7. В стационар поступил пациент с диагнозом “Острое респираторное заболевание”. Какими микробиологическими методами можно уточнить этиологию заболевания?

• Экспресс диагностика: иммунофлюресцентный метод, ИФА.

Метод иммунофлюоресценции: больному в носовой ход вводится шлифованное стекло и делается легкий соскоб. Потом стекла обрабатывают люминесцирующими сыворотками и, если в клетке есть вирусный антиген, антитела будут с ним реагировать, и мы увидит свечение.

Второй способ - для получения клинического материала поочередно в обе полости носа на глубину 2–3 см вводят тампон легким движением по наружной стенке носа. Затем тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход, прижимают наружную стенку носа и вращательными движениями тщательно снимают слущенный эпителий. Тампоны погружают в пробирку с 2 мл фосфатно-буферного раствора (ФБР). Взятый биоматериал быстро (в течение 1–4 часов) доставляют в лабораторию.

• Иммуноферментный метод обнаружения вирусных антигенов используется для ранней дифференциальной диагностики гриппа типа А или В путем выявления вирусных антигенов в носоглоточных секретах (аспираты, смывы) от больных с симптомами ОРВИ.

Метод может быть использован для мониторинга инфекционного и вакцинального процесса, для изучения острых и хронических форм вирусных инфекций, расшифровки природы эпидемических вспышек и индивидуальной диагностики.

• Вирусологический. Берут смыв из носоглотки больного, заражают куриный эмбрион, после инкубации проверяют наличие вируса по реакции гемагглютинации, титр вируса определяют в реакции торможения гемагглютинации.

• Серодиагностика. Диагностическим критерием является нарастание титра антител. Это ретроспективный метод.

7. В инфекционную больницу поступил пациент с диагнозом “Дифтерия”. Составить алгоритм микробиологического исследования биоматериала для уточнения этиологии заболевания.

• Исследуемый материал – слизь из зева, носа, пленки с миндалин, раневое отделяемое, кровь.

При наличии псевдомембран (ложных пленок) или дифтерийной пленки, по возможности, следует взять мазок из-под ложной пленки или взять на анализ небольшой участок пленки. Мазки на посев следует брать даже если антибактериальная терапия к этому моменту уже началась.

• При отправке образцов врачи должны известить местную лабораторию о подозрении на дифтерию.

1. Бактериоскопический метод – микроскопия мазков из исследуемого материала (окраска по Граму, Нейссеру, Леффлеру).

2. Бактериологический метод – выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация. Необходимо не только выделить из исследуемого материала дифтерийную палочку, но и определить ее токсигенность.

• Определение токсигенности С. dphtheriae:

• Биологическая проба на животных – внутрикожное заражение морских свинок фильтратом культуры дифтерийных бактерий – вызывает некроз в месте введения. Минимальная смертельная доза (20-30 нг) убивает морскую свинку на 4-5 день;

• Заражение куриных эмбрионов (наблюдается гибель под действием токсина);

• Внесение в культуру клеток (выявление ЦПД);

• Метод твердофазного ИФА с меченными пероксидазой антителами;

• Использование ДНК-зонда для обнаружения tox-оперона в геноме;

• Тест Элека и Оухтерлони (1948 г.) – основу составляет способность токсина и антитоксина диффундировать в агар и образовывать преципитаты (усы, стрелы) по ходу диффузии – метод двойной преципитации в геле, предварительный ответ может быть выдан через 48 часов, через 72 часа – заключение о наличии токсигенных коринебактерий, через 96 часов – окончательный ответ.

3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, реакция Шика.

4. Экспресс – диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция ко-агглютинации.

6. Биохимический и молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox-гена). При получении положительного результата ПЦР на tox-ген следует действовать незамедлительно, не дожидаясь результатов теста Элека. Отрицательный результат ПЦР на ген дифтерийного токсина является окончательным, и по этим изолятам не требуется проводить дальнейшие тесты на токсигенность.

12. В природном очаге отмечено несколько случаев заболевания людей с подозрением на бубонную форму чумы. У одного из заболевших проведены бактериоскопия содержимого бубона и посев на мясо-пептонный агар для выделения чистой культуры. В мазке, окрашенным метиленовым синим, обнаружены мелкие овоидные, биполярно окрашенные палочки. После суточного инкубирования посева рост на питательной среде не отмечался. Для подтверждения диагноза была взята кровь больного и проведена биологическая проба, сделан мазок-отпечаток из органов животного. Результат микроскопии при окраске метиленовым синим: синего цвета овоидные, биполярно окрашенные мелкие палочки на фоне клеток ткани животного. Перечислите микробиологические методы, подтверждающие этиологию заболевания.

1. Для начала стоит сказать, что микробиологическая диагностика проводится, в специализированных противочумных лабораториях, обученным и заранее привитым против чумы персоналом, так как чума по степени опасности относятся к особо-опасным инфекциям. Сотрудники работают в противочумных костюмах.

2. При микроскопии мазка видны биполярно окрашенные грамотрицательные палочки, что позволяет поставить предварительный диагноз.

3. Методы:

Биопроба проводится путем накожного или внутрибрюшного заражения морских свинок. При вскрытии – гемморагическая септицелия. Микроскопированием мазков-отпечатков устанавливают наличие возбудителя.

Бактериоскопическое исследование. Из исследуе­мого материала готовят мазки, окрашивают по Граму и водным раствором метиленового синего. Бактерии чумы представляют собой грамотрицательные палочки овоидной формы.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на чашки с питательным агаром. Посевы инкубируют при 25С. Первичное изучение посевов производят через 10ч. К этому сроку появляются колонии, которые образованы вирулентными R-формами. Мало- и авирулентные бактерии формируют S-формы колоний. Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бак­териальных клеток, характеру роста, антигенным и биохимиче­ским свойствам, чувствительности к специфическому фагу и биопробе.

На бульоне бактерии образуют пленку; ферментируют многие сахара до кислоты, индола не образуют, желатин не разжижают. Содержат групповой термостабильный соматиче­ский антиген и специфический термолабильный капсульный ан­тиген.

Экспресс-методы лабораторной диагностики:

1.Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутст­вие возбудителя как в патологическом материале, так и в объ­ектах окружающей среды (вода, воздух), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люмине­сцентную видоспецифическую противочумную сыворотку, люминесцентные противокапсульную и противосоматическую сыворотку.

2.РПГА - для обнаружения антигенов бактерий в материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела которой нагружены на эритроциты.

13. При поступлении пациента в приемное отделение врач отметил у больного сухой кашель, увеличение печени и подмышечных узлов, которые были малоболезненны и имели четкие контуры. Был поставлен предварительный диагноз туляремия (?). Однако при посеве содержимого бубона на желточную среду Мак-Коя чистую культуру Francisella tularensis выделить не удалось. Можно ли исключить туляремию? Составить алгоритм микробиологического исследования материала.

В большинстве случаев F. tularensis выделить из клинического материала с помощью бактериологического метода невозможно. Поэтому исследуемым материалом сначала заражают гвинейских свинок (лучше) или белых мышей, а потом от них выделяют и идентифицируют чистую культуру.

Предпочтение отдается серологическим реакциям и аллергическим пробам (в обычных клинических условиях для диагностики туляремии проводят только серологические реакции и аллергическую пробу с тулярином. Начиная с 10-12 дня болезни ставят объемную реакцию агглютинации, которая по методике не отличается от реакции Райта. У больного берут 2-3 мл крови из локтевой вены или пальца, получают сыворотку, которая должна быть абсолютно прозрачной. Реакцию ставят с разведенными сыворотки от 1:50 до 1:800, сопровождая ее соответствующими контролями. Антигеном в реакции агглютинации служит туляремийный диагностику). Поэтому, исключить туляремию нельзя.

13. В клинику поступил больной с предварительным диагнозом сибирской язвы, кожная форма (?). В отделяемом карбункула обнаружены грамположительные палочки, расположенные единично, попарно или короткими цепочками, напоминающими бамбуковую трость. На чашке с МПА из отделяемого карбункула выросли колонии, край которых напоминает львиную голову. В мазке-отпечатке органа белой мыши на красном фоне видны крупные, расположенные цепочкой палочки, окруженные бесцветной капсулой, общей для всей цепочки (окраска фуксином). Перечислите микробиологические методы, подтверждающие этиологию заболевания.

Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы.

Микробиологические методы, подтверждающие этиологию заболевания:

• Бактериоскопический метод - мазке из патологического материала окрашивают по Граму и для выявления капсул - по Романовскому- Гимзе или раствором метиленового синего (синька Мансона).

• Бактериологический метод с выделением чистой культуры на МПА и МПБ, кровяном агаре. Ставят тесты «жемчужного ожерелья», чувствительность к фагу.

• Биологическая проба на морских свинках и мышах.

• Кожно-аллергичекая проба с антраксином. Реакция термопреципитации по Асколи при определении сибереязвенного гаптена в загнившем материале.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ

Вариант №1

1. Для эшерихий характерно образование:

а) сероводорода

б) индола

в) молочной кислоты

г) уксусной кислоты

2. Назовите факторы патогенности эщерихий:

а) холероподобный энтеротоксин

б) шигоподобный цитотоксин

в) индол

г) эндотоксин

3. Для постановки серологических реакций эшерихии надо выращивать:

а) на среде Клиглера

б) на МПА

в) на среде Эндо

г) на среде Плоскирева

4. Для выделения шигелл используют:

а) среду Серова

б) среду Эндо, среду Плоскирева

в) среду с теллуритом калия

г) среду с 20% желчи

5. Укажете тинкториальные и морфологические признаки шигелл:

а) грамположительные, бесспоровые, неподвижные палочки

б) грамположительные, бесспоровые, подвижные палочки

в) грамотрицательные, бесспоровые, неподвижные палочки

г) грамотрицательные, бесспоровые, подвижные палочки

6. Колонии шигелл на среде Плоскирева выглядят следующим образом:

а) бесцветные, прозрачные в проходящем свете

б) слабо-розовые

в) матовые, непрозрачные в проходящем свете

г) малиновые

7. Через 6 месяцев после перенесенного брюшного тифа при полном клиническом выздоровлении из фекалий больного постоянно высевается возбудитель брюшного тифа S.typhi. Это является примером:

а) суперинфекции

б) бактерионосительства

в) вторичной инфекции

г) повторной инфекции

8. Методом ранней диагностики сальмонеллеза является метод:

а) исследования гемокультуры

б) исследования фекалий

в) исследования мокроты

г) исследования желчи

9. Для выделения из испражнений сальмонелл используют:

а) селинитовый бульон, среды Эндо, Плоскирева

б) магниевую среду, агар Калины

в) среду Мюллера, кровяной агар с теллуритом калия

г) среду Кауфмана, щелочную среду

10. Патогенные для человека виды сальмонелл включены, в основном:

а) в 1 подрод

б) во 2 подрод

в) в 3 и 4 подрод

г) в 5 подрод

11. Признаками, идентифицирующими возбудителя холеры, являются:

а) ферментативная активность

б) чувствительность к специфическим бактериофагам

в) антигенная структура

г) чувствительность к антибиотикам

12. Источниками холеры являются:

а) больные острой формой

б) больные стёртой и атипичной формой

в) животные

г) вибрионосители после перенесённого заболевания

13. Укажите пути передачи характерные для холеры:

а) вoдный

б) воздушно - капельный

в) контактно-бытовой

г) пищевой

14. Оптимальные условия культивирования холерного вибриона:

а) температура 24 - 28°С

б) аэрация

в) рН 5,6 – 7,0

г) наличие в среде 3 – 5% хлорида натрия

15. Для диагностики холеры используют метод:

а) бактериологический

б) биологический

в) кожные тесты

г) серологический

16. По эпидемиологическим показаниям на холерный вибрион исследуют:

а) воду

б) пробы воздуха

в) пищевые продукты

г) грызунов

17. Назовите патогенетический аспект V. cholerae :

а) токсин, блокирующий выделение ацетилхолина в нейромышечных синапсах

б) поражение капилляров печени

в) поражение капилляров почек

г) инвазия в слизистую оболочку толстой кишки с последующим межклеточным распространением

18. Инструментарий для ректального отбора материала на холеру:

а) ректальный ватный тампон

б) алюминиевая петля

в) резиновая груша

19. Для исследования на холеру материал от людей доставляется в сроки:

а) не позже 6 часов с момента отбора

б) не позднее 3 часов

в) на жидкой консервирующей среде возможно сохранение до 3-х суток

г) не позже 10 часов с момента отбора

20. От умершего с подозрением на холеру доставляют для исследования:

а) отрезки тонкого кишечника

б) отрезки толстого кишечника

в) почки

г) печень

21. . Источники возбудителей бактериальных зоонозов:

а) человек в) вода

б) животные (грызуны) г) воздух

22. Морфология возбудителей бруцеллеза:

а) коккобактерии, палочки б) нитевидные

в) диплобациллы г) извитые

23. Какой из возбудителей зоонозных инфекций является спорообразующим:

а) бруцелла

б) франциселла

в) сибиреязвенная палочка

г) иерсиния

24. В качестве ускоренных иммунологических методов исследования на чуму используют следующие:

а) иммунофлюоресцентного анализа в) метода Ермольевой

б) РНГА г) иммуноферментного анализа

25. Продукция экзотоксина Y. рseudotuberculosis стимулируется под действием:

a) низкой температуры в) сыворотки

б) антибиотиков г) вакцины

26. На каких питательных средах лучше растут возбудители бруцеллеза:

а) печеночный МПБ в) сахарный МПБ

б) МПА г) кровяной МПА

27. Y. pestis выделяет бактериоцины, оказывающие бактерицидное действие на микроборганизм:

a) Y. рseudotuberculosis в) S. aureus

б) E. сoli г) H.pylori

28. Назовите основные методы диагностики сибирской язвы:

а) микроскопический г) бактериологический

б) иммунологический д) аллергический

в) биологический

29. Факторами вирулентности Y. enterocolitica считают следующие:

a) адгезины и инвазины в) энтеротоксин

б) низкомолекулярные протеины г) мышиный токсин

30. Какая вакцина используется для активной профилактики бруцеллеза:

а) живая вакцина в) бруцеллин

б) убитая вакцина г) поливалентный бактериофаг.

31. Представители рода Staphilococcus являются а) грам-отрицательными