечных заб, спон­танного аборта. Возбуд выделяются у них с испражнениями, мочой, молоком.

Механизм передачи инф - фекально-оральный, пути пере­дачи - вод и пищ, при употреблении мяса и молока больных животных, возможно заражение при уходе за больными животными.

Кампилобактерии проникают в орг обычно через рот, реже через поврежденную кожу. Возможно заражение плода через плаценту. C. jejuni, C. coli вызывают энтерит, гастроэнтерит, энтеро­колит, C.fetus у ослабленных людей могут вызвать менингит, энце­фалит, эндокардит, перитонит и др.

H. pylori участвует в развитии гастрита и язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

Микробиологич диаг. Материалом для исслед служат испражнения, рвотные массы, кровь, пунктат из суставов, ликвор, биоптат со слиз оболочки желудка. Исслед мазки, окрашенные по Граму, биоптат - гематоксилином и эозином. Выделяют чистую культуру и идентифицируют.

Примен серологич метод - обнаружение антител в пар­ных сыворотках с помощью РСК, РНГА.

Лечебные препараты. Эритромицин, гентамицин, метронидазол, фуразолидон,

При лечении хеликобактеров: при желудочном заб - Де-Нол (коллоидный субцитрат висмута), кот сочетают с трихополом и ампииллином для усиления терапевтического действия.

Хеликобактериоз - это инфекц заб, при кот поражается желудок или 12перстная кишка в виде воспаления и язвенного дефекта в слиз оболочке. Однако очень часто у инфицированных носителей Helicobacter pylori не обнаруживается никаких симптомов заболевания.

Хеликобактерии относятся к сем Helicobacteraceae, роду Helicobacter. В наст вр описано более 30 видов хеликобактерий. Для чела патогенными явл Н. pylori, H. heilmannii, H. cinaedi, H. fennelliae, H. rappini, вызывающие гастриты, энтериты, септицемии. Основное значение в патологии чела имеет вид Н. pylori – этиологич агент гастрита, язвы желудка и 12-перстной кишки. Н. pylori преимущественно выделяется из пилорической части желудка (привратника), отсюда и название микроба (лат. helix - спираль, pyloris - привратник). Виды рода Helicobacter явл единственными известными на сегодняшний день микроорг, способными длит вр выживать и размножаться в кислом содержимом желудка. Многие виды хеликобактерий обитают в ротовой полости, желудке, различных отделах кишечника чела и животных. Морфологич и тинкториал св-ва. Хеликобактерии представ собой мелкие бак S-образной формы. Микроб подвижный (лофотрих) - на 1ом из полюсов он имеет от 1 до 6 жгутиков с колбовидными утолщениями на концах, спор и капсул не образует. Хеликобактерии по Граму окрашиваются в красный цвет (грам-). В мазках бак располагаются попарно, образуя форму запятой или “летящей ласточки” Бактериал кл окружена слоем геля (гликокаликсом), представ собой гликопротеиновый полианионный гель, состоящий на 99% из воды. Он служит своеобразным барьером, защищающим кл. Кроме того, гликокаликс выполняет ф-цию депо для синтезируемой бак уреазы – фермента, защищающего микробную кл от кислого содержимого желудка. Стареющие бактериал кл утрачивают спиралевидную форму и переходят в кокковую (тип 1). Переход в кокковую форму возможен также при воздействии неблагоприят ф-ров внеш среды: повыш Т, а/б (тип 2). Кокковые формы типа 2 способны сохр во внеш 5 среде и трансформироваться в исходные спиралевидные кл при проникновении в желудок. Культуральные и биохим св-ва. Микроаэрофил, растет в атмосфере, содержащей 5-10% кислорода. Оптимал Т роста 37°С, рН – 5,5-8,5. Хеликобактерии требовательны к пит средам, хорошо растут на сложных средах с добавлением сыворотки крови, крахмала, активированного угля, гидролизата белков. Для подавления роста посторонних микроорг в среде добавляют а/б. Для выращивания хеликобактерий испол след среды: - сердечно-мозговой агар; - железо-эритритный кровяной агар (ЖЭКА); - мясо-пептонный печеночный агар (МППА); - сафранино-железо-новобиоциновая среда (СЖН).

Однако хеликобактерии растут медленно - колонии появл на 3-5 д после посева. Колонии бесцветные, блестящие, выпуклые, диаметром 1-2 мм, окружены зоной слабого гемолиза на агаре с эритроцитами лошади. На средах, содержащих триметил-тетразолиум-хлорид, формируются пигментированные рубиново-красные колонии. При скученном расположении колоний рубиново-красный пигмент распространяется за пределы колоний в виде паутины.

Антигенная структура. Хеликобактерии имеют О- и Н-антигены. Ф-ры патогенности хеликобактерий: 1. Структурные компоненты кл: - спиралевидная форма кл, гладкая поверхность (так называемая “гель-динамическая” или эластичная морфология) и наличие жгутиков, позволяющие возбуд проникать под слой слизи и колонизировать кл эпителия. Жгутики способствуют также агрегации бак на поверхности эпителия; - липополисахарид, способствующий прикреплению возбуд к кл эпителия и стимулирующий секрецию пепсиногена, что приводит к образованию избытка пепсина – 1го из ф-ров риска в развитии язвенной болезни; - сис-мы секреции III и IV типа (T3SS, T4SS), “инжекционные сис-мы” - пилеподобные структуры, способствующие введ внутрь эукариотической кл белков - эффекторов; - адгезины – белки поверхности, выполняющие ф-цию прикрепления к остаткам сиаловых к-т, гликолипидам, фосфолипидам, ламинину, коллагену, холестеролу кл хозяина. В частности, белок адгезии BabA (blood-group associated binding adhesion) связывается с 1им из групповых антигенов крови Le(b), присутствующим на поверхности клеток эпителия желудка. 2. Экзоферменты: - фермент адаптации – уреаза вызывает расщепление мочевины с образованием аммиака, нейтрализующего соляную к-ту желудка. Уреаза Н. pylori располагается не только в цитоплазме бак, но и на поверхности микробной клетки; - протеаза, фосфолипаза, муциназа вызывают деполимеризацию и растворение защитного слиз геля на поверхности эпителия и повреждение слизистой оболочки.

3. Экзотоксины - цитотоксины, повреждающие слиз оболочку. Основ цитотоксинами явл CagA (цитотоксин, ассоциированный с геном cagA) и VacA (вакуолизирующий цитотоксин). Штаммы, имеющие эти маркеры вирулентности, относятся к штаммам 1ого типа, кот ассоциированы с повыш ульцерогенным действием. Штаммы 2ого типа не имеют этих ф-ров. Синтез VacA детерминирован геном vacA. Этот цитотоксин стимулирует вакуолизацию цитоплазмы эукариотических кл и способствует проникновению возбуд в цитоплазму эпителиоцитов.

Резистентность хеликобактерий во внеш среде невысокая. Они чувствительны к физ и хим ф-рам (нагреванию и дезинфектантам), однако устойчивы к целому ряду антибиотиков.

Эпидемиология. Ист инфекции – инфициров чел (больной или бактерионоситель). Кроме этого, возбуд обнаруживается у домашних кошек, свиней, обезьян. Механизмы передачи фекально-оральный, орально-оральный через предметы личной гигиены, пути передачи – водный, алиментарный, контактно-бытовой. Редкий путь - через недостаточно продезинфиц эндоскопы и щипцы для биопсии (ятрогенный, артифициальный путь). Инфицирование Н. рylori обычно происходит в детском возрасте. Возбуд персистирует в орг в течение длит вр. Заб проявл у взрослых. В различных регионах мира инфицированность взрослого населения Н. рylori варьирует от 40% до 90%. Патогенез развития язвенной болезни. 1. Попадание возбуд в желудок и быстрое его продвижение при помощи жгутиков сквозь слой слизи к эпителию. Адгезия возбуд на эпителиальных кл слиз оболочки с помощью белка BabA. Внутрь кл Н. рylori не проникает. Возбуд обитает преимущественно в толще слиз геля или между слизью и апикальной поверхностью эпителия. 2. Продуцирование возбуд уреазы, муциназы и каталазы, с помощью кот разрушается слизь, мочевина разлагается до аммиака и углекислого газа, происходит нейтрализация соляной к-ты. Это приводит к защелачиванию среды вокруг бак и обеспечивает их выживание. Активность уреазы регулируется уникальными мембранными каналами, открывающимися при низком значении рН и закрывающимися при нейтральном значении рН. Защелачивание среды обусловливает повышение секреции гастрина, соляной кислоты и пепсина.

3. Размножение возбуд и синтез бак токсинов и фосфолипаз, кот разрушают слиз гель и клет мембраны, вызывают гибель эпителиал кл. Особое значение имеет вакуолизирующий цитотоксин VacA, приводящий к образованию в кл вакуолей и ее гибели. Белок CagA индуцирует воспаление путем стимуляции продукции интерлейкина-8 эпителиал кл. Разрушение защитного слоя слизистого геля приводит к доступу к эпителиал кл сол к-ты и пепсина, кот вызывают хим ожог, воспал и изъязвление слиз оболочки. 4. Разрушение слиз слоя приводит к тому, что эпителиоциты становятся уязвимыми для сол к-ты. Повреждающие ф-ры бак, сол к-та, избыток пепсина приводят к возникновению язвенного поражения. Иммунитет. Антигены Н. рylori обладают низкой иммуногенностью в связи с частичной гомологией О-цепей липополисахарида возбудителя с антигенами организма хозяина. Диаг. Для диаг хеликобактерной инф применяются как инвазивные, так и неинвазивные методы. При инвазивных методах исслед материалом явл биоптат пораженной тк желудка, кот отбирают при эндоскопическом обследовании. К инвазивным методам относятся: - культуральный метод; - гистологический (цитологический) метод; - быстрый уреазный тест; - ПЦР (выявление Н. рylori в биоптате). К неинвазивным методам относятся: - серологич метод (ИФА); - ПЦР (выявление Н. рylori в кале); - уреазный дыхательный тест. Культуральный метод испол в отдельных случаях (н, для выбора а/б при устойчивости возбуд к стандартному лечению). Посев материала осущ на плотные пит среды, содержащие кровь или сыворотку крови. Посевы инкубируют при 37ºС в атмосфере углекислого газа и азота в течение 3-5 суток. Гистологич метод считается “золотым стандартом” диаг Н. рylori. Для этого препараты окрашивают толуидиновым синим, карболовым фуксином, по Романовскому-Гимзе, гематоксилином и эозином, с помощью серебросодержащих красителей. При испол препаратов серебра наблюдаются черные бактериальные клетки на фоне желтой эпителиальной ткани. Уреазный тест основан на способности Н. рylori продуцировать фермент уреазу, кот разруш мочевину до углекис газа и аммиака. Образующийся аммиак защелачивает среду и изменяет окраску индикатора с желтой на малиновую. Уреазный тест проводится в нескольких модификациях: уреазная проба с биоптатом и уреазный дыхательный тест. Лечение. Антибиотикотерапия (метронидазол, кларитромицин, гентамицин, канамицин, карбенициллин), препараты висмута, эубиотики для коррекции дисбактериоза. Т к возбуд заключен в гликокаликс, он трудно поддается действию антимикробных препаратов. Базисная терапия заключается в эффективном уничтожении (полной эрадикации) хеликобактерной инф. Однако после успешной эрадикации Н. рylori через 3 года вновь заражаются этим возбуд около 32% пац, через 5 лет – 82-87%, через 7 лет – около 90%. Проф. Ср-ва специф проф не разработаны. Неспециф профилактические меры вкл строгое соблюдение санитарно-гигиенических норм и правил личной гигиены.