- •3.1. Онкогены
- •4.2. Выявление и мониторинг химических канцерогенов
- •5.1. Общая характеристика онкогенных вирусов
- •5.2. Онкогенный потенциал вирусов и механизмы его проявления
- •5.3. Вирусы папиллом и их роль в канцерогенезе шейки матки
- •5.4. Роль вируса гепатита в развитии рака печени
- •5.8. Ретровирусы типа D (SRV)
- •5.9. Эндогенные ретровирусы человека
- •5.10. О возможном участии ретровирусов в индукции рака молочных желез человека
- •7.1. Цитоскелет
- •7.2. Распластывание и локомоция нормальных клеток
5.8. Ретровирусы типа D (SRV)
В. А. Морозов, К. В. Ильин
Ретровирусы типа D, или, как их теперь называют, "ретровирусы обезь ян" (simian retroviruses — SRV), отно сятся к онкогенным вирусам, хотя онкогенными являются лишь два представителя этого рода. Название SRV, на наш взгляд, не совсем удачно, так как, с одной стороны, среди этих ви русов встречаются не только вирусы обезьян, а с другой — известны ретровирусы обезьян, не имеющие отноше ния к роду D.
У обезьян SRV встречаются доста точно широко и могут вызывать им мунодефицит, напоминающий СПИД . До сих пор нет строгих доказательств того, что эти вирусы распространены в человеческой популяции и ассоции руются с каким-либо заболеванием. В связи с этим, учитывая то, что описа ны лишь отдельные случаи заражения людей SRV, а также тот факт, что эти вирусы способны легко заражать раз личные клеточные культуры человека in vitro, их, так же как и ряд других ретровирусов обезьян, можно отнести к группе ретровирусов, которые по тенциально могут циркулировать у людей. Особняком в этой группе сто ят относительно недавно охарактери зованные онкогенные ретровирусы овец и коз. Эти вирусы вызывают у животных опухоли дыхательных пу тей, в частности контагиозный аденоматоз легкого, бронхоальвеолярную карциному и опухоль внутренней по лости носа. Ретровирусы с морфоло гией частиц типа D выделены в от дельный род подсемейства Oncovirinae (РНК-содержащие опухолеродные ви русы) семейства Retroviridae, в состав которого входят как экзогенные, так и эндогенные вирусы, имеющие общую морфологию.
Для морфогенеза SRV характерно образование в цитоплазме клеток то роидальных Α-частиц (не зрелых ядер), которые являются предшест
венниками зрелых ядер вирионов ти па D. Созревание частиц, т. е. форми рование оптически плотного зрелого ядра, происходит спустя 2—3 ч после почкования вириона от плазматиче ской мембраны клетки. У ретровиру сов процесс формирования зрелого ядра состоит в нарезании белка-пред шественника — продукта трансляции гена gag на отдельные структурные белки — матриксный (МА), капсидный (СА) и нуклеокапсидный (NC). В целом морфогенез SRV напоминает таковой у MMTV.
Род D включает группу из 5 экзо генных ретровирусов обезьян (SRV 1—5), выделенных от азиатских ма как, и два онкогенных вируса, недав но выделенных от овец и коз (JSRV и ENTV).
Прототипом рода D является вирус Mason-Pfizer обезьян (MPMV), или, по современной терминологии, SRV-3. Вирус был выделен в 1970 г. из клеток карциномы молочной железы макакирезуса. Последующие за этим много численные попытки выделить вирус от других обезьян с опухолями молоч ных желез не дали результатов. Вто рым выделенным SRV был вирус HEp-2V, изолированный из стабиль ной клеточной линии карциномы гор тани человека НЕр-2 (1972). В настоя щее время установлено, что HEp-2V представляет собой вариант SRV-1. В течение последующих лет SRV были выделены из нескольких клеточных линий человека, однако позднее было показано, что значительная часть этих культур была контаминирована клет ками HeLa, в частности субклоном, контаминированным SRV.
От павианов (Papio cynocephalus)
был выделен и охарактеризован един ственный пока вариант африканского SRV - SRV-Pc (близкий SRV-2). Этот
вирус имеет |
гомологию с |
SRV-1, |
SRV-2 и MPMV по p27 (СА) |
- 9 1 - |
|
94 % и по gp20 (ТМ) - 7 2 - 7 5 %. |
||
Известны |
два эндогенных |
SRV. |
Первый был выделен от очкового лангура (Presbytis opscuris) и получил на звание Langur Virus (LV), или РО-1-
334
Lu. Этот вирус по многим параметрам близок к SRV-3. Другой эндогенный вирус выделен от беличьей обезьяны, распространенной в Новом Свете. Ви рус был назван Squirrel Monkey Retro virus (SMRV); он заметно отличается от других представителей рода D.
В начале 80-х годов в Региональ ных центрах приматов С Ш А в Новой Англии, Калифорнии, Орегоне, Вис консине, Вашингтоне, а также в На циональном раковом институте в Бетезде (Мериленд) были отмечены многочисленные случаи иммунодефи цита, не связанные с SIV. Смертность животных составляла от 35 до 60 %. От больных обезьян были выделены ретровирусы с морфологией D. Уста новлено, что заражение обезьян про исходило путем как вертикальной, так и горизонтальной передачи. Эффек тивность заражения SRV обычно об ратно пропорциональна силе иммуно логического ответа на инфекцию, а своевременная вакцинация обезьян успешно защищает их от инфекции.
5.8.1. Морфогенез SRV
Кратко остановимся на морфоге незе SRV. Напомним, что у SRV, так же как у ретровирусов типа В и виру сов фоами, капсид собирается в цито
плазме. Этот капсид (называемый не зрелым ядром) в разрезе представляет собой тороидальную структуру разме ром около 50—70 нм (частицы типа А), состоящую из 2000—3000 молекул белка-предшественника Pr7880g и димера геномной (+) Р Н К . Капсиды транспортируются к плазматической мембране, где в процессе почкования "окутываются" env-кодируемыми бел ками оболочки — трансмембранным gp20 (ТМ) и поверхностным gp70 (SU), представленными на плазмати ческой мембране. Протеолитическое расщепление env-кодируемых белковпредшественников происходит в ци топлазме клеток при участии клеточ ных протеиназ. Внеклеточные незре лые вирионы имеют овальную форму и диаметр 100—120 нм. Вирионы по крыты двухконтурной оболочкой тол щиной 7—8 нм. В центре вириона расположен нуклеоид диаметром око ло 70 нм.
Процесс созревания вирионов со стоит в протеолитическом расщепле нии gag-кодируемых белков-предше ственников вирусной протеиназой, что приводит в конечном итоге к из менению морфологии ядра. Зрелые внеклеточные вирионы SRV отлича ются достаточно выраженным поли морфизмом. Диаметр вирионов ко-
Рис. 5.1. Вирусные частицы типа D из клеток НЕр-2 (Hep-2V). Ув. 225 000.
335
леблется от 90 до 130 нм. Нуклеоид внутри вириона, как правило, локали зуется эксцентрично. Зрелые нуклеоиды чаще эллипсоидной, реже сфери ческой формы. Диаметр эллипсоид ных нуклеоидов 70—120 нм, сфериче ских — около 70 нм. Вирионы покры ты двухконтурной оболочкой толщи ной 7—8 нм, на которой расположены отростки (spicks) длиной около 6— 8 нм (рис. 5.1).
5.8.2. Геном SRV
SRV серотипов-1, -2, -3 полностью просеквенированы, a SRV-4, -5 просеквенированы лишь частично. Геном известных SRV, кроме двух LTR, име ет четыре ("классические" для ретровирусов с простым геномом) откры тые рамки считывания, кодирующие внутренние структурные белки (ген gag), протеазу (ген prt или pro), Р Н К - зависимую ДНК-полимеразу (ген pol) и гликопротеины вирусной оболочки (ген env) (схема 5.15). Таким образом, SRV относятся к ретровирусам с про стым геномом ввиду того, что они не
имеют |
дополнительных генов |
или/и |
||||
транс-активаторов. |
В |
качестве |
прай- |
|||
мера |
для синтеза |
минус-цепи |
Д Н К |
|||
используется |
т Р Н К |
лизина. |
Полный |
|||
геном известных SRV не превышает 9 |
||||||
т. п.н. |
В |
механизме |
образования |
|||
структурных |
белков |
гена gag |
были об- |
С х е м а 5.15. Структура генома ретрови-
руса типа D (SRV) (по Luciw Р. Α., Le ung N. J., 1992)
наружены особенности, отличающие SRV от ретровирусов типов В и С. Показано, что в результате первого этапа нарезания белка-предшествен ника гена gag Рг78 образуются два фрагмента — Рг37 и РгЗЗ. На втором этапе нарезаются эти фрагменты, в результате чего образуются следую щие белки: р10, рр18, р12, р14, р27 (СА) и р4. Для SMRV СА белком яв ляется р36. Ген env кодирует глико протеины оболочки вириона gp70 (SU) и gp22-20 (ТМ).
Сравнительный анализ экзогенных SRV показал, что по аминокислотно
му составу SRV-1 |
ближе к M P M V |
(SRV-3), чем SRV-2. |
Гены gag, prt, pol |
и З'-конец гена env SRV-1 и SRV-3 со ответственно различаются на 5—15 %. LTR SRV-1 и SRV-3 имеют 88 % го мологии. LTR SRV-2 в свою очередь гомологична SRV-1 и SRV-3 лишь на 70 %. Белки оболочки SRV-1 и SRV-2 различаются на 40 %. Таким образом, SRV-2 — наиболее "удаленный" вари ант из экзогенных SRV. Весьма выра жено антигенное сходство gp70 (SU) SRV с SU гликопротеинами эндоген ных ретровирусов типа С павианов (BaEV) и типа С кошек (RD-114). Вы явлена значительная гомология генов gag и pol SRV-3 и ΜMTV . Все это ука зывает на вероятное происхождение SRV путем рекомбинации между ретровирусами типов В и С.
Следует остановиться на особенно стях регуляторных механизмов. У SRV существует специальная система, вы полняющая регуляторную функцию. У SRV-3 на З'-концевом участке генома между геном env и З'-LTR (частично перекрывая эту область) нуклеотиды 8022 и 8240 имеется особая область, называемая constitutive transport ele ment (СТЕ). Регуляторные свойства СТЕ у SRV были обнаружены при изучении регуляции экспрессии гено ма вируса HIV. Транспорт несплайсированных или частично сплайсированных Р Н К HIV из ядра в цитоплаз му осуществляет белок Rev. Для того чтобы это произошло, Rev-белку не обходимо связаться с регуляторным
336
участком HIV, называемым Rev-re |
кислотному фрагменту 147—162 SRV-1 |
|||||||||||||||||||||
sponsive element (RRE). Так система |
предотвращают присоединение вируса |
|||||||||||||||||||||
Rev-RRE HIV осуществляет транспорт |
к рецептору. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
РНК этого вируса. Далее было выяс |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
нено, |
что замена |
RRE в геноме HIV |
|
5.8.4. |
Особенности |
|
|
|
|
|
||||||||||||
на СТЕ |
SRV-3 не |
влияет |
на |
эффек |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
заболевания |
обезьян, |
|
|
|
|
||||||||||||||||
тивность транспорта Р Н К HIV и взаи |
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||
|
вызванного |
ретровирусами |
||||||||||||||||||||
модействие с клеточными факторами. |
|
|||||||||||||||||||||
|
группы |
SRV |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
Таким образом, |
создается уникальная |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
ситуация: участок |
генома ретровируса |
|
Ретровирусы |
|
группы SRV |
вызыва |
||||||||||||||||
одного рода, будучи введен в геном |
ют синдром иммунодефицита у обезь |
|||||||||||||||||||||
вируса другого рода, оказывается спо |
ян, который характеризуется лимфа- |
|||||||||||||||||||||
собным |
выполнять |
регуляторную |
денопатией и спленомегалией. У жи |
|||||||||||||||||||
функцию этого другого вируса. Следу |
вотных наблюдаются лихорадка, |
исху |
||||||||||||||||||||
ет отметить, что никакой структурной |
дание, диарея, лимфопения, грануло- |
|||||||||||||||||||||
гомологии между СТЕ SRV-3 и RRE |
цитопения и тромбоцитопения. На |
|||||||||||||||||||||
H1V-1 и HIV-2 нет. Отсутствует она |
фоне истощения клеточных элементов |
|||||||||||||||||||||
также и между СТЕ вируса SRV-3 и |
периферической |
крови |
развиваются |
|||||||||||||||||||
впоследствии |
обнаруженной |
функ |
гипопротеинемия, |
гипоальбуминемия |
||||||||||||||||||
циональной системой HTLV-1 и НТ- |
и |
гипогаммаглобулинемия. При |
этом |
|||||||||||||||||||
LV-2, в которых СТЕ SRV-3 также |
к |
заболеванию, |
вызванному |
SRV, |
||||||||||||||||||
способен |
выполнять |
регуляторную |
присоединяются |
другие заболевания, |
||||||||||||||||||
функцию. Аналогичный СТЕ SRV-3 |
вызываемые |
различными |
бактериями |
|||||||||||||||||||
регуляторный |
элемент был |
обнаружен |
и вирусами, что на фоне истощения |
|||||||||||||||||||
также у других SRV. |
|
|
|
иммунологической |
системы |
создает |
||||||||||||||||
Таким образом, у SRV существует |
весьма пеструю картину течения забо |
|||||||||||||||||||||
регуляторная |
система, |
аналогичная |
левания. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
той, которая имеется у других нерод |
|
При SRV-ассоциированном имму |
||||||||||||||||||||
ственных |
ретровирусов |
со |
сложным |
нодефиците обезьян количество Т- |
||||||||||||||||||
геномом (HIV и HTLV). |
|
|
|
хелперов и Т-супрессоров уменьшает |
||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ся |
абсолютно, |
сохраняя первоначаль |
|||||||||||
5.8.3. Рецепторы |
|
|
|
ное соотношение между собой. Этим |
||||||||||||||||||
и |
нейтрализационные |
|
иммунодефицит |
обезьян, |
вызванный |
|||||||||||||||||
|
SRV, отличается |
от |
AIDS |
человека |
и |
|||||||||||||||||
эпитопы SRV |
|
|
|
|||||||||||||||||||
|
|
|
SAIDS обезьян, при которых харак |
|||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
Все |
пять |
серологических |
типов |
терно нарушение первоначального со |
||||||||||||||||||
SRV используют |
общий |
поверхност |
отношения Т-хелперов и Т-супрессо |
|||||||||||||||||||
ный рецептор. Этот же рецептор ис |
ров. Вирусы SRV в отличие от |
HIV и |
||||||||||||||||||||
пользуют |
вирус |
беличьей |
обезьяны |
SIV обладают более широким имму- |
||||||||||||||||||
(SMRV), вирус очкового лангура (Ро- |
носупрессивным действием как на Т-, |
|||||||||||||||||||||
I-Lu), |
эндогенные ретровирусы типа |
так и на В-лимфоциты, что проявля |
||||||||||||||||||||
С кошек (RD-114) и павианов (BaEV), |
ется in vivo и in vitro. Характерной осо |
|||||||||||||||||||||
а также |
вирус |
ретикулоэндотелиоза |
бенностью иммунодефицита, |
вызван |
||||||||||||||||||
птиц. Ген рецептора локализован на |
ного SRV-2, является развитие на фо |
|||||||||||||||||||||
хромосоме 19ql3, 1-13.2, |
а сам рецеп |
не иммунодефицита еще и ретропери- |
||||||||||||||||||||
тор представляет собой белок с мол. |
тонеального |
фиброматоза. |
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
массой 58 кДа. Были идентифициро |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
ваны |
нейтрализационные |
эпитопы |
|
5.8.5. |
Экспериментальная |
|
|
|||||||||||||||
gp70 (SU) SRV-1, которые представле |
|
|
|
|||||||||||||||||||
|
передача |
заболевания |
|
|
|
|
||||||||||||||||
ны |
аминокислотными |
|
остатками |
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
147-167 |
и gp70 |
(SU), |
а у SRV-2 - |
|
После |
выделения от больных |
им |
|||||||||||||||
аминокислотными |
остатками |
93—106 |
|
|||||||||||||||||||
мунодефицитом |
обезьян |
SRV-1 |
и |
|||||||||||||||||||
соответственно. |
Антитела |
к |
амино |
|||||||||||||||||||
SRV-2 |
была |
|
продемонстрирована |
|||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
22-7908 Д. Г. Заридзе |
337 |
возможность передачи иммунодефи цита введением крови или тканевого гомогената от больной обезьяны здо ровой.
Все обезьяны после введения вируссодержащего материала оказались инфицированы. Часть из них погибла от острой инфекции. У погибших жи вотных не были обнаружены антитела к SRV. У животных, погибших от вя лотекущей инфекции, обнаруживали антитела к главному внутреннему бел ку вирусов группы SRV — р27 (СА), обычно в невысоком титре. У осталь ных синтезировались антитела не только к р27 (СА), но и к другим ви русным белкам, в том числе к gp70 (SU). Такие животные обычно выздо равливали.
Продемонстрировать роль MPMV (SRV-3) в развитии иммунодефицита удалось прямым способом. Из храня щихся в жидком азоте образцов опу холи молочной железы обезьяны, из которой был впервые выделен SRV-3, был повторно изолирован вирус. При его введении обезьянам у них развил ся иммунодефицит.
SRV-1, составляет 0,1—1 %. Вирусы группы SRV хорошо культивируются в стабильных клеточных линиях Т-лим- фоцитов человека (Jurkat, HUT-78) и в EBV-трансформированных В-лим- фоцитах человека (Raji). SRV хорошо размножаются также в фибробластах человека, EBV-трансформированных клетках макаки резуса, фибробластах обезьяны, эпителиальных клетках обезьяны, в клетках почек кролика, в стабильных клеточных линиях остеосаркомы человека (НОС) и рабдомиосаркомы (RD).
SRV не обладают выраженным цитолитическим и трансформирующим действием на клетки.
5.8.7. Эпидемиология иммунодефицита обезьян
Как отмечалось выше, SRV явля ются этиологическим фактором имму нодефицита обезьян. Этому заболева нию подвержены по крайней мере 8 видов азиатских обезьян, содержа щихся в центрах приматов США.
Долгое время и без достаточных
Вцелом исследования обезьян с оснований считалось, что SRV не рас
SRV-индуцированным иммунодефи цитом убедительно продемонстриро вали корреляцию между уровнем син теза антител к вирусным белкам и ус тойчивостью организма животного к заболеванию.
5.8.6. Распространение вируса в организме обезьян
У SRV-инфицированных животных наблюдается уменьшение лимфоцитов
пространены среди африканских обезьян. В начале 90-х годов антитела к белкам SRV были обнаружены у аф риканских приматов. В частности, ме тодом иммуноблоттинга были обнару жены антитела к SRV у телапонов
(Miopithecus sp.) и у павианов (Papio sp.). Позднее было показано, что аф риканские зеленые мартышки, оби тающие в Кении и Танзании, имеют нуклеотидные последовательности и антитела к белкам SRV. Таким обра
иплазматических клеток. Вирусные зом, доказано, что у африканских
частицы обнаруживаются в клетках лимфатических узлов, в мононуклеарных клетках периферической крови, плазме, сыворотке, моче, цереброспи нальной жидкости, вагинальных сек ретах животных с клиническими про явлениями заболевания и у вирусоносителей. Вирионы обнаруживаются в В- и Т-лимфоцитах, но не выявляют ся в нейтрофилах и тромбоцитах. Ко личество лимфоцитов, содержащих
обезьян могут встречаться SRV. В свя зи с этим нельзя исключить возмож ность контаминации отдельных пар тий препаратов полиовакцины SRV, поскольку клетки почки зеленых мар тышек широко использовались и ис пользуются для приготовления полиомиелитной вакцины.
Распространение SRV-2 в органах зараженных обезьян зависит от путей заражения и тяжести заболевания.
338
При хронической виремии и верти |
перевиваемые |
клеточные |
линии, |
не |
|||||||||||||||||||||||
кальном пути заражения от матери в |
имеющие маркеров клеток HeLa, в |
||||||||||||||||||||||||||
пренатальном, перинатальном и пост- |
которых тем не менее были обнаруже |
||||||||||||||||||||||||||
натальном |
периодах |
провирусные |
по |
ны |
SRV. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
следовательности |
обнаруживаются |
в |
Множественные |
инсерции |
прови- |
||||||||||||||||||||||
организме |
|
повсеместно. |
У |
|
обезьян, |
русных последовательностей |
SRV |
бы |
|||||||||||||||||||
которые имели хроническую виремию |
ли обнаружены в клетках стабильной |
||||||||||||||||||||||||||
и заражались |
горизонтальным |
путем, |
клеточной |
линии |
лимфомы |
Беркитта |
|||||||||||||||||||||
SRV-2-провирус обнаруживался в се |
Namalva. С |
помощью секвенирования |
|||||||||||||||||||||||||
лезенке, костном мозге и в илеоце- |
было показано, что провирус из этих |
||||||||||||||||||||||||||
кальном отделе тонкого кишечника. |
клеток близок к SMRV, а точнее — к |
||||||||||||||||||||||||||
Это можно объяснить тем, что у этих |
ранее |
обнаруженному в |
перевиваемых |
||||||||||||||||||||||||
обезьян, |
заражение |
которых происхо |
клетках человека варианту SMRV, на |
||||||||||||||||||||||||
дило в раннем возрасте, иммунная |
званному SMRV-H. Это наблюдение |
||||||||||||||||||||||||||
система лишь |
частично ограничивала |
представляет большой |
практический |
||||||||||||||||||||||||
распространение |
вируса. |
При |
|
этом |
интерес, так как клетки Namalva ши |
||||||||||||||||||||||
развивался |
иммунодефицит |
средней |
роко используются несколькими фар |
||||||||||||||||||||||||
тяжести. У вируснегативных клиниче |
мацевтическими компаниями для |
по |
|||||||||||||||||||||||||
ски здоровых обезьян, имеющих ан |
лучения |
интерферона. |
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||
титела к |
SRV-2, |
в |
некоторых |
случаях |
Подводя |
итог данному разделу, |
хо |
||||||||||||||||||||
обнаруживались |
последовательности |
||||||||||||||||||||||||||
телось |
бы |
отметить |
то, |
|
что наличие |
||||||||||||||||||||||
вируса в |
|
костном мозге |
и |
в |
илеоце- |
|
|||||||||||||||||||||
|
SRV-последовательностей |
|
в |
|
переви |
||||||||||||||||||||||
кальном |
отделе |
тонкого |
кишечника, |
|
|
||||||||||||||||||||||
ваемых |
культурах |
человека, |
вероятно, |
||||||||||||||||||||||||
что, |
возможно, |
объясняется |
тем, |
что |
|||||||||||||||||||||||
не |
во |
всех |
случаях |
является |
результа |
||||||||||||||||||||||
эти |
участки |
тела являлись |
мишенью |
||||||||||||||||||||||||
том |
банальной |
лабораторной |
конта |
||||||||||||||||||||||||
SRV-2. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
минации клеток человека SRV. В |
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
Характер |
распространения |
|
SRV |
у |
пользу этого говорят два обстоятель |
||||||||||||||||||||||
животных зависит от пути заражения. |
ства: |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
При |
вертикальном |
пути |
заражения |
• |
разнообразие |
SRV, |
выделенных |
||||||||||||||||||||
последовательности |
провируса |
лока |
|||||||||||||||||||||||||
|
|
из различных перевиваемых кле |
|||||||||||||||||||||||||
лизованы |
|
во |
многих тканях. При го |
|
|
||||||||||||||||||||||
|
|
|
ток, не имеющих маркеров кле |
||||||||||||||||||||||||
ризонтальном |
пути |
распространение |
|
|
|||||||||||||||||||||||
|
|
ток HeLa; |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||
вируса ограничено костным |
мозгом и |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||
• |
выделение вариантов |
вирусов из |
|||||||||||||||||||||||||
илеоцекальным |
отделом |
тонкого |
ки |
||||||||||||||||||||||||
|
|
нескольких |
перевиваемых |
кле |
|||||||||||||||||||||||
шечника. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ток человека, которые мало раз |
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
5.8.8. SRV, |
выделенные |
|
|
|
|
|
личаются |
|
|
между |
|
собой |
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
(SMRV-H), но существенно от |
||||||||||||||||||||||
из стабильных клеточных |
|
|
|
личаются |
от обезьяньего |
прото |
|||||||||||||||||||||
линий |
человека |
|
|
|
|
|
|
|
|
типа |
(SMRV). |
|
|
|
|
|
|
||||||||||
Вскоре после выделения SRV-3 |
В связи с этим складывается общее |
||||||||||||||||||||||||||
(MPMV) |
морфологически схожие |
ви |
впечатление, что в человеческой по |
||||||||||||||||||||||||
русы были обнаружены в стабильных |
пуляции |
может |
циркулировать |
не |
|||||||||||||||||||||||
клеточных |
|
линиях |
человека. |
После |
один, а, вероятно, несколько вариан |
||||||||||||||||||||||
выделения ретровируса типа D из пе |
тов |
SRV. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||
ревиваемой |
клеточной |
линии |
|
рака |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
гортани |
человека НЕр-2 |
(HEp-2V) |
в |
5.8.9. |
Распространение |
SRV |
|||||||||||||||||||||
1972 |
г. были |
выделены вирус |
из |
кле |
|||||||||||||||||||||||
среди |
людей |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||
ток PMF, вирус, получивший наиме |
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
нование PMFV, и ряд других. Позже |
Со времени обнаружения в карци |
||||||||||||||||||||||||||
было установлено, что часть клеточ |
номе молочной железы макаки резус |
||||||||||||||||||||||||||
ных |
линий |
|
была |
контаминирована |
первого ретровируса типа D (MPMV) |
||||||||||||||||||||||
клетками |
|
HeLa, |
однако |
существуют |
неоднократно |
предпринимались |
по- |
||||||||||||||||||||
22* |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
339 |
пытки выявить ассоциацию SRV с па |
данные, |
свидетельствующие о |
том, |
||||||||||||||||
тологией |
человека. |
|
|
|
|
|
|
что у здоровых сельских жителей |
Гви |
||||||||||
В результате первых |
иммунологи |
неи (соседнего района Западной Аф |
|||||||||||||||||
ческих |
исследований, |
проведенных |
в |
рики), помимо антител к белкам SRV, |
|||||||||||||||
1977 г. в США, серологические марке |
в Д Н К имеются нуклеотидные после |
||||||||||||||||||
ры SRV у взрослых больных различ |
довательности, родственные SRV-3. |
||||||||||||||||||
ными |
опухолевыми |
заболеваниями |
Секвенирование продуктов |
П Ц Р |
по |
||||||||||||||
обнаружены не были. В 1989 г. появи |
казало гомологию |
выявленных |
фраг |
||||||||||||||||
лось сообщение об обнаружении ме |
ментов с SRV-3. Был сделан вывод о |
||||||||||||||||||
тодом |
иммуноблоттинга |
антител |
к |
возможности |
межвидовой |
|
горизон |
||||||||||||
структурным и неструктурным gag-ко |
тальной передачи экзогенного SRV- |
||||||||||||||||||
дируемым |
белкам |
ретровирусов |
типа |
подобного вируса от обезьян к челове |
|||||||||||||||
D у детей, больных лимфаденопатия- |
ку. Важность этой работы состоит в |
||||||||||||||||||
ми, и у больных С П И Д о м из Конго. В |
том, что был впервые определен реги |
||||||||||||||||||
1991 г. в Онкологическом центре Те |
он земного шара, жители которого |
||||||||||||||||||
хасского университета R. С. Bohannon |
могут быть вирусоносителями. |
|
|
||||||||||||||||
была выполнена работа по выделению |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
SRV от |
больного с |
В-клеточной |
лим- |
5.8.10. Ретровирусы типа |
D |
||||||||||||||
фомой типа Беркитта и СПИДом . От |
|||||||||||||||||||
овец и коз |
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
пациента были получены две клеточ |
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
ные линии из лимфомных тканей ко |
В начале 80-х годов появились со |
||||||||||||||||||
стного мозга и почек. В клетках обеих |
общения о новом экзогенном ретро- |
||||||||||||||||||
культур были обнаружены ретрови- |
вирусе, выделенном в Южной Африке |
||||||||||||||||||
русные частицы с морфологией типа |
из клеток легкого овец с контагиоз |
||||||||||||||||||
D. Секвенирование провируса показа |
ным аденоматозом легкого. Вирус по |
||||||||||||||||||
ло его высокую гомологию с SRV-3. В |
лучил название Jaagsiekte sheep retrovi |
||||||||||||||||||
сыворотке больного содержалenvись ан |
rus (JSRV). Иммунологический анализ |
||||||||||||||||||
титела |
к |
gag- и |
-кодируемым |
бел |
показал, |
что |
этот |
вирус |
родствен |
||||||||||
кам SRV-3. Эта работа убедительно |
SRV-3. Позднее ретровирус, похожий |
||||||||||||||||||
показала |
инфицированность человека |
на JSRV, был обнаружен у овец и коз |
|||||||||||||||||
SRV, однако роль этого вируса в раз |
и назван ENTV (enzootic nasal tumor |
||||||||||||||||||
витии В-клеточной лимфомы или |
virus). Гомология между нуклеотидны- |
||||||||||||||||||
СПИДа не была доказана. В 1993 г. |
ми |
последовательностями |
|
JSRV |
и |
||||||||||||||
был предпринят поиск антител к SRV |
ENTV составляет в целом около 89 %. |
||||||||||||||||||
методом |
иммуноферментного анали |
Среди |
SRV |
эти |
вирусы |
занимают |
|||||||||||||
за в большой группе пациентов с раз |
|||||||||||||||||||
особое место. Это связано прежде все |
|||||||||||||||||||
личными |
лимфопролиферативными |
||||||||||||||||||
го с тем, |
что JSRV и |
ENTV — ретро- |
|||||||||||||||||
заболеваниями. Установлено, что SRV |
|||||||||||||||||||
вирусы, способные вызывать злокаче |
|||||||||||||||||||
не ассоциируются с исследуемыми за |
|||||||||||||||||||
ственные |
опухоли |
дыхательных |
путей |
||||||||||||||||
болеваниями, а заражение людей SRV |
|||||||||||||||||||
у зараженных |
животных. Молекуляр- |
||||||||||||||||||
является редким событием. |
|
|
|
||||||||||||||||
|
|
|
но-биологические исследования этих |
||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
Вероятность распространения |
SRV |
вирусов продвигались крайне медлен |
|||||||||||||||||
среди африканцев |
показана |
работами |
но из-за того, что в геноме овец и коз |
||||||||||||||||
Morozov и соавт., которые в 1991 г. |
было обнаружено около 20 эндоген |
||||||||||||||||||
обнаружили антитела к gag-кодируе |
ных провирусов, практически не от |
||||||||||||||||||
мым белкам SRV у 49 % здоровых ко |
личимых |
от |
экзогенных |
|
вариантов. |
||||||||||||||
ренных |
жителей |
Западной |
Африки |
Эти |
провирусы постоянно |
"мешали" |
|||||||||||||
(Гвинея-Бисау). Часть исследованных |
исследователям |
при |
проведении |
||||||||||||||||
сывороток содержала антитела к р27 |
ПЦР-анализа образцов тканей живот |
||||||||||||||||||
(СА) SRV-3. Были обнаружены сыво |
ных. Все же короткие специфические |
||||||||||||||||||
ротки, |
которые, |
кроме |
р27 |
(СА) |
для |
экзогенного |
вируса |
|
последова |
||||||||||
SRV-3, реагировали и с р36 (СА) |
тельности были выявлены в областях |
||||||||||||||||||
SMRV. В |
1996 г. были опубликованы |
U3 LTR и ТМ . |
|
|
|
|
|
|
340
JSRV и ENTV были полностью просеквенированы, и оказалось, что они относятся к ретровирусам с про стым геномом и не имеют ни онкоге нов, ни транс-активаторов. Гомоло гия между геномами JSRV и ENTV со ставляет около 89 %.
У зараженных животных JSRV ло кализуется преимущественно в альве олярном эпителии легкого (клетки II типа) и бронхиолярных клетках, но практически отсутствует в лимфоци тах периферической крови, что ос ложняет проведение традиционной диагностики. Присутствие вируса в крови в незначительном количестве наблюдают лишь в преклинической стадии развития заболевания. Клеточ ным рецептором для JSRV является гиалуронидаза 2.
В настоящее время известно два варианта JSRV — Южно-Африкан ский и Северо-Американский (или Шотландский). Гомология между пер вым и вторым вариантом не превыша ет 93 %.
Культивирование in vitro опухоле вых клеток животных, зараженных ви русом, представляет необычайно сложную задачу, поэтому для зараже ния клеточных культур обычно ис пользуют инфекционный клон вируса.
Получены прямые доказательства участия JSRV в канцерогенезе. В част ности, у животных, которым вводили бесклеточный фильтрат опухоли лег кого в трахею, возникали опухоли. Образование характерных опухолей отмечено и у новорожденных ягнят при введении инфекционного клона вируса. Клетки мышей линии N I H 3ТЗ также легко трансформируются вирусом. Долгое время не было по нятно, каким образом реализуется онкогенный потенциал JSRV. Одно вре мя считали, что дополнительная от крытая рамка считывания (orf χ), рас положенная в области гена pol, может представлять собой онкоген вируса, но подтверждений этому не нашли. Попутно отметим, что роль orf χ до сих пор не ясна.
Есть основания считать, что "онко
геном" является ТМ-область гена env, содержащая мотив Y-X-X-M. У эндо генных вариантов вируса такой мотив отсутствует.
Несомненный интерес представля ют поиски JSRV-подобных вирусов у людей с опухолями дыхательных пу тей, в частности с опухолями легкого. В единственной пока работе на эту те му [De las Heras et al., 2000] сообща лось об обнаружении методом иммунофлюоресценции в образцах опухо лей легкого отдельных больных анти гена, иммунологически родственного СА белку JSRV, однако других иссле дований, в частности молекулярнобиологических, эти авторы не прово дили.
* * * |
· |
-~ |
Поиск возможной ассоциации SRV с онкологическими заболеваниями че ловека начался сразу после выделения первого SRV (SRV-3) из карциномы молочной железы обезьяны, однако вызвать рак молочной железы у обезь ян введением SRV-3 не удалось. В оп ределенной степени исследования по поиску ассоциации SRV с онкологи ческими заболеваниями опережали поиск SRV в человеческой популяции как таковой.
При исследовании SRV неизбежно сталкиваешься с двумя проблемами: четко продемонстрировать SRV-цир- куляцию у людей и как следствие по казать возможное участие вирусов в каком-либо патологическом процессе.
Поиски маркеров SRV в разнооб разных опухолях человека, проведен ные в 70—80-е годы, в целом были безрезультатными, однако в течение последних 10 лет несколько раз сооб щалось о реактивности сывороток больных и отдельных групп доноров с белками SRV, что, вероятно, связано с общим ростом уровня исследований и повышенной чувствительностью ис пользуемых методов. Более того, у не которых здоровых африканцев и лю дей, ухаживающих за обезьянами, ме тодом П Ц Р были обнаружены нуклео-
341