- •О чищення предметного скла від жиру проводиться
- •Методи виготовлення живих препаратів
- •Робота №3 дослідження фарбованих препаратів. Виявлення структур мікробних клітин за допомогою простого фарбування
- •Методика виготовлення фіксованих препаратів.
- •Способи фіксації
- •Фактори, що впливають на якість фарбування за Грамом
- •Робота №5 виявлення структур бактерій. Фарбування оболонок кислотостійких мікроорганізмів
- •Виявлення ендоспор
- •Виявлення капсул
- •Робота №6. Поживні середовища для культивування мікроорганізмів
- •К ультура мікроорганізмів т верде поживне середовище Рідке поживне середовище
ВЕТЕРИНАРНА МІКРОБІОЛОГІЯ
Змістовний модуль
«МОРФОЛОГІЯ МІКРООРГАНІЗМІВ»
Робота 1 |
ОБЛАДНАННЯ І МЕТОДИ РОБОТИ В МІКРОБІОЛОГІЧНІЙ ЛАБОРАТОРІЇ |
Робота 2 |
МЕТОДИКИ МІКРОСКОПІЧНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ. Виготовлення живих препаратів |
Робота 3 |
ДОСЛІДЖЕННЯ ФАРБОВАНИХ ПРЕПАРАТІВ. Виявлення структур мікробних клітин за допомогою ПРОСТОГО фарбування |
Робота 4 |
Виявлення будови клітинної стінки мікроорганізмів. Класичний спосіб фарбування за Грамом та його модифікації |
Робота 5 |
ВИЯВЛЕННЯ СТРУКТУР БАКТЕРІЙ. Фарбування оболонок кислотостійких мікроорганізмів |
РОБОТА №1
ОБЛАДНАННЯ І МЕТОДИ РОБОТИ В МІКРОБІОЛОГІЧНІЙ ЛАБОРАТОРІЇ
Таблиця 1. Обладнання мікробіологічної лабораторії
Вид лабораторного дослідження |
Обладнання |
№1. Мікроскопія матеріалу від хворого |
Знежирені предметні та покрівні скельця, бактеріологічні голки та петлі, розчини барвників, кислот, лугів, спирт, ацетон, вазелін, фільтрувальний папір, пальник. |
№2. Мікроскопія мікробного матеріалу, вирощеного в штучних умовах (в багатьох випадках скупчення клітин збудника мають вигляд, який відрізняється від їх вигляду в матеріалі, відібраного у тварини). |
|
№3. Мікроскопія матеріалу із уражених органів лабораторних тварин |
|
Висів мікроорганізмів з патологічного матеріалу
|
Чашки Петрі, пробірки, піпетки, колби із спеціальними або діференційно-діагностичними середовищами. |
Вирощування чистої культури збудника |
Чашки Петрі, пробірки, піпетки, колби із середовищами загального призначення |
Внесення чистої культури збудника в організм здорових лабораторних тварин (кролі, миші, морські свинки, птиця та ін.) |
Чашки Петрі або пробірки, в яких вирощено чисту культуру збудника, шприци,піпетки та ін. |
Внесення чистої культури збудника в живильні середовища специфічного складу (біохімічні дослідження або дослідження харчових потреб збудника хвороби) |
Чашки Петрі або пробірки, в яких вирощено чисту культуру збудника, пробірки із напіврідкими або рідкими середовищами, піпетки, голки, петлі, вазелін, індикаторні папірці. |
Серологічні реакції |
Чашки Петрі або пробірки, в яких вирощено чисту культуру збудника, суспензія патологічного матеріалу від лабораторних тварин, сироватка крові хворих або підозрюваних тварин. Пробірки, серологічні плашки, піпетки, предметні скельця, агар, суспензія еритроцитів, діагностикуми та ін. |
Під час встановлення видової належності збудника хвороби використовують різноманітні методи досліджень: мікроскопічні, бактеріологічні, біологічні, біохімічні та серологічні (табл 2).
Таблиця 2. Методи лабораторних досліджень
Метод досліджень |
Варіанти досліджень |
Мета дослідження |
Мікроскопія |
№1. Мікроскопія матеріалу від хворого |
Перевірка наявності збудника в патологічному матеріалі. |
№2. Мікроскопія мікробного матеріалу, вирощеного в штучних умовах
|
Виявлення збудника, форма і розміщення клітин у якого співпадають з мікроскопією №1 або характерні саме для даного біологічного матеріалу (скупчення клітин збудника мають вигляд, який відрізняється від їх вигляду в пробах, відібраних від тварини). |
|
№3. Мікроскопія матеріалу із уражених органів лабораторних тварин |
Перевірка наявності збудника, форма якого співпадає із формою збудника, знайденого в матеріалі від хворої сільськогосподарської або свійської тварини |
|
Культивування збудника (бактеріо-логічні методи) |
Висів з патологічного матеріалу
|
Виділення збудника хвороби із суміши мікробів, характерних для хворого організму. (Здійснюється на спеціальних або диференційно-діагностичних живильних середовищах) |
Вирощування чистої культури збудника |
Накопичення культури збудника хвороби. (Найчастіше здійснюється на спеціальних або на живильних середовищах загального призначення) |
|
Біопроба (біологічні методи). |
Внесення чистої культури збудника в організм здорових лабораторних тварин (кролі, миші, морські свинки, кошенята, курчата та ін.) |
Дослідження проводиться в декілька етапів:
|
Біохімічні тести (біохімічні методи) |
Внесення чистої культури збудника в живильні середовища специфічного складу. |
Перевірка фізіологічних властивостей збудника хвороби (здатності до претравлення конкретних речовин та виділення певних продуктів біохімічних реакцій) |
Серологічні та алергічні дослідження (імунологічні методи) |
Серологічні реакції |
Дослідження проводяться в декількох напрямках, в яких виявляють:
|
РОБОТА №2
МЕТОДИКИ МІКРОСКОПІЧНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ.
Виготовлення живих препаратів
Для проведення мікроскопічного дослідження використовують: предметні скельця (прямокутна скляна пластина 75*25 мм, товщина – не більше1,2 мм) та покрівні скельця (квадратна скляна пластина 25*25 мм, товщина – не більше 0,15-0,17 мм). Предметні і покрівні скельця із більшою товщиною не дозволяють отримувати чітке зображення об’єкту. Варіанти підготовки скелець до роботи наведені на рис 3.
О чищення предметного скла від жиру проводиться
Витримування впродовж декількох діб в хромовій суміші. Потім – промивання водопровідною та дистильованою водою. |
Кип’ятіння 10 хв в 10% НС1, потім – у мильному або 10% содовому розчині (нові скельця – у 1% розчині соди). |
Промивання водою та протирання ефіром. |
|
||
Зберігати чисті предметні скельця найкраще в банках або ванночках з 96% етиловим спиртом |
Рис. 3. Підготовка предметних скелець до роботи.
В залежності від виду матеріалу та мети дослідження в препараті можуть бути живі або фіксовані (мертві) мікробні клітини.
Методи виготовлення живих препаратів
Живі мікробні клітини прозорі і лише трохи виділяються на фоні поля зору у мікроскопі. В залежності від мети дослідження, живий препарат готують в двох варіантах.
В живому вигляді зручно вивчати:
морфологічні особливості таких великих за розмірами мікробних клітин як гриби та дріжджі (еукаріоти). В готових препаратах можна побачити форму клітин, спор грибів та ін. структур. Препарат готується методом “розчавленої краплі” (рис. 4);
виявляти здатність до руху у бактерій певних видів. В таких препаратих органів руху – джгутиків – не видно. Але направлений рух мікроорганізмів в полі зору мікроскопу під час тривалого спостереження забезпечують саме ці структури. Препарат готується методом “висячої краплі” (рис. 5).
1 |
2 |
3 |
На предметне скло наноситься крапля води |
В воду петлею (з колонії) або піпеткою (з бульйону, мокроти) вноситься мікробний матеріал |
Суспензію петлею розподіляють по площині 15*15 мм та накривають покрівним скельцем, тримаючи його під кутом |
Рис.4. Виготовлення мікробних препаратів методом “розчавленої краплі.
Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
1 |
2 |
3 |
На покрівне скельце обережно наноситься крапля води |
В воду петлею (з колонії) або піпеткою (з бульйону, мокроти) вноситься мікробний матеріал. Розмішується петлею |
Покрівне скельце накривають предметним склом з лункою, краї якої змащено вазеліном, і два скла разом –перегортають. |
Рис.5. Виготовлення мікробних препаратів методом “висячої краплі.
Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________