2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Mikrobiologia

3.2.II тип гиперчувствительности – цитотоксический (цитолитический):

–эндогенные антигены или экзогенные хим-в-ва, лекарственные препараты (гаптены), прикрепленные к мембранам клеток, могут вызвать образование антител против них и привести ко II типу гиперчувствительности;

–антигены, расположенные на клетках, «узнаются» антителами классов IgG, IgM. При взаимодействии типа клетка– антиген–антитело происходит активация комплемента и разрушение клетки по 3-ем направлениям: комплемент-за- висимый цитолиз, фагоцитоз и антителозависимая клеточная цитотоксичность;

3.2.1.Комплемент-зависимый цитолиз (цитолиз, опосредованный комплементом):

–антитела взаимодействуют с антигенами различных в-в, лекарств на поверхности клеток-мишеней. Затем к Fc-фраг- менту антител присоединяется комплемент (С), активирующийся по классическому пути с образованием анафилатоксинов (C5a- и C3a-компонентов) и мембраноатакующего комплекса, состоящего из компонентов С5–9;

–мембраноатакующие комплексы комплемента вызывают комплементзависимый цитолиз клетки;

3.2.2.Фагоцитоз:

–фагоциты могут поглощать и/или разрушать опсонизированные антителами и комплементом (C3b) клетки-мишени, содержащие антиген;

3.2.3.Антителозависимая клеточная цитотоксичность:

–лизис NK-клетками клеток-мишеней. NK-клетки присоединяются к Fc-фрагментам иммуноглобулинов, которые связались с антигенами клеток-мишеней. Уничтожение клетки-мишени происходит с помощью перфоринов и гранзимов NK-клеток;

3.2.4.Клинические проявления:

–по II типу гиперчувствительности развиваются некоторые аутоиммунные болезни, обусловленные появлением аутоантител к антигенам собственных тканей: злокачественная миастения, аутоиммунная гемолитическая анемия, вульгарная пузырчатка, синдром Гудпасчера, аутоиммунный гипертиреоидизм;

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- ---------------

3.3.III тип гиперчувствительности – иммунокомплексный:

–основан на образовании растворимых иммунных комплексов (антиген–антитело + комплемент) с участием IgG, реже – IgM. Первичными компонентами III типа гиперчувствительности являются растворимые иммунные комплексы антиген–антитело и комплемент (анафилатоксины C5a, C4a, C3a). При избытке антигенов или недостатке комплемента иммунные комплексы откладываются на структурах, имеющих Fc-рецепторы. Повреждения вызваны тромбоцитами, нейтрофилами, иммунными комплексами, комплементом. Привлекаются провоспалительные цитокины, включая ФНО-D и хемокины. В поздних стадиях в процесс вовлекаются макрофаги;

3.3.1.Клинические проявления:

–реакция может быть общей (например, сывороточная болезнь) или вовлекать отдельные органы, ткани, включая кожу (системная красная волчанка, реакция Артюса), почки (волчаночный нефрит) или другие органы;

–реакция может быть обусловлена многими микробами;

–развивается через 3-10 ч после экспозиции антигена, как в реакции Артюса;

–антиген может быть экзогенный (хронические бактериальные, вирусные, грибковые или протозойные инфекции) или эндогенный, как при системной красной волчанке;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

3.4.IV тип – гиперчувствительность замедленного типа:

–обусловлена макрофагами и TH1-лимфоцитами, отвечающими за стимуляцию клеточного иммунитета;

–развивается главным образом через 1-3 сут после повторного воздействия аллергена: происходит уплотнение и воспаление ткани в результате ее инфильтрации T-лимфоцитами и макрофагами. В фазу сенсибилизации поступивший антиген, связавшийся с белками организма, процессируется и презентируется дендритной клеткой T-хелперу (TH0), который формирует клон воспалительных TH1;

–при повторном поступлении антигена (эффекторная фаза) происходит повторная его презентация TH1, который, активируясь, продуцирует хемокины и IFN-γ, соответственно привлекающие и активирующие макрофаги;

3.4.1.Клинические проявления:

–при ГЗТ повреждение ткани происходит в результате действия продуктов активированных макрофагов, таких как гидролитические ферменты, реактивные промежуточные продукты кислорода, оксид азота и провоспалительные цитокины;

–эндотелиальные клетки сосудов в условиях повреждения экспрессируют поверхностные белки в виде молекул адгезии и MHC II. При хронической ГЗТ часто образуется фиброз как результат секреции цитокинов и факторов роста макрофагов;

–многие органоспецифические аутоиммунные болезни являются результатом ГЗТ, индуцированной аутореактивными T-лимфоцитами;

А)Болезни и проявления:

Например, при инсулинзависимом сахарном диабете инфильтраты лимфоцитов и макрофагов найдены вокруг островков Лангерганса поджелудочной железы; происходит разрушение инсулинпродуцирующих β-клеток, что обуславливает дефицит инсулина; Лекарства, косметические препараты, низкомолекулярные в-ва (гаптены) могут соединяться с белками тканей, обра-

зуя комплексный антиген с развитием контактной ГЗТ; Инфекционные болезни (бруцеллез, туляремия, туберкулез, токсоплазмоз и др.) сопровождаются развитием ГЗТ, по-

этому при диагностике используют кожно-аллергические пробы с аллергенами возбудителей: туберкулинами, лепромином, бруцеллином, тулярином, токсоплазмином и др.;

103. Анафилактический шок и сывороточная болезнь. Причины возникновения. Механизм. Их предупреждение. Аллергоспецифическая иммунотерапия (АСИТ).

1.I тип гиперчувствительности – анафилактический:

–первичное поступление аллергена вызывает продукцию плазмоцитами IgE, IgG4; 1.1.Механизм:

–аллергены, поступившие в организм, встречаются с антигенпредставляющими дендритными клетками, мигрирующими в лимфатические узлы, и выставляющие переработанные антиген-пептиды на свою поверхность вместе с MHC II для взаимодействия с наивными T-хелперами (TH0), дифференцирующиеся в TH2;

–после взаимодействия B-лимфоцитов с TH2 происходит процесс антителообразования плазматическими клетками. Выработку IgE-антител стимулируют интерлейкины, выделяемые TH2 (IL-4,10,13), а угнетают – IFN-γ и IL-2, выделяемые TH1;

–синтезированные IgE прикрепляются Fc-фрагментом к Fc-рецепторам базофилов крови и тучных клеток слизистых оболочек. При повторном поступлении аллергена на тучных клетках и базофилах образуются комплексы IgE с аллергеном (перекрестная сшивка FcHRI антигеном), вызывающие проникновение Са2+ внутрь клеток и их дегрануляцию;

–из гранул базофилов и тучных клеток в ткани выбрасываются биологически активные медиаторы: вазоактивные амины (гистамин), протеогликаны (гепарин), липидные медиаторы (лейкотриены, простагландины и тромбоцитактивирующий фактор – PAF), ферменты (триптаза, химаза, карбоксипептидаза) и цитокины (IL-3,4,5,6,13, ГМ-КСФ, ФНО-D). Гистамин, лейкотриен D и простагландины способствуют активному сокращению гладких мышц;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

–базофилы имеют также Fc-рецепторы к IgG, которые, связав IgG в составе иммунных комплексов, секретируют тромбоцитактивирующий фактор, повышающий проницаемость сосудов. Тромбоциты выделяют медиаторы аллергии. Это поддерживает состояние хронической аллергии;

–хемотаксические факторы привлекают в очаг нейтрофилы, эозинофилы и макрофаги. Так, эозинофильные хемотаксические факторы (ECF), выделяемые тучными клетками, привлекают эозинофилы, выделяющие ферменты, катионные белки, лейкотриены – метаболиты клеток вызывают сокращение гладких мышц, ослабление сердечной деятельности, развитие коллапса, повышение сосудистой проницаемости, гиперсекрецию слизи, отек, зуд и т.д.;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

–в качестве специфической терапии при аллергической патологии следует выделить аллергенспецифическую иммунотерапию (АСИТ). При этом происходит введение постепенно увеличивающейся концентрации аллергенов пациенту, страдающему IgE-опосредованной аллергией, для устранения симптомов заболеваний, возникающих при контакте с этим причинно-значимым аллергеном;

2.Сывороточная болезнь:

–реакция, возникающая при разовом парентеральном введении больших доз сывороточных и других белковых препаратов;

–реакция возникает спустя 10-15 сут; 2.1.Механизм:

–связан с образованием антител против введенного чужеродного белка (антигена) и повреждающим действием на клетки комплексов антиген – антитело;

–проявляется отеком кожи и слизистых оболочек, повышением температуры тела, при-пуханием суставов, сыпью и зудом кожи; наблюдаются изменения в крови (увеличение СОЭ, лейкоцитоз и др.). Сроки проявления и тяжесть сывороточной болезни зависят от содержания циркулирующих антител и дозы препарата. Это объясняется тем, что ко 2-й неделе после введения белков сыворотки вырабатываются антитела к белкам сыворотки и образуется комплекс антиген – антитело; 2.2.Причины:

–происходит при введении высоких доз антигена, например лошадиной противостолбнячной сыворотки. Через 6-7 дней в крови появляются антитела против лошадиного белка, которые, взаимодействуя с данным антигеном, образуют иммунные комплексы, откладывающиеся в стенках кровеносных сосудов и тканях. Развиваются системные васкулиты, артриты (отложение комплексов в суставах), нефрит (отложение комплексов в почках);

104.Понятие о клинической иммунологии. Иммунный статус человека и факторы, влияющие на него. 1.Клиническая иммунология:

–это клиническая и лабораторная дисциплина, занимающаяся изучением вопросов диагностики и лечения больных с различными заболеваниями и патологическими состояниями, в основе которых лежат иммунологические механизмы, а также состояниями, в терапии и профилактике которых иммунопрепараты играют ведущую роль;

2.Иммунный статус:

–это структурное и функциональное состояние иммунной системы индивидуума, определяемое комплексом клинических и лабораторных иммунологических показателей;

–характеризует анатомо-функциональное состояние иммунной системы, т. е. ее способность к иммунному ответу на определенный антиген в данный момент времени;

–оказывают влияние следующие факторы:

климато-географические;

социальные;

экологические (физические, химические и биологические);

«медицинские» (влияние лекарственных веществ, оперативные вмешательства, стресс и т.д.);

3.Оценка иммунного статуса: основные показатели и методы их определения:

3.1.Оценка иммунного статуса:

–проводится в клинике при трансплантации органов и тканей, аутоиммунных заболеваниях, аллергиях, для выявления иммунологической недостаточности при различных инфекционных и соматических заболеваниях, для контроля эффективности лечения болезней, связанных с нарушениями иммунной системы. В зависимости от возможностей лаборатории оценка иммунного статуса чаше всего базируется на определении комплекса следующих показателей:

3.1.1.При общем клиническом обследовании:

–учитывают жалобы пациента, анамнез, клинические симптомы, результаты общего анализа крови (включая абсолютное число лимфоцитов), данные биохимического исследования;

3.1.2.Гуморальный иммунитет:

–определяют по уровню иммуноглобулинов классов G, M, A, D, Е в сыворотке крови, количеству специфических антител, катаболизму иммуноглобулинов, гиперчувствительности немедленного типа, показателю В-лимфоцитов в периферической крови, бласттрансформации В-лимфоцитов под действием В-клеточных митогенов и др. тестам;

3.1.3.Состояние клеточного иммунитета:

–оценивают по кол-ву Т-лимфоцитов, а также субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической крови, бласттрансформации Т-лимфоцитов под действием Т-клеточных митогенов, определению гормонов тимуса, уровню секретируемых цитокинов, а также постановкой кожных проб с аллергенами, контактной сенсибилизацией динитрохлорбензолом. Для постановки кожных аллергических проб используются антигены, к которым в норме должна быть сенсибилизация, например проба Манту с туберкулином. Способность организма к индукции первичного иммунного ответа может дать контактная сенсибилизация динитрохлорбензолом;

3.1.4.В качестве дополнительных тестов:

–для оценки иммунного статуса можно использовать такие тесты, как определение бактерицидности сыворотки крови, титрование СЗ-, С4-компонентов комплемента, определение содержания С-реактивного белка в сыворотке крови, определение ревматоидных факторов и других аутоантител; 3.2.Результат:

–оценка иммунного статуса проводится на основании постановки большого числа лабораторных тестов, позволяющих оценить состояние как гуморального и клеточного звеньев иммунной системы, так и факторов неспецифической резистентности;

–все тесты разделены на две группы: тесты 1-го и 2-го уровня. Тесты 1-го уровня могут быть выполнены в любой клинической иммунологической лаборатории первичного звена здравоохранения, они используются для первичного выявления лиц с явно выраженной иммунопатологией. Для более точного результата пользуются тестами 2 уровня;

105.Расстройства иммунной системы: первичные и вторичные иммунодефициты. 1.Первичные иммунодефициты:

–следствием является развитие тяжелых рецидивирующих форм инфекций, не поддающихся консервативному лечению (пневмонии, менингиты, отиты, сепсис и др.). Также на фоне первичных иммунодефицитов могут развиваться опухоли, аллерго- и аутопатология. При данных нарушениях чаще всего проводят длительную терапию антибиотиками последнего поколения, а также собирают информацию о схожих клинических проявлениях у близких родственников. В случае наличия одного или нескольких из вышеперечисленных признаков существует необходимость в подробном изучении иммунного статуса;

–представлены несколькими группами: 1.1.Первая группа:

–комбинированные иммунодефициты (например, тяжелая комбинированная иммунная недостаточность – ТКИН);

1.1.1.Св-ва заболевания:

–гены, кодирующие ТКИН, ассоциированы с Х-хромосомой. В большинстве случаев они представлены точечными мутациями в гене γ-цепи рецептора для IL-2,4,9 и других интерлейкинов на длинном плече Х-хромосомы;

–результатом подобных мутаций является иммуносупрессия (снижение количества CD4+, CD8+ T-лимфоцитов и иммуноглобулинов);

–первые проявления ТКИН начинаются в первые недели жизни в виде инфекций кожи и слизистых, пневмоний и др.;

1.1.2.Слабость:

–для лечения используют заместительную иммунотерапию иммуноглобулинами, применяют антибактериальную терапию, в крайних случаях проводят трансплантацию костного мозга. Однако это не всегда приводит к желаемому результату, пациенты страдают от септических состояний, которые могут привести к летальному исходу; 1.2.Вторая группа:

1.2.1.Св-ва заболевания:

–преимущественный дефицит антител. Данный вариант иммунодефицитов чаще всего связан с В-клеточным звеном и встречается довольно часто (относительно других первичных иммунодефицитов);

–нарушение антителообразования связано с дефектами дифференцировки или снижением/отсутствием ответа В- лимфоцитов на взаимодействие с Т-лимфоцитами;

–пример: Х-сцепленная агаммаглобулинемия, в основе которой лежит нарушение дифференцировки и созревания В-лимфоцитов (мутация находится в гене Bruton tyrosine kinase, кодирующем В-клеточную тирозинкиназу, участвующую во внутриклеточной передаче сигналов в В-лимфоцитах);

1.2.2.Диагностические критерии данной патологии:

–снижение содержания иммуноглобулинов в биологических жидкостях (IgG сильно снижен в сыворотке крови, при этом IgА и IgМ могут совсем отсутствовать), также может снижаться количество В-лимфоцитов, остальные показатели иммунного статуса могут оставаться в пределах нормальных значений. Терапия в данном случае в основном заместительная препаратами иммуноглобулинов; 1.3.К третьей группе:

–относят другие синдромы иммунодефицитов со специфическими клиническими проявлениями. К примеру, можно привести синдром гипериммуноглобулинемии Е (мутации в 4-й хромосоме), основной признак которого – резкое увеличенние IgE в сыворотке крови и эозинофилия, при этом наблюдаются рецидивирующие гнойные инфекции (вызваны кокками и Candida albicans) мягких тканей и внутренних органов, кожи и подкожной клетчатки;

–данная патология проявляется с первых недель жизни в виде экземы кожи с поражением лица, а также разгибательных поверхностей конечностей. Схожие нарушения наблюдаются при синдроме Джоба, где мутации локализуются в гене STAT3. Лечение данного заболевания – симптоматическое. Прогноз благоприятный;

1.4.К четвертой группе:

1.4.1.Св-ва заболевания:

–относят болезни иммунной дисрегуляции, например Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром, связанный с мутацией в гене, кодирующем синтез белка SAP (белка сывороточного амилоида P), на длинном плече Х-хромосомы (Xq25), что приводит к нарушению передачи активационного сигнала от В-лимфоцитов, инфицированных вирусом Эпштейн–Барр, на Т-лимфоциты и NK-клетки, результатом чего является поликлональная активация В-лимфоцитов и развитие лимфопролиферации;

–при этом наблюдается ↓ CD4+ и увеличение кол-ва ↑ CD8+ Т-лимфоцитов;

1.4.2.Клиническае проявление:

–к клиническим проявлениям можно отнести лимфаденопатию, лихорадку, ангину и др. Возможно развитие В-кле- точной лимфомы. Пациенты с данным синдромом погибают чаще от инфекционного мононуклеоза и аплазии костного мозга;

1.4.3.Лечение данной группы первичных иммунодефицитов:

–проводится глюкокортикостероидами, химиотерапевтическими препаратами и др.; 1.5.Пятая группа первичных иммунодефицитов:

1.5.1.Св-ва заболевания:

–включает врожденные дефекты фагоцитов (связанные с нарушением подвижности, хемотаксиса, киллинга и других процессов). Среди данной группы иммунодефицитов можно назвать хроническую гранулематозную болезнь, циклическую нейтропению (дефект гена ELA2 – neutrophil elastase, локус 19р.13.3) и врожденную Х-сцепленную нейтро-

пению (дефект гена WASP – Wiskott-Aldrich Syndrome Protein, локус Xq11.22);

1.5.2.Клиническае проявление:

–у людей с циклической нейтропенией может ↓ уровень нейтрофилов до нуля, в этом случае резко возрастает риск возникновения инфекционных осложнений. Течение заболевания благоприятное;

–при врожденной Х-сцепленной нейтропенией, кроме резкого снижения числа нейтрофилов, снижается созревание промиелоцитов. У больных наблюдаются инфекционные патологии, в большинстве бактериальной природы;

–при острой лейкемии возможен летальный исход;

1.5.3.Лечение:

–связано с антибактериальной терапией (пожизненной), в некоторых случаях используется генная терапия; 1.6.Шестая группа первичных иммунодефицитов:

–связана с другими дефектами врожденного иммунитета. Примером такого рода заболеваний может быть Х-сцеп- ленная ангидротическая эктодермальная дисплазия, причиной которой является мутация в гене ингибитора NF-NB

(ген iKKBG, Xq28);

–при точечных мутациях в генах, белковые продукты которых участвуют в реакциях врожденного иммунитета, обычно наблюдается патология инфекционной природы (фурункулы, паратонзиллиты и др.); 1.7.Седьмая группа:

–иммунодефициты, связанные с аутовоспалительными нарушениями;

–пример – гипер-IgD-синдром, связанный с мутацией в гене MVK и проявляемыйся гипериммуноглобулинемией D, лейкозом и лихорадкой; 1.8.Восьмая группа первичных иммунодефицитов:

–иммунодефициты, связанные с дефектами в генах белков системы комплемента. Так, мутация в гене, кодирующем C1q (1р36.3-р34.1), приводит к дефициту данного компонента, который клинически проявляется в виде СКВподобного синдрома. Схожую картину можно наблюдать при мутациях в гене, кодирующем С4. Если нарушения касаются С3или С9-компонентов системы комплемента, то страдать будет противобактериальная защита организма, а также гуморальное звено иммунитета, а клинические проявления будут выражаться в инфекциях различного характера. При данной патологии проводят лечение инфекционных осложнений, заместительную терапию, а в крайнем случае — транспантацию костного мозга

2.Приобретенные, или вторичные, иммунодефициты:

–состояние организма, при котором происходит функциональное нарушение механизмов иммунитета (без ген-де- фектов). В отличие от первичных иммунодефицитов (которые, по сути, пожизненные) вторичные иммунодефициты могут быть излечены (в случае избавления от повреждающего фактора) или скорректированы иммунотропными препаратами;

–выделяют 3 формы вторичных иммунодефицитов: спонтанную (отсутствие явной причины), индуцибельную (обязательно есть причина – хим-, физ-, био-воздействие) и приобретенную; 3.1.Различия между 1-ым и 2-ым иммунодефицитами:

–в случае вторичных иммунодефицитов нарушения различных звеньев иммунитета наступают значительно позже и на фоне ранее нормально функционировавшей иммунной системы;

–изменения при вторичных иммунодефицитах не носят генотипического характера, поддаются иммунотерапии, нарушения иммунного статуса временные и возможно полное излечение. Однако инфекционная сопутствующая патология может быть схожей (сепсис, пневмонии, фурункулы и др.);

3.Нормальные иммунодефициты:

–«иммунная адаптация ребенка», когда непосредственно после рождения иммунная система ребенка находится на стадии формирования;

–состояние беременности, при этом баланс в факторах иммунитета смещен в сторону активации механизмов врожденного иммунитета, в то время как адаптивный иммунитет может быть супрессирован (активация TReg и другие механизмы). Поэтому при первичном инфицировании организма беременной женщины происходит гиперактивация механизмов иммунитета (активация нейтрофилов, макрофагов, субпопуляций Т-лимфоцитов, выработка провоспа-

лительных цитокинов и др.), что приводит к преждевременным родам (при недостаточности механизмов – к внутриутробному инфицированию плода);

–после 30 лет у человека происходит полная инволюция тимуса, таким образом, в пожилом возрасте наступает иммунодефицитное состояние, связанное с Т-клеточным звеном;

–в «забарьерных» органах (антигены которых в силу анатомических обстоятельств не контактируют с клетками иммунной системы) также имеются механизмы ингибирования иммунной системы. «Забарьерные» органы (головной мозг, передняя камера глаза, роговица, стекловидное тело, фолликулы щитовидной железы и др.) отделены от основных иммунных механизмов гистогематическим барьером – комплексом физиологических механизмов, регулирующих обменные процессы между кровью и тканями (гематоэнцефалический барьер, гематоофтальмический барьер и др.). В результате повреждения этих барьеров иммунные факторы взаимодейстуют с антигенами «забарьерных» органов, что приводит к развитию иммунных механизмов (формируется иммунный ответ против собственных тканевых структур);

106.Иммунологические аспекты травмы и атеросклероза (факультативно)!!!!

107.Реакции иммунитета в оценке иммунного статуса!!!!

108. Методы исследования иммунного статуса и принципы его клинической интерпретации!!!!

109.Кожно-аллергические пробы и их диагностическое значение. 1.Для чего нужно:

–для определения гиперчувствительности (аллергии) к антигенам-аллергенам у людей проводят провокационные тесты. Суть их в том, что соответствующий аллерген вводят в организм перорально, ингаляционно, наносят на кожу при ее скарификации или вводят внутрикожно. Обычно, спустя 30 минут оценивают немедленные аллергические реакции (ПЧНТ), а через 24-48 час – замедленные (ПЧЗТ);

2.Проялвения:

–на пыльцевые, пищевые, лекарственные аллергены чаще наблюдаются немедленные кожные реакции в виде покраснения и припухлости. Замедленные реакции развиваются на бактериальные антигены. Пробу Манту ставят для выявления сенсибилизации к микобактериям туберкулеза (оценка вакцинации и инфицированности);

3.Примеры:

–туберкулин РРD вводят внутрикожно и при положительной реакции через 24-48 час в месте инъекции возникает воспалительная реакция. Она указывает на наличие сенсибилизации к этому антигену. Сильная реакция, или, наоборот, ее отсутствие (анергия) может быть при туберкулезе;

4.Применения:

–кожные пробы могут использоваться для выявления иммунодефицитов и оценки резистентности к конкретной инфекции;

–большинство людей встречались в течение жизни с антигенами распространенных условно-патогенных бактерий и в норме имеют к ним сенсибилизацию. При постановке внутрикожных проб с аллергенами стафилококка, стрептококка, кишечной палочки, протея, микобактерий туберкулеза (туберкулин) и другими, реакция должна быть положительной хотя бы на один из них. Отсутствие реакции может указывать на иммунодефицит;

110.Механизмы развития аутоиммунных реакций!!!!

§8.РЕАКЦИИ ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ИММУНОДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ. 111.Иммунодиагностика инфекционных болезней!!!!

112.Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение. 113.Реакция Кумбса. Механизм. Компоненты. Применение.(1.9.)

114.Реакция пассивной гемагглютинации. Компоненты. Применение.(1.3.) 115.Реакция коагглютинации. Механизм, компоненты. Применение.(1.4.)

116.Реакция торможения гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.(1.5.) 1.Реакция агглютинации:

–реакция, при которой происходит связывание антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов, различных частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов);

–протекает при наличии электролитов, например при добавлении изотонического р-ра NaCl, и проявляется образованием хлопьев или осадка (клетки и частицы, «склеенные» антителами);

–применяются различные варианты PA: развернутая, ориентировочная, непрямая и др. Их используют для определения противомикробных антител в сыворотке крови больных; возбудителя, выделенного от больного; групп крови с использованием моноклональных антител против аллоантигенов эритроцитов; 1.1.Определение антител в сыворотке крови больного:

–проводят с помощью развернутой реакции агглютинации: к разведениям сыворотки крови больного добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов) и через несколько часов инкубации при 37 отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т.е. образовался осадок;

–реакция с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации;

–реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие термолабильный жгутиковый Н-антиген) – крупнохлопчатая и протекает быстрее; 1.2. Для определения возбудителя, выделенного от больного:

–ставят ориентировочную реакцию агглютинации, применяя диагностические антитела (агглютинирующую сыворотку, полученную гипериммунизацией кролика убитыми микробами), т.е. проводят серотипирование возбудителя;

1.2.1.Техника реализации:

–ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле: к капле агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больного. Рядом ставят контроль – вместо сыворотки наносят каплю р-ра NaCl. При появлении в капле с сывороткой и микробами хлопьевидного осадка («+» реакция) ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увеличивающимися разведениями этой же агглютинирующей сыворотки, добавляя в каждую пробирку по 2-3 капли взвеси возбудителя;

1.2.2.Результат:

–агглютинацию учитывают по кол-ву осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают «+», если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. Одновременно учитывают контроли: сыворотка, разведенная изотоническим раствором NaCl, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же р-ре – мутной, без осадка; 1.3.Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, или РПГА):

–основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговки»;

1.3.1.Цель:

–можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации – РОНГА);

–применяются для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам, гормонам и др.; 1.4.Реакция коагглютинации:

–клетки возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба; 1.5.Реакция торможения гемагглютинации (РТГА):

–основана на блокаде, т.е. подавлении антигенов вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего гемагглютининовые шипы вирусов теряют свойство агглютинировать эритроциты;

–применяют для диагностики вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи и др.) могут агглютинировать эритроциты; 1.7.Реакцию агглютинации для определения групп крови:

–применяют для установления системы АВ0 с помощью агглютинации эритроцитов антителами иммунной сыворотки против антигенов групп крови А(II), В(III). Контролем служат: сыворотка, не содержащая антител, т.е. сыворотка AB(IV) группы крови; антигены, содержащиеся в эритроцитах групп А(II), B(III). Отрицательный контроль не содержит антигенов, т.е. используют эритроциты группы 0(I);

1.8.В реакции агглютинации для определения резус-фактора:

–используют антирезусные сыворотки (не менее 2-х различных серий). При наличии на мембране исследуемых эритроцитов Rh-антигена происходит агглютинация этих клеток. Контролем служат стандартные Rh+ и Rh– всех групп крови; 1.9.Реакцию агглютинации для определения антирезусных антител (непрямую реакцию Кумбса):

–применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких больных обнаруживают антирезусные антитела, являющиеся неполными, одновалентными. Они специфически взаимодействуют с Rh+ эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса;

1.9.1.Механизм:

–в систему антирезусные антитела + Rh+ эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобулинов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов;

1.9.2.Результат:

–диагностируют патологические состояния, например гемолитическую болезнь новорожденных: эритроциты Rh+ плода соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые перешли через плаценту от Rh– матери. Можно также выявлять неполные антитела против микробов;

117.Реакция преципитации. Механизм. Компоненты. Способы постановки. Применение. 1.Реакция преципитации:

–формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена c антителами в виде помутнения – преципитата, образующегося при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса;

–реакцию ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. К вариантам реакции преципитации относят двойную иммунодиффузию по Оухтерлони, радиальную иммунодиффузию, иммуноэлектрофорез и др.; 1.1.Реакцию кольцепреципитации:

–ставят в узких пробирках с иммунной сывороткой, на которую наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих 2-х р-ров образуется непрозрачное кольцо преципитата. Избыток антигена не влияет на результат реакции кольцепреципитации вследствие постепенной диффузии реагентов к границе жидкости. Если в качестве антигенов в реакции кольцепреципитации используют прокипяченные и профильтро - ванные водные экстракты органов или тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации (реакция Асколи при сибирской язве); 1.2.Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони:

–агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после его затвердевания в нем вырезают лунки размером 2-3 мм. В эти лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, диффундирующие навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. У многокомпонентных систем между лунками с разными антигенами и антителами сыворотки появляется несколько линий преципитата; у идентичных антигенов линии преципитата сливаются; у неидентичных – пересекаются; 1.3.Реакция радиальной иммунодиффузии:

–иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок;

–по диаметру колец и концентрации искомого в-ва (антигенов или антител) составляют кривую, по которой определяют концентрацию антигена (или антител) в исследуемом образце;

–используют для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.; 1.4.Иммуноэлектрофорез:

–сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза. Затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой, диффундируя в гель, образуют в месте «встречи» с антигеном линии преципитации; 1.5.Реакция флоккуляции по Рамону:

–появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин–анти- токсин или анатоксин–антитоксин;

–применяют для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина;

118.Реакция связывания комплемента. Механизм. Компоненты. Применение. 1.Реакции с участием комплемента:

–основаны на активации комплемента комплексом антиген–антитело: 1.1.Реакция связывания комплемента (РСК):

–ставится с сывороткой крови больного, которую предварительно прогревают при температуре 56 для инактивации собственного комплемента;

–проводят в две фазы:

1-я фаза – инкубация смеси, содержащей три компонента (антиген + антитело + комплемент);

2-я фаза (индикаторная) – выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним;