3 курс / Фармакология / Диссертация_Ефимова_А_О_Фармакологические_свойства_экстракта_Hirudo
.pdfАкционерноеобщество «Всесоюзный научцепобезопасноститрый
биологактвеществивныхчески |
» |
Направахрукописи
ЕФИМОВААЛЕНАОЛЕГОВНА
ФАРМАКСВОЙЭКСТРАКТАЛОГИЧЕСКИЕВА |
HIRUDO |
MEDICINALIS, МАЗИГЕЛЯНАЕГООСПРИНАКОЖНОМОВЕ
ПРИМЕНЕНИИ
(эксперимиссл) едованиентальное
14Фармакология.03.,06клиничесфарма аяология
Диснасоисканиеертацияученойстепени кандидмедицинскихатаук
Научныйруководитель:
Докторбиологическихнаук, профессор МитрохинН иколай Михайлович
Старая Купавна, 2019
|
|
ОГЛАВЛЕНИЕ |
|
Введение |
....................................................................................................................... |
4 |
|
ГлаваБиологические1. эффектыкомпонентовпиявкимед цинской |
hirudo |
||
medicinalis .................................празличныхзаболеванияхобзор( литературы) |
13 |
||
1.1 |
Ингибированскороскрови .....................................................свертыеания |
13 |
|
1.2 |
Антитромбиновый ...................................................................................эффект |
15 |
|
1.3 |
Тромболитическийэффект .................................................................................. |
17 |
|
1Лечение.4.трофическихязвнижко .................нечностейожоготравмых |
28 |
||
1.5 |
Нейротрофический,иммуномодулирующийантипролиферативныйэффекты |
|
|
..................................................................................................................................... |
|
|
34 |
1.6 |
Трансэпидермальноепрохождениеактивных |
компонентовэкстрактапиявки |
|
медицинской ............................................................................................................... |
38 |
||
1.7 |
Препносновеа .......................................ратыэкстрактапиявкимед цинской |
40 |
|
Глава2Материа. методыисс ............................................................ледованийы |
46 |
||
2.1 |
Материалы ............................................................................................................ |
46 |
|
2.1 |
Методыисследования .......................................................................................... |
50 |
|
ГлаваИ3. |
зучение специфической фарм активностиоло субстанции , г еля ической |
|
|
имазигирулюкс .......................................................................................................... |
60 |
||
3.1 |
Оценкапротивовоспактивностиэкстрак,м геляельнойзнаосновеа |
|
|
экстрактапиявкимедприформалиновомцинской .......................................отеке |
60 |
||
3.2 |
Оценкапротивовоспалактивностисубстанции,мазигеляэкстрактательной |
|
|
пиявкиприфет« »гровойанулемекрыс ................................................................ |
63 |
||
3.4 |
Оценкапротивовоспалительного ......................действпризажранявлении |
66 |
|
3.5 |
Оценкапротивов .....................................действияприоспалительногожогах |
68 |
|
3.6 Оценкавлиянмазгелсэкстрактомияпиявкинавремясвертыкровиу ания |
|
||
кроликов...................................................................................................................... |
|
70 |
2
Глава4. |
Изучение острой , под стройксичности местнораздражающего |
|
действия геляимазинаосновеэкстрактам дицинскойпиявки |
.............................72 |
|
4.1 Изучениеостройтоксичности ............................................................................. |
72 |
|
4.2 Изучениесубхронтоксическойности .............................................................. |
73 |
|
4.3 Патоморфологическоеисследование .................................................................. |
84 |
|
4Местнораздражающее.4. действие ......................................................................... |
87 |
|
Глава5Обсуждение. результатисследования ...................................................... |
89 |
|
Выводы |
........................................................................................................................ |
96 |
Списоксокращений .................................................................................................... |
99 |
|
Списокцитированнойлитературы .......................................................................... |
100 |
3
|
ВВЕДЕНИЕ |
|
|
|
|
|
|
Актуальнисследованиясть |
|
|
|
|
|
|
Всистемездравбовниманиельшоеохранеуделяютсозданиюияовых |
|
|
|
||
высокоэффективныхбезопалекаредствственных( |
|
|
|
Shakouri A. et al., 2018; |
||
Meng Z., Huang R., 2018),втомчислесердечно |
-сосудистой |
|
||||
противовоспалнаправленности.Регуля,притерапипрепаратамительной, |
|
|
|
|||
представленнымикакпродуктамихимсинтеза,ческоготакж иливотного |
|
|
|
|
||
растительногопроисхождения,отмечаютспобочныеэффекты( |
|
|
|
Quan L. et |
al., |
|
2016),чтовнекотослучаяогрыхан |
|
|
ичиваетвозможихклиностьического |
|
||
применения. |
|
|
|
|
|
|
|
Актуальнапроблемапоискановыхпотенциальныхлекарственныхсредств |
|
|
|
||
(Heier C. R. et al., 2013,ПахомоваЕ..идр., 2015,ЭмеТ.А.ид.,рова2015, |
|
Nishino |
||||
H. et al., 2016)Отправной. точкойисследованийявл |
|
яетсямноговековаяистория |
|
|||
примененияклассическметодовлеченихя |
|
|
- |
фитотерапия,апитерапия, |
|
|
гирудотерапиядр.кото, насвыядутерапевтичесокойактивностьюкой |
|
|
|
|
||
демонстрируютминимальныепобочныеэффекты( |
|
|
|
СлободскаяН.., 2016 |
). |
|
Большинствоизвестны |
хантикоагуляобладаютпобочэффектами,нтовыми |
|
|
|||
настотношениемроженкихпримененвтеымрапиизлзаболеванийючных |
|
|
|
|||
(ЛатфуллинИ.А.Подольская, А.., Марцев2006;С.Ю.Лук, Ю.В.и, чна2011; |
|
|
|
|
||
Capodanno D. et al., 2016; Sherman R. A., Cooper E. L., 2018). |
|
|||||
|
Аналмноговековойизсторииуспешногоприменениямедицинскихпиявок |
|
|
|
||
длечениярядазаболеванийсвидетельсвысокойантитвуетромботической |
|
|
|
|||
эффективностикомпонсекрслюнныхжелезнтовтап явок( |
|
|
|
Frolov A. |
K., |
|
Litvinenko R. A., Особого2015)вни. |
маниязаслуживаютположительные |
|
||||
результатыгирудотерапииприсердечно |
|
|
-сосудистыхзаболеваниях,процессе |
|
||
лечениякоторыхпроявляютсяпротивотромботтромболитическоее, |
|
|
|
|||
противовдействиякоспалимплебиологктсавеществельноеивныхчески |
|
|
|
|
||
(БАВ)пия |
вкимедицинской |
Hirudo medicinalis (НиконовГ.И., Баскова1998;И.П., |
|
|||
2004; Neun B. W., Dobrovolskaia M. A., 2018). |
|
|
4
Пиявка Hirudo medicinalis являетсяисточникомуникальныхсоединений, |
|
|||
синтолькоезируеживотныхэтвидом.Преждевсего,этогирудин |
|
|
- |
|
высокоспецифичныйингибитортромбинаБаскова( И.П.Исханян, Г.С., 2004); |
|
|
|
|
простагландиныпоспектруфармакологдействподобныеияческого |
|
|
||
простациклину( |
PGF1α),которыеобес,впечиваюточередьрвую,блокаду |
|
|
|
тромбоцитарно-сосудисзвенавнумехатогоренсвертынкризмаегоования |
|
|
||
(Nesemann H., 1999; Siddall, M.E., 2011; Lui C., Barkley Jr T. W., 2015); |
||||
дестабилазныйкомплекс |
|
– примерприродной |
липосомылифункционального |
|
(преждевсего, тивотромботическоготромболи)дейс вия |
|
|
||
(O'Donnell M.J., 1997; Trontelj P., 2004; Frolov A. K., |
Litvinenko R. A., 2015). |
|||
ПонимдействиямеханисекретазмовслюнныхжелезССЖ()медицинских |
|
|
||
пиявокпозволцеленаистпэтотользоватьравленноприродныйингибитор |
|
|
||
тромбообразованиякачествефармакологическогосредства. |
|
|
||
Донастоящеговременикачл карственфоп епаратовмнаосновеых |
|
|
||
медицинскойпиявкииспользуютжидкиеввиде(растворов |
|
|
длявнутривенных |
|
инъекций)илитвердыелекарственныеформы(видетабкапсулетоки). |
|
|
|
|
Степеньразработанноститемы |
|
|
|
|
Пиявкамедицинская |
Hirudo medicinalis имеетноговековойопытуспешного |
|||
применениявклассическойсоврмедицинеменнПетров( И.Р.соавт.,й1936; |
|
|
|
|
НиконовГ.И.соавт., Рассадина1995;Е.В., 2006; |
|
Linnaeus C., 1758)Болеечем. |
||
полуторависторияизучениям ханизмдействияковаябиологиче |
|
|
скиактивных |
|
соединений,продуцируемыхмедицинскимипиявками,создаетпре ляпосылки |
|
|
||
расшиобластпримененияягирудотерсозданиярядалекарственныхпии |
|
|
||
препаратовнаихосновеНиконов( Г.И.соавт., 1998, 2015; |
|
|
Baskova I.P. et al., 2008; |
|
Elliott, J.M., Экстракт2011)пиявокявляетсяисточником. уникальных |
|
|
||
компонентов,дейснаправленовиеорыхпрофилактикулечениетромбозов, |
|
|
||
атеросклероза,гипертенз,воспалпроц,исердечноит ссовльных |
|
|
-сосудистых |
|
кожныхзаболеванийт.д.Волк(Р.Б., 1950 |
|
|
;ГеращенкоЛ., Григ2008;.Н., рьев |
1998; Davies R.W. McLoughlin N.J., 1996)Разработанивнед. п еактикунные лекарственныеформы:гирулюкспиявитжелатинов( капсулыдля е
5
пероральногоименения)являютсяпреп«апоколениярвогоатами»,посколь |
ку |
|
входящийихсоставкомплебиологактвеществи,вныхпродуцируемыхчески |
||
медицинскимипиявкамиобеспечивает:профилактикулечениетромбозов, |
|
|
атеросклероза,гипертенз,воспалпроц,исердечноит ссовльных |
-сосудистых |
|
кожныхзаболеванийт.д.Втоже |
время,п ядепатологий,связанных |
|
нарушениямивсисвт кровиртыме,такжедляпрофилактикиания |
|
|
послеоперационныхтромбозоввозникаетнеобходимостьнаправленного |
||
антикоагулянтногодействия,безвоздействиянасистемыфибринолиза, |
|
|
комплементаивн |
ешниймеханизмсвертыкровиНиконов( Г.И.аниясоавт., 2001; |
|
БасковаИ.П. |
,ИсаханянГ.С |
., Лебеде2004;А.О.исоа., в2014)Висследованиит. |
B. Risberg,изученовлияниеHгирудоид.«I.»кремаPetersonна |
(1976), |
|
процессфибриннамоделяхк крысжииза |
человека,подтверждено |
положвликряниетвлечениильнматромбофлебита.
Предметомнастоящегоисследовяв зучениелосьфармакологическихния
свиойствбщетоксдействиясубстанциимягкихчеслекарственныхогоф рм |
|
наосновеэкстрактапиявкимед цин |
ской. |
Цельисследования |
|
Экспериментобосновпримемазигеляснльэкстрактомиеноеия |
|
медицинскойпиявкидлятерапиивоспалительных,гемо,раневыхрагических |
|
поврежд,снижактивностиенисвертывающейясистемыкрови. |
|
Задачиисследования: |
|
1. Исследоватьпротивоводействиеэк пиявкитрактапалительное |
|
медицинскойЭМП(),мазигелянаосновеЭМПнамоделяхвоспаленияу |
|
животныхприформалиновомотекелапыу фет«шей»г овойанулемыкрыс |
|
всравнеэффектаминиилекарственныхогичных |
ормгепарина |
диклофенаканатрия. |
|
2. Провестисравнисслтельноерапевтическойдованиеэффективности |
|
ЭМП,гелясЭМПигепариновогогеля |
пригеморрагическихповреждениях |
(эксперименподкожнаягема)мягкихтальнаяканейомаукрыс. |
|
6
3.Провестисравн тел ьноеисследованиепротивовоспалительной
активностипранахожогах |
перспективныхлекарственныхпрепаратовЭМП, |
|
гепариновоймазигеля |
принаружномприменении. |
|
4Исследовать. противосвертывающуюактивностьЭМП |
,мазигелясЭМП |
|
всравненииактивнос |
тьюмазигелягепарина |
принакожномпримененииу |
интактныхкроликов. |
|
|
5Провеизучение. остройтоксичности, |
общетоксического |
|
местноразддействиярмягкихаботлекжающегоформрственныхых |
|
|
основеЭМП,какпотенциальныхлекарственныхсредств. |
|
|
Научнаяновизна |
|
|
Впервыепоказано,что: |
|
|
• субстанция,гельмазьгируоблвысокойюксадают |
|
|
противовоспалитеэффективннамоделиформалиновоготекастьюапыуьной |
|
|
мыши фе»йтг«ровойанулемыкрыс. |
|
Повыраженности |
противовоспалительногоэффекта |
препаратыгирулюксуступаютмази |
|
дикл,нпревосходятфенакоммазьгепарином; |
|
|
•ЭМП,гельимазьнаегоосновеэкспенарпроявляютиментахысах противовоспактивнприож,зоалительнуюгахключающуюсястьвускорении заживленияожоготравм; ых
•принакожныхаппликацияхпроисхдостувеличениеодитверноевремени
свертыкровиинткроликованияктных в1,3разапринакожнойаппликациимази гирулюкс,в1,2разаприаналогичнойапплгелягирулюкскации;
• ЭМП,разработанныемазьигельЭМПпринакожно применении вызываютлетальныхисходовилитоксическихэффектоввплдо ть4000зы мг/кг;
• подействиюнагематологичбиохимические, ,интегральные показатели,функциональморфологическуюсостояниесистеморга, нов
структурувнутреннихорганов экспержимягкиевотныхентальных лекарственныеформыЭМПгирулюкс« ,мазьдлянаружногоприменения»
«гиру,гедлянаружюксьприменения»вызываютоготоксическиеэффекты,
7
местноераздражающеействиедозах,многократнопр вышающих |
|
|
терапевтические длячеловека. |
|
|
Теоретическаяпрактическаязначимостьработы |
|
|
Полученныерезультасвидевозможностиельствуютырегистрации |
|
|
РоссийскойФедерациипотенцлекарственныхпрепаальныхги« , улюксатов |
|
|
мазьдлянаружногопримен»гиру« , елдлянияюксьару |
жногоприменения» |
|
дляприменениявкачеспротивоввеотивосвертывающегоспалительного |
|
|
средстванаосновеэкстрактапиявкимедлиофилизированнойцинской. |
|
|
|
Методологияметодыисследования |
|
|
Работапоизучспецнфармиюфическойактивностиологической |
|
выполненалабогрызунахаторныхивключаетэкспериментынаинтактных |
|
|
животныхсэкспериментальнымвоспалением. |
ЭМП |
|
лиофилпринаружноменялизированнойтерапевтическойдозе. |
Расчётдоз |
|
проводили,испк льзуяэффицпересчдозжинавоечеловеканттаного |
|
|
согласнометодическимуказания,вРуководстве" поэкспериментальному |
|
|
изучениюновыхфармакологическихвеществ" (2012). |
Исследование |
|
противовоспалдействияЭМПлиофительного |
лизипотенциальныхрованной |
|
мягкихлекарственныхформнаееоснове |
- «гирулюкс,мазьдлянаружного |
|
примен»гиру« ,гедляниянаружногоюксьприменения» |
- проводилина |
|
моделяхформалинового« »отекалапыу фетр«шей» анулемыкрысвой |
|
|
(ШварцГ.Я., |
СюбаевР.Д., Ранозажи2000)св. йстваценивалляющие |
|
экспенар,которымиментахысахнанпоскожнилилойраАлиповны( ее |
|
|
В.., 2010)Противоожсвойстваизучали. наможделиговыек укрысжи |
|
|
(КолсановА.В.Алипов, В..Добрейкин, Е.А., 2011) |
.Влияниенаскорость |
|
рассасыванияподэкстравазацийожныхкровиоценивали,моделируя |
|
геморрагическповреждениямягкихтканейукрысмеханическимвоздействием
(ШварцГ.Я.Сюбаев, Р.Д., Оценку2000)противосвертывающей. активности осущевэкспериметвляли нткроликах,путемрегистрации тромбоэластограмм.
8
ВсоответсттребованиямиМинздраваРоссиипрег страции
лекарственныефопрепаратамыподлежаттоксикологическомуисследованию
остромисубхроничэксперимеоценместраздражаюконймтеого |
щего |
действия.Всоответствиивыше следоваказаннымвып гласнолнялиия
утвержденписьменнпротстандаомуколумупертнымационным
процедурСОП( )лабораторииф рмаколАОВсер« научоссцегиинйскийтрый
побезопасностибиологактвещвныхчески |
еств»Вэкспе. опредимелялисьнте |
интегрпоказатели,функциольныесостояниесистемальноеовных:
гематологичеческиее,биохимпоказате, истолзмогическиерганенияов
итканей.Вработеприменялфармакологические,гистологическиесь,
биохимические,статисмеисследованиятодыические.
Личныйвкладавтора
Авторпринималнепосредствучастиеопределенииц линное исследованияпутеер ализациий,планировавыполэкспн. еиинриментаи
Всеэкспроериментыаведенлторомиличноприегоактив номучастии.
Авторомпроводилисьфармакологическиетоксикологичвиды ские исследований,анализ,статистичесобработ,научноеобоснованиекая
обобщениеполученныхрезультатов.Публикподготовленыприцииктивном учавс.тораии
Степеньдостоверности езультатовпроведенныхисследований
Вдиссертационнойработеиспользоваменныесоврметодики, |
|
|
позволдостовяющиеучнформациютьфармакологическойрную |
|
|
активностипротивовосп( ,антико) атенциальныхлительгулянтной |
|
|
лекарственныхпрепаратовна |
сновеэкстрактапиявки |
Hirudo medicinalis. |
Достповерностьлученныхрезульпод достаточныматовверждаетсяобъемом |
|
|
проанализировматериалапоизучаемойтеме,использнногомет, дикванием |
|
|
адеквапостзаныхвленнымдачамиприсовременныхенениеметодован |
|
ализа. |
Обоснованннаучныхвывип дподтверждаелостьженийрезультатамися |
|
|
проведенныхэксперимисслневызывантальныхдованийсомн.Выводыений |
|
|
объективнополноценноотражаютполученныерез.Сучетомль аты |
|
|
9
вышеирезпроведенноголоженногоультаты |
исследованияследуетсчитать |
|
достоверными. |
|
|
Основноесодержаниедиссертацииопубликованонаучных11работах, |
|
|
томчислев4жу,рекомендованныхналахВАКприМинистерствеобразования |
|
|
наукиРоссийскойФедпублляерацинкацииовныхаучныхрезультат |
ов |
|
диссертации. |
|
|
ТемаданногоисследованияутвержденазаседаУчесоветаАОииого |
|
|
«Всероссийскнаучцепобезопасноститрый ийологактвеществи»вныхчески |
|
|
(протокол№418г..и)11включена.пл2014учно |
|
-исследовательской |
работыНИР(). |
|
|
Связьтемыдисспланомертациинаучно |
-исследовательскойработы |
|
учреждений Диссертационнаяработавыполненарамкахкомплекснойтемы |
|
|
лабораториифармакологииАОВНЦ«БАВ»ЗАОМЦМП«»наосновании |
|
|
договорасовместномсотрудничестве. |
|
|
Внедрениев |
практикурезультатисследований |
|
Приизучспенцфармифическойактологическойисследуемыхвности препаратовопределеныпокприменениюазаниягелямази.Врамках совмесотрудничестванаучногоАОВНЦ«БАВ»сЗАОМЦМП«»
произведеныопытно -промышленныепартиипотенципрепаратов. льных
Выявленнаяперспективностьиспользованияисследуемыхпрепаратовнаоснове
ЭМП гирулюкспослужилаобоснованиемподготовкидокументациидля
регистрациилекарственныхпрепаратов« |
гирулюкс,мазьдлянаружного |
применения» и« гирулюкс,гедлянаружногоьприменения».
Оснположениявные,вы защитуосимые:
1ЭМПв. эксперименаживотпринакожномприменениитахыхобладает
противовоспалпротивосвертывающейактивностями,способностительной
восстановлениямягкихтканейпр |
игеморрагическихповреждениях. |
2Гиру. «,мазьднаружноголюксяпримен»гиру« ,гедлянияюксь
наружногоприменения»сЭМПлиофилизированнойобладают
противовоспалпротивосактивностямиэкспериментахтельнойертывающей
10