СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ
по микробиологии, вирусологии и иммунологии
для самостоятельной работы студентов
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
1.На мясо-пептонном агаре в чашке Петри наблюдается рост бактерий в виде слизистых круглых колоний с перламутровым блеском, цвет питательной среды вокруг них имеет сине-зелёную окраску. В другой чашке Петри бактерии растут в виде круглых, непрозрачных, блестящих колоний золотистого цвета. Цвет питательной среды вкруг колоний не изменён.
Объяснить, чем обусловлено изменение цвета питательной среды в первой чашке, и почему во второй чашке цвет питательной среды не изменился.
Задача 1.
Нерастворимые в воде пигменты окрашивают колонии бактерий (например, золотистый пигмент стафилококка), а растворимые – кроме колоний ещё окрашивают питательную среду (например, пигмент синегнойной палочки пиоцианин).
2. При вспышке сибирской язвы (возбудитель Bacillus anthracis - капсулообразующие и спорообразующие бактерии) бактериоскопически исследовали материал от заболевших животных и мазки из чистых культур выделенных бактерий. В каком случае следует ожидать выявления в мазке большего количества бактерий с выраженной капсулой? Почему? Какой метод окраски использовали для выявления капсул?
Задача 2.
В материале от животных.
Так как капсулы предохраняют микроорганизмы от защитных сил макроорганизма, в чистой культуре бактерий капсулы утрачиваются.
По Гинс-Бурри.
3. Из мокроты больного пневмонией, а также из смыва с поверхности его тумбочки сделали мазки, в которых определили ланцетовидный диплококк (капсулообразующие бактерии). В каком из этих материалов увидели бактерии с выраженной капсулой? Почему? Какой метод окраски использовали для выявления капсул?
Задача 3.
Из мокроты больного.
У микроорганизмов, выделенных с объектов окружающей среды, капсул нет.
По Гинс- Бурри.
4. От больного с симптомами острой кишечной инфекции выделена копрокультура со следующими свойствами: мелкие гр- палочки, подвижны (перитрихи), спор и капсул не образуют, на МПА дают колонии прозрачные, бесцветные, средних размеров. Биохимические свойства: глюкоза – КГ, маннит – КГ, не разлагают лактозу, мочевину и фенилаланин. При разложении белка выделяют сероводород, не выделяют индол. Утилизируют цитрат Симмонса.
Идентифицируйте бактериальную культуру с помощью таблицы.
Задача 4.
Salmonella.
5. Из гнойного отделяемого послеоперационной раны выделена бактериальная культура со следующими свойствами: мелкие гр- палочки, подвижны (перитрихи), спор и капсул не образуют, на МПА дают колонии прозрачные, бесцветные, средних размеров. Биохимические свойства: глюкоза – КГ, маннит – КГ, лактоза – КГ (замедленно), не дезаминируют фенилаланин. При разложении белка выделяют сероводород, не выделяют индол. Разлагают мочевину, утилизируют цитрат Симмонса.
Идентифицируйте бактериальную культуру с помощью таблицы.
Задача 5.
Citrobacter.
6.Из мокроты при пневмонии выделена бактериальная культура со следующими свойствами: мелкие гр- палочки, в мазках чаще располагаются по 2 клетки цепочкой, неподвижны, образуют капсулу. На МПА дают колонии полупрозрачные, выпуклые, слизистой консистенции. Биохимические свойства: глюкоза – КГ, маннит – КГ, не разлагают лактозу и фенилаланин. При разложении белка не выделяют сероводород и индол. Разлагают мочевину, утилизируют цитрат Симмонса.
Идентифицируйте бактериальную культуру с помощью таблицы.
Задача 6.
Klebsiella.
7.От больного с симптомами острой кишечной инфекции выделена копрокультура со следующими свойствами: мелкие гр- палочки, неподвижны, спор и капсул не образуют, на МПА дают колонии прозрачные, бесцветные, средних размеров. Биохимические свойства: глюкоза – К, маннит – К, не разлагают лактозу, мочевину и фенилаланин. При разложении белка не выделяют сероводород и индол. Не утилизируют цитрат Симмонса.
Идентифицируйте бактериальную культуру с помощью таблицы.
Задача 7.
Shigella.
ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ
В инфекционную больницу поступил больной с высокой (39,60) температурой, в бессознательном состоянии, с предварительным диагнозом «сепсис». При осмотре на безымянном пальце левой руки выявлен панариций.
Какой материал необходимо взять на исследование? Предполагаемые «входные ворота» инфекции? Следует ли ее рассматривать как местную, либо как генерализованную, острую или хроническую?
Задача 1.
Для исследования необходимо взять кровь и гнойное содержимое.
Входными воротами послужила инфицированная рана пальца левой руки.
Это острая, генерализованная инфекция
Больному, находившемуся на стационарном лечении по поводу дизентерии, на 6 день при ухудшении общего состояния был поставлен дополнительный диагноз: «правосторонняя пневмококковая пневмония».
Идет ли речь о рецидиве заболевания, реинфекции, вторичной или суперинфекции? Являются ли названные инфекции антропонозами, зоонозами, сапронозами или антропозоонозами?
Задача 2.
Суперинфекция. Антропонозы.
Больному с фолликулярной ангиной в качестве эмпирической терапии был назначен ампициллин.
Как объяснить отсутствие положительного эффекта, если при бактериологическом исследовании была выделена культура патогенного стафилококка, обладающая плазмокоагулирующей, ДНК-азной и гемолитической активностью, содержащая R-плазмиды, продуцирующая -лактамазы?
Задача 3.
Отсутствие положительного эффекта при терапии связано с антибиотикорезистентностью изолированного штамма, продуцирующего b-лактамазы.
В процессе гипериммунизации лошадей была получена антитоксическая противостолбнячная сыворотка.
С помощью каких реакций можно установить ее титр? С какой целью используются антитоксические сыворотки? Какими методами проводят «очистку» гетерологичных сывороток от балластных белков? Как уменьшить риск развития аллергических реакций при их парентеральном введении?
Задача 4.
В реакции флоккуляции, нейтрализации.
Антитоксические сыворотки используют для экстренной профилактики и лечения.
Используют метод «Диаферм».
Гетерологичные сыворотки вводятся по Безредко.
При постановке реакции связывания комплемента (РСК) с целью выявления специфических антител в сыворотке больного в пробирках «контроль диагностикума» и «контроль сыворотки» наблюдали «лаковую кровь»; в «опытной» пробирке зарегистрирован неполный гемолиз эритроцитов.
Предположите, в чем может быть причина такой реакции? Как интерпретировать полученный результат?
Задача 5.
Исследуемая сыворотка не была инактивирована или неправильно подобрана «рабочая доза» комплимента.
Необходимо повторное исследование.
В реакциях «третьего поколения» используются диагностические препараты, несущие на себе ту или иную метку (фермент, флюорохром, изотоп).
Благодаря чему использование «меченых» антител повышает результативность серологических реакций? Возможно ли с их помощью обнаружение бактериальных антигенов в нативном патологическом материале?
Задача 6
Благодаря высокой чувствительности и специфичности диагностических средств.
Да, возможно.
КОККИ И ЗООНОЗЫ
У больного хронический рецидивирующий фурункулез. Рецидивы обычно весной и осенью.
а) Определить и обосновать тактику обследования с целью установления этиологии в период обострения и ремиссии;
б) назначить дополнительные исследования и обосновать их необходимость.
Задача 1.
Для определения этиологии заболевания проводится бактериологическое исследование. Для выделения чистой культуры стафилококков материал, контаминированный сопутствующей микрофлорой, засевают на среды с повышенным содержанием хлорида натрия. Солевые среды являются селективными для стафилококков, рост большинства других микроорганизмов на них подавляется. При низкой концентрации бактерий в исследуемом образце необходимы элективные среды, содержащие глюкозу. Если исследование направлено не только на выделение возбудителя заболевания, но и на его количественное определение, то среды накопления не используются.
Для результативного бактериологического исследования крови необходимо сеять достаточные количества материала (не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей) в большое количество жидких элективных питательных сред. Это делается для того, чтобы путем разведения крови (1:10 - 1:60) преодолеть естественные бактерицидные свойства крови.
В плотные питательные среды для культивирования стафилококков добавляют соль 6-10% для подавления сопутствующей флоры, желток (для изучения лецитовителлазной активности), молоко (для усиления пигментообразования). Для определения наличия гемолизинов используют среду с содержанием крови. Петлей или шпателем материал засевают в чашки с агаром, которые инкубируют 18 — 24 ч при 37 °С и столько же — на свету при комнатной температуре (для более четкого пигментирования колоний). На следующий изучают выросшие колонии. Подозрительные колонии пересевают на скошенный МПА.
Через 18-24 часа проверяют чистоту выделенной культуры на скошенном МПА, ставят тесты и делают посевы для её идентификации. Независимо от исследуемого материала при идентификации чистой культуры стафилококков изучают морфологические и тинкториальные свойства, что позволяет подтвердить отношение к семейству Micrococcaceae; биохимические свойства: наличие каталазы также подтверждает отношение к семейству Micrococcaceae. ферментации глюкозы в анаэробных условиях - для определения рода Staphylococcus, маннита в анаэробных условиях - видовой признак S. аureus. Среди факторов патогенности наибольшее значение для идентификации имеют:
1. Плазмокоагулаза. На основе способности коагулировать плазму род стафилококков делиться на коагулазоположительные стафилококки (КПС), к которым относится S. aureus и коагулазоотрицательные (КОС) S.epidermidis, S. saprophiticus
2. Гемолизины. Гемолитической активностью обладает, как правило, S. аureus – вокруг колоний образуется прозрачная зона гемолиза.
3.Лецитовителлаза. Фосфолипиды желтка являются субстратом для фермента лецитиназы (липазы), который продуцируют некоторые стафилококки, чаще всего S. аureus.
Обязательно определяют чувствительность штамма к антибиотикам, а при вспышках (например, ИСМП) — фаговар.
Вспышка пищевой токсикоинфекции у детей. Прослеживается связь с продукцией одной и той же молочной кухни.
Разработать схему расследования вспышки. (эшерихии, шигеллы, тиф, сальмонеллез, чума, холера, бруцеллез, сибирская язва, клостридии, дифтерия, туберкулез)
Задача 2.
Микроскопия остатков продукта позволит предположить этиологию заболевания. Для подтверждения диагноза как в материале от больного, так и в продукте необходимо выявить экзотоксин. Для этого может быть поставлена биологическая проба или ИФА.
Участковый врач или средний медицинский работник, которые оказали медицинскую помощь пострадавшим, а также установили или заподозрили пищевое отравление, обязаны:
1) немедленно известить о пищевом отравлении по телефону, телеграфу или с нарочным местный ЦГиЭ. Направить в ЦГиЭ экстренное извещение по установленной форме № 58 (прил. 7); срок отправки в сельской местности — 24 ч; в городе — 12 ч;
2) изъять из употребления остатки подозреваемой пищи и немедленно запретить дальнейшую реализацию этих продуктов;
3) взять образцы подозреваемой пищи, собрать рвотные и каловые массы заболевших, промывные воды желудка и мочу для бактериологического анализа, при наличии показаний — взять кровь из локтевой вены для посева на гемокультуру (в случае оказания помощи врачом) и направить на исследование в бактериологическую лабораторию ЦГЭ.
Все пробы для анализа следует собирать в стерильную посуду. В случае отсутствия стерильной посуды чисто вымытая стеклянная посуда должна быть прокипячена в воде перед использованием.
Отбор проб для бактериологических исследований и порядок направления их в лабораторию осуществляется в соответствии с нормативными документами (прил. 8).
Больной с менингеальной симптоматикой: помраченное сознание, ригидность затылочных мышц, температура тела 39-400С, интоксикация. Менингиту предшествовали катаральные явления.
Определить и обосновать схему диагностики для установления возможно менингококковой этиологии заболевания.
Задача 3.
Основной метод микробиологической диагностики менингококкового назофарингита – культуральный. По-возможности посев материала производят у постели больного. Бактериологическому исследованию подвергают носоглоточную слизь. Посев материала для получения чистой культуры производят на плотные или полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку крови, кровь или асцитическую жидкость. Посевы инкубируют в течение 18-24 часов при 37°С в атмосфере углекислого газа (8-10%). Идентификацию выделенной культуры проводят на основании следующих свойств: - продукция оксидазы; - ферментация глюкозы и мальтозы до кислоты; - принадлежность к серогруппам в реакции агглютинации.
Обращение пациента с явлениями гнойного уретрита. В анамнезе: половой контакт 3-е суток назад. Объективно: обильные гнойные выделения из уретры.
Задача 4.
Определить этиологию, обосновать методы диагностики.
Бактериоскопическое исследование является наиболее распространенным методом диагностики гонореи, особенно у мужчин. При этом готовят два мазка, один из них окрашивают метиленовым синим, а другой - по Граму. При окраске метиленовым синим на фоне лейкоцитов и эпителиальных клеток, цитоплазма которых окрашена в бледно-голубой цвет, выделяются кокки интенсивно синего цвета. В мазке, окрашенном по Граму, на розовом фоне протоплазмы лейкоцитов выделяются гонококки ярко-розового цвета. В окрашенных препаратах наблюдается незавершенный фагоцитоз. Иммунофлюоресцентный метод позволяет выявлять гонококки при наличии в исследуемом материале ассоциаций микроорганизмов. В настоящее время для диагностики гонореи рекомендована полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для забора материала используются эндоцервикальные, влагалищные тампоны и мужские уретральные тампоны.
На животноводческом комплексе 3 случая заболевания у сотрудников. Клиника полиморфна: поражение крупных суставов, пневмония, спленомегалия. Заболеваниям предшествовала эпизоотия у коров: происходили выкидыши. Больные госпитализированы с подозрением на бруцеллез.
а) Методы лабораторной диагностики для подтверждения диагноза у больных.
б) Лабораторные методы обследования остальных сотрудников.