Добавил:

Sekretar kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Ростовский Государственный Медицинский Университет

Предмет:

Медицина общая

Файл:

Российский_журнал_гастроэнтерологии,_гепатологии,_колопроктологии (35)

.pdf

Скачиваний:

Добавлен:

23.03.2024

Размер:

1.14 Mб

Скачать

☆

<<< < Предыдущая 1 2 3 4 56 / 106 7 8 9 10 > Следующая >>>

Оригинальные исследования

Таблица 1

Характеристика больных, получавших лечение альбуминовым диализом

Показатель	Первая группа (n=9)	Вторая группа (n=5)

Средний возраст, лет	53±22	36±14
Распределение по полу:	8	4
мужчины	8	4
мужчины

женщины	1	1
Этиология острой печеночной	8 – первичные	3 – полиорганная недостаточность
недостаточности	и метастатические опухоли	при сепсисе
	печени
	1 – эхинококкоз	2 – фульминантная форма печеночной
		недостаточности (болезнь Вильсона–
		Kоновалова, вирусный гепатит В)
Энцефалопатия (по шкале комы	7,2	7
Глазго)
Среднее АД, мм рт. ст.	69	63
Признаки почечной недостаточности:	3	2
концентрация креатинина, мкмоль/л	489	411
суточный диурез, мл	450	390

Материал и методы				Больные были разделены на две		почечной недостаточности с оли-
исследования				группы (табл. 1). В первую		гурией и повышением сывороточ-
				группу были включены 9 паци-		ного	креатинина		(в	среднем
Проведено лечение 14 паци-				ентов с хирургическими заболе-		436±108 мкмоль/л). У больных
ентов с острой печеночной и пе-				ваниями печени, вторую соста-		первой группы альбуминовый ди-
ченочно-почечной недостаточно-				вили 5 пациентов, повреждение		ализ проводился «периоперацион-
стью с использованием альбуми-				печени у которых являлось час-		но» в комплексе с хирургическим
нового	диализа на		аппарате	тью полиорганной недостаточно-		вмешательством. Четырем боль-
MARS	(Teraklin, Германия)			сти на фоне сепсиса (3 случая)		ным за 72–24 ч до проведения
в комбинации с аппаратами «Ис-				либо имело врожденный харак-		планируемой операции в зависи-
кусственная почка»			Fresenius	тер или фульминантный на фо-		мости от концентрации билируби-
4008 Н. Показанием к альбуми-				не вирусного гепатита.		на выполнялись 1–2 альбумино-
новому диализу явились нарас-				У всех больных состояние ге-		вых диализа с целью устранения
тающая	энцефалопатия, выра-			модинамики характеризовалось		интоксикации		для	обеспечения
женная	гипербилирубинемия			развитием артериальной	гипото-	безопасности анестезии. Все они
(концентрация		общего	билиру-	нии со снижением среднего арте-		затем	были	прооперированы.
бина более 255 мкмоль/л), ги-				риального давления до 69 и 63 мм		У одного пациента радикальная
пераммониемия, у части пациен-				рт. ст. соответственно. Три паци-		операция позволила				восстано-
тов появление также признаков				ента первой группы и два второй		вить функцию печени немедлен-
почечной		недостаточности.		группы имели также проявления		но и проведение повторного ди-
										Таблица 2
			Изменение основных лабораторных показателей

	Показатель			До	Сразу после			Kратность
				альбуминового диализа	альбуминового диализа				снижения

Общий билирубин, мкмоль/л				586,6		268,6			2,18
Прямой билирубин, мкмоль/л				412,4		124,5			3,31
Непрямой билирубин, мкмоль/л				174,2		109,4			1,59
АлАТ, МЕ/л				436		404			1,07
АсАТ, МЕ/л				337		283			1,19
Аммиак, мкг%				164		69			2,38
Азот мочевины, ммоль/л				23,4		8,6			2,72
Kреатинин, мкмоль/л				436		63			6,90

Оригинальные исследования
14	13,4
	13,4
12		650
12
10		550
10
8	7,2	450
8	7,2
6		350
						Первая группа
4		250
						Вторая группа
2		150
		150
0		До диализа	После	24 ч	48 ч	72 ч
0	До альбуминового диализа		завершения диализа
	До альбуминового диализа
	После альбуминового диализа
Рис. 3. Состояние центральной		Рис. 4. Динамика концентрации общего билирубина (мкмоль/л) после
нервной системы (по шкале комы		проведения альбуминового диализа у больных по группам
Глазго) у наблюдавшихся больных

ализа не понадобилось. У трех

по шкале комы Глазго, основан-

намики. Через 4–6 ч после нача-

других, а также у 5 остальных

ной на сумме балльной оценки

ла диализа отмечалась их норма-

пациентов первой группы потре-

трех

критериев

–

открывания

лизация с восстановлением сред-

бовалось

выполнение

диализов

глаз,

наличия

произвольных

него

артериального

давления

в послеоперационный период

движений и речи (ясное созна-

до

физиологического

уровня

из-за нарастания концентрации

ние – 15 баллов).

(в среднем с 69±11 до 85±5 мм рт.

билирубина

плазмы.

Четырем

ст.), уменьшением ЧСС с 101±14

из них оказалось достаточно од-

Результаты

до 76±18 в минуту. Нормализа-

ного диализа, так как итоговая

ция гемодинамики, по-видимому,

исследования

концентрация билирубина в те-

способствовала и восстановлению

и их обсуждение

чение последующих суток не на-

фильтрационного давления в по-

растала, что, по-видимому, сви-

Динамика клинических и ла-

чечных клубочках,

что

привело

детельствует

о восстановлении

бораторных показателей по хо-

к увеличению диуреза у пациен-

функции

оставшейся

печеноч-

ду

диализа

первые

тов с печеночно-почечной недо-

ной ткани. В остальных случаях

в группах достоверно не разли-

статочностью

400±320

до

были проведены повторные про-

чалась, в связи с чем представ-

1500±560 мл в сутки.

цедуры.

лены

средние значения тестов

При лабораторном

исследо-

Антикоагуляция

осуществля-

всех пациентов

(табл.

2).

вании показателей пигментного

лась дозированной инфузией гепа-

В ближайших непосредственных

обмена выявлено

значительное

рина со скоростью 100–250 ЕД/ч,

результатах проводимого диали-

уменьшение

содержания били-

доза гепарина устанавливалась на

за можно выделить три очевид-

рубина. Прямая фракция сни-

основе определения активирован-

ных положительных эффекта –

жалась более чем в 3 раза,

ного частичного тромбопластино-

резкое снижение симптомов эн-

непрямая – более чем в 1,5 ра-

вого времени каждые 4 ч с дости-

цефалопатии, отчетливое сниже-

за.

Существенно

уменьшалась

жением целевых значений послед-

ние

гипербилирубинемии,

вос-

концентрация аммиака плазмы,

него на уровне 80–120 с. Это поз-

становление

показателей

гемо-

что, вероятно, обусловило пози-

волило избежать

осложнений,

динамики. Через 4–6 ч после

тивную динамику

клинических

связанных как с недостаточной,

начала процедуры у всех боль-

проявлений

купирования энце-

так и с избыточной антикоагу-

ных снижались проявления эн-

фалопатии.

Практически

не

ляцией.

Учитывая

ограничен-

цефалопатии,

появлялись

связ-

подверглись

изменению марке-

ную емкость сорбента и ионооб-

ная

речь

целенаправленные

ры

цитолиза

–

активность

менной смолы, проводилось мо-

произвольные движения. По за-

аминотрансфераз. После прове-

ниторирование клиренса били-

вершении

диализа

энцефалопа-

дения диализа отмечалась нор-

рубина, после снижения которо-

тия полностью купировалась –

мализация

уровня

креатинина

го до 0 диализ прекращали.

до ясного сознания (рис. 3),

и мочевины, а также электро-

Средняя

продолжительность

нормализовались сон и аппетит.

литных расстройств и наруше-

диализа

составила

16,4±3,5 ч.

Также

значимой оказалась

ний кислотно-щелочного состоя-

Состояние сознания

оценивали

и динамика показателей гемоди-

ния.

Оригинальные исследования

В то же время дальнейшая динамика изучавшихся показателей существенно различалась. У пациентов первой группы восстановление преддиализной концентрации билирубина наблюдалось в среднем в течение 70,2 ч (рис. 4). У 3 пациентов она восстановилась в течение 24 ч, что объяснялось выраженным повреждением печени: у одного выявлен послеоперационный тромбоз воротной вены, у двух

– быстрый рост холангиокарциномы. Несмотря на проведение повторных процедур наступил летальный исход на фоне усугубления полиорганной недостаточности. Однако у остальных пациентов функция печени полностью восстановилась, и они были выписаны из госпиталя. Таким образом, летальность в этой группе составила 33,3%.

Иной характер изменений отмечен у больных второй группы. Восстановление исходных показателей интоксикации отмечалось уже в течение 18–24 ч после завершения процедуры. Несмотря на интенсивную комплексную терапию нарастали признаки сер- дечно-сосудистой недостаточности. Проведение повторных диализов не изменяло динамики процесса и в 4 из 5 случаев (80%) в этой группе отмечен летальный исход на фоне нарастающей полиорганной недостаточности.

Список литературы

1.Болезни печени и желчевыводящих путей: Руководство для врачей / Под ред. В.Т. Ивашкина. – М.:

ООО «Изд. дом «М-Вести», 2005. – 536 с.

2.Гранкин В.И., Хорошилов С.Е., Чиж С.И., Кудряшов С.К.

Опыт использования альбуминового диализа («искусственной печени») в лечении больных с печеночной недостаточностью // Ма-

териалы Междунар. конф. «Критические технологии в реаниматологии». – М., 2003. –

С. 34–36.

3.Клинические лекции по гастроэнтерологии и гепатологии: В 3 т. / Под. ред. А.В. Калинина, А.И. Хазанова. – М.: ГТУВ МО РФ, 2003.

Итак, альбуминовый диализ является эффективным методом элиминации как гидрофобных, так и гидрофильных токсических веществ, накапливающихся при острой печеночной и пече- ночно-почечной недостаточности. У больных наблюдается положительная динамика не только лабораторных, но и клинических показателей, проявляющаяся в устранении симптомов энцефалопатии, стабилизации гемодинамики, нормализации суточного диуреза. Вместе с тем молниеносные формы ге-

патитов (как	вирусных, так
и генетически	обусловленных),

а также полиорганная (в том числе печеночная) недостаточность при сепсисе оказались резистентными к терапии указанным методом. Значительно лучшие результаты получены при опухолевых заболеваниях в порядке подготовки к радикальной операции на печени: устранение токсемии в ходе выполняемой процедуры у большинства пациентов первой группы приводило к стабилизации функции оставшейся печеночной ткани. «Периоперационное» проведение альбуминового диализа позволяет обеспечить безопасность анестезии и быстрое восстановление функции печени после оперативных вмешательств, связанных с массивной

операционной травмой органа. Стойкость полученных результатов зависит от возможности восстановления функции печени, а также от сохранности функций других органов и систем.

Восстановление патологического уровня билирубина в сроки менее 24 ч является проявлением тяжелой печеночной недостаточности с вероятным неблагоприятным исходом. Прогрессирование опухолевого или септического процесса с развитием полиорганной недостаточности делают проведение альбуминового диализа бесперспективным. Это обстоятельство, а также крайне высокая стоимость расходных материалов обусловливают необходимость четкого определения показаний и противопоказаний к его проведению. Снижение этой стоимости – одна из важных проблем. Представляется целесообразной замена донорского альбумина другим ингредиентом (синтетическим носителем). Еще одним перспективным направлением является дополнительное введение препаратов, обрывающих или тормозящих иммуновоспалительные и некротизирующие процессы в печени. Первые результаты альбуминового диализа следует признать успешными.

4.Третьяков Б.В. Альбуминоопосредованный метод гемодиафильтрации – система MARS в лечении печеночной недостаточности // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. – 2001. –

Т.11, № 4. – С. 17–21.

5.Хазанов А.И. Функциональная диагностика болезней печени. – М.: Медицина, 1988. – 304 с.

6.Ямпольский А.Ф. Молекулярная адсорбционно-рециркуляционная система (MARS) – новый метод лечения печеночной недостаточности. Первый собственный опыт // Нефрология и диализ. – 2003. –

Т.5, № 1. – С. 15–20.

7.Bockeria L., Yarustovskiy M., Grigoriantz R. et al. Albumin dialysis in complex treatment of multiorgan failure syndrome in patient after heart surgery // Abstracts of

7-th international symposium on albumin dialysis in liver disease. – Rostock, 2005.

8.Heemann U., Treichel U. et al. Albumin dialysis in cirrosis with superimposed acute liver injury // Hepatology. – Vol. 36, N 4. – P. 949–958.

9.Jalan R., Sen S., Williams R.

Prospects for extracorporeal liver support // Gut. – 2004. – Vol. 53. – P. 890–898.

10.Peszynski P., Klammt S., Peters E., Mitzner S. Albumin dialysis: single pass vs. Recirculation // Abstracts of 3-th international symposium on albumin dialysis in liver disease. – Rostock, 2001.

11.Sen S., Williams R., Jalan R.

Emerging indications for albumin dialysis // Am. J. Gastroenterol. – 2005. – Vol. 100, N 2. – P. 468–475.

Оригинальные исследования

12. Stadlbauer V., Beuers U., Ban-		13.	Stange J., Mitzner S.R. et al.		albumin solution enables the remo-
kuti C. et al. Effect of two differ-			Molekular Adsorbent	Recycling	val of albumin-bound toxins //
ent extracorporeal	liver assist		System (MARS): clinical results of		Artif. Organs. – 1993. – Vol. 17. –
devices on serum bile acids in			a new membrane-based blood puri-		P. 809–813.
patients with acute-on-chronic liver			fication system for bioartificial liver		15. Stockmann H.B. Prospects for the
failure // Abstracts of 7-th inter-			support // Artif. Organs. – 1999.		temporary treatment of acute liver
national symposium	on albumin		– Vol. 23, N 4. – P. 319–330.		failure // Eur. J. Gastroenterol.
dialysis in liver disease. – Rostock,		14.	Stange J., Ramlow W., Mitzner S.R.		Hepatol. – 2002. – Vol. 14. –
2005.			et al. Dialysis against	a recycled	P. 195–203.

Treatment of acute hepatic and hepatorenal failure by albumin dialysis with MARS device

S.Ye. Khoroshilov, V.I. Grankin, S.V. Skvortsov, S.V. Ponomarev,

S.K. Kudryashov, A.I. Khazanov

Treatment with application of albumin dialysis on MARS device was carried out in 14 patients with acute hepatic and hepatorenal failure. The first group included 9 patients with surgical pathology for preoperative preparation and postoperative treatment, the second included 5 patients with «acute septic liver» and fulminant hepatitis. Already at the first procedure dialysis the majority of patients restored consciousness, the contents of bilirubin, ammonia, creatinine in blood serum has decreased 2–2,5 times. In the first group the sustained effect was achieved, in the second – temporary.

Key words: acute hepatic failure, albumin dialysis, MARS device.

Новости колопроктологии

УДК 616.345 006.6 092

Влияние АВС транспортеров на противоопухолевую терапию рака толстой кишки

Т.А. Богуш1, А.Н. Гришанина1, Е.А. Богуш1, И.Д. Калганов2, А.П. Жученко2, А.Ю. Барышников1

(1ГУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва, 2ГУ Государственный научный центр колопроктологии Минздравсоцразвития РФ, Москва)

Методом проточной цитофлюориметрии изучено влияние 5"фторурацила (5ФУ) на функ" циональную активность АВС"транспортеров – маркеров множественной лекарственной рези" стентности (MDR) – по показателю накопления модельного MDR"препарата доксорубицина (Докс) в раковых клетках и клетках нормальной слизистой оболочки толстой кишки, получен" ных из хирургического биопсийного материала. После воздействия 5ФУ выявлено увеличение накопления Докс в нормальных и опухолевых клетках в 67 и 27% случаев соответственно. При этом в опухолевых клетках в 30% отмечено увеличение накопления Докс в ядре, а в 70% – в ци" топлазме. В нормальных клетках выявлено увеличение накопления Докс только в цитоплазме. Меньшая чувствительность клеток слизистой оболочки толстой кишки к воздействию 5ФУ ука" зывает на возможность избирательного повышения цитотоксичности Докс именно в опухоле" вых клетках.

Учитывая тот факт, что Докс является универсальным субстратом АВС"транспортеров и моделирует «судьбу» MDR"цитостатиков в целом, авторы считают, что при лечении рака тол" стой кишки 5ФУ должен рассматриваться не только как противоопухолевый препарат, но и как ингибитор фенотипа множественной лекарственной резистентности, при использовании ко" торого возможно проявление специфической активности большой группы MDR"препаратов в комбинации с 5ФУ в последовательности «антиметаболит → MDR"препарат». Обсуждается необходимость оценки эффективности воздействия 5ФУ на внутриклеточное накопление Докс в опухоли конкретного больного перед принятием решения о целесообразности соче" танного использования 5ФУ с MDR"препаратом.

Ключевые слова: 5"фторурацил, множественная лекарственная резистентность, рак толстой кишки.


локачественные			опухоли	ограничено	врожденной	резис-
желудочно-кишечного				тентностью к большинству ци-
Зтракта, в частности рак				тостатиков.
толстой кишки, являются одним				Причины резистентности мо-
из примеров отсутствия каких-				гут быть разные, но одной из
либо	реальных	достижений		наиболее	важных считается
химиотерапии за последние де-				множественная лекарственная
сятилетия. Совершенствование				резистентность. Множествен-
лекарств на основе антиметабо-				ная в том смысле, что появление
литов и платины дает крайне				устойчивости к одному из цито-
незначительный выигрыш в ле-				статиков сопровождается резис-
чебном	эффекте по сравнению			тентностью к другим лекарст-
с давно применяемой			терапией	вам, отличающимся по структу-
5-фторурацилом с лейковори-				ре и механизму действия – так
ном. Использование же других				называемые MDR (Multi Drug
противоопухолевых		препаратов		Resistance)-препараты.		К ним

относятся антрациклины, винкаалкалоиды, подофилотоксины, таксаны, топотекан, иринотекан и некоторые другие, т. е. большинство препаратов, которые широко используются в клинике.

Причиной развития этого типа резистентности является активация выброса цитостатиков из опухолевых клеток при участии транспортных белков семейства АВС-транспортеров. К настоящему времени многие транспортеры и кодирующие их гены уже идентифицированы.

Новости колопроктологии

Признанными

маркерами мно-

ного

окисления ингибирование

мещали в пробирку с раствором

жественной лекарственной рези-

дыхательной

цепи

митохонд-

Хэнкса и интенсивно встряхива-

стентности являются Pgp (P-gly-

рий, прямая или опосредован-

ли до получения мутной суспен-

coprotein)

и MRP (multidrug

ная

инактивация

АТФ.

Если

зии.

После

этого

суспензию

resistance protein) [1, 7, 12, 17].

вернуться к механизму множе-

фильтровали через капроновый

В раковых

клетках

толстой

ственной

лекарственной

резис-

фильтр для удаления клеточ-

кишки выявлена высокая часто-

тентности, для реализации кото-

ных

конгломератов.

Готовую

та экспрессии фенотипа множе-

рой

необходимы

интактные

для

исследования

суспензию

ственной

лекарственной резис-

транспортные белки и энергети-

клеток

разливали

по

350

μл

тентности [10, 11, 14]. Показано

ка клетки, становится понят-

в пластиковые

пробирки, куда

также, что опухолевые маркеры

ным, что выявление ингибито-

добавляли Докс и все исследуе-

Pgp и MRP отличаются высокой

ров

фенотипа

множественной

мые препараты.

функциональной активностью,

лекарственной

резистентности

Фенотип множественной ле-

при этом функционально актив-

среди

противоопухолевых

ле-

карственной

резистентности

ные Pgp и MRP уменьшают не

карств весьма вероятно. Первые

оценивали по изменению внут-

только цитоплазматическую ак-

положительные результаты с пре-

риклеточного

накопления

до-

кумуляцию

MDR-препаратов,

паратами

платины

таксанами

ксорубицина после воздействия

но и

их

накопление

в ядре.

уже получены [1, 4, 5, 8, 18].

ингибиторов

функциональной

И наконец, для рака толстой

В настоящей работе в качест-

активности Pgp и MRP – вера-

кишки

характерны

высокий

ве

возможного

ингибитора

памила (Knoll, Германия) и ге-

уровень и большая частота экс-

фенотипа множественной лекар-

нистеина (Sigma, США) соот-

прессии

MRP

по

сравнению

ственной

резистентности

рака

ветственно. Все пробы инкуби-

с Pgp [2]. Все это подтверждает

толстой кишки изучен противо-

ровали с ингибиторами и 5ФУ

представление о том, что экс-

опухолевый препарат 5-фтор-

(Teva

Pharmaceutical

Industries

прессия функции АВС-транс-

урацил (5ФУ) – наиболее часто

Ltd,

Израиль)

мин

при

портеров

является

одной из

используемый

в химиотерапии

37 °С, после чего в каждую про-

ведущих

причин

врожденной

этого заболевания.

бирку добавляли раствор Докс

лекарственной

резистентности

(Pharmacia & Upjohn) до раз-

рака толстой кишки к большин-

Материал и методы

ных

конечных

концентраций

ству противоопухолевых препа-

и инкубировали 5 мин при ком-

исследования

ратов,

относящихся

к группе

натной

температуре.

Реакцию

MDR-цитостатиков.

Исследование выполнено на

останавливали

добавлением

В связи со сказанным рабо-

30 биопсийных образцах, полу-

формалина до конечной концен-

ты многих

ученых

посвящены

ченных во время хирургических

трации

10%.

Готовые

пробы

поиску и изучению модификато-

операций в ГУ ГНЦ колопрок-

хранили

холодильнике

при

ров множественной лекарствен-

тологии

Минздравсоцразвития

температуре 4 °С. Использован-

ной резистентности, ингибирую-

РФ:

образцов

опухолевой

ные в работе концентрации про-

щих функцию АВС-транспорте-

ткани и 15 – нормальной слизи-

тивоопухолевых

препаратов

ров, хотя до сих пор ни один из

стой

оболочки

толстой кишки

и ингибиторов АВС-транспорте-

них

не

нашел

применения

соответствующих больных.

ров указаны при описании ре-

в клинике [6, 9, 13, 15, 16].

Оценку

влияния

5ФУ

на

зультатов.

Мы сосредоточили внимание

функциональную

активность

Измерения

внутриклеточной

на поиске ингибиторов АВС-

АВС-транспортеров

проводили

флюоресценции

выполняли

на

транспортеров

среди

противо-

методом

проточной

цитофлюо-

проточном

цитофлюориметре

опухолевых

препаратов. Осно-

риметрии,

адаптированным

на-

FACScan (Becton Dickinson, San

ванием

для

проведения таких

ми для

исследования

плотных

Jose,

CA),

укомплектованном

исследований послужил хорошо

тканей [3]. На первом этапе для

воздухоохлаждаемым аргоновым

известный

факт,

что

помимо

восстановления

энергетических

лазером с длиной волны возбуж-

специфических

эффектов, при-

процессов в клетках биопсий-

дения 488 нм, с применением

водящих

гибели

опухолевых

ный

материал

инкубировали

программного

обеспечения

клеток,

цитостатики

обладают

40 мин

при

37 °С

растворе

«CellQuest». Сбор клеток осуще-

рядом

побочных

проявлений,

Хэнкса,

содержащем

5 ммоль

ствляли со скоростью 500 клеток

вызывающих нарушение многих

глюкозы

(ПанЭко,

Россия).

в секунду, при этом их число со-

клеточных функций. Причина-

Затем образцы разрезали скаль-

ставляло 10 тыс. Исключение из

ми этого, в частности, могут

пелем на кусочки (приблизи-

анализа

разрушенных

клеток

быть

ковалентное

связывание

тельно 1×1×1 мм), которые по-

и лимфоцитов проводили путем

противоопухолевых

препаратов

сле

промывания

растворе

сбора исследуемого пула клеток

с белками, прямое или опосре-

Хэнкса для удаления с границ

при значении шторки 100 с ис-

дованное

продуктами

перекис-

срезов разрушенных клеток по-

пользованием

прямого

(FSC)

Новости колопроктологии

А. Pgp +		Б. MRP +

350	Верапамил

100

101

102

103

104

В. Pgp+

Верапамил

256

100

101

102

103

104

256	Генистеин

100

101

102

103

104

Г. MRP+

Генистеин

256

100

101

102

103

104

Рис. 1. Варианты изменения флюоресценции доксорубицина в раковых клетках толстой кишки у разных больных в ответ на воздействие верапамила и генистеина

На гистограммах представлено распределение клеток в зависимости от интенсивности внутриклеточной флюоресценции доксорубицина:

закрашенные – без воздействия ингибиторов (контроль); прозрачные – после воздействия 3,5×10-4М верапамила (1А и 1В) или 3×10-5М генистеина (1Б и 1Г).

По оси абсцисс – интенсивность внутриклеточной флюоресценции 7,7×10-5М доксорубицина; по оси ординат – количество исследованных клеток.

Врамках указано увеличение (↑) или уменьшение (↓) средней внутриклеточной флюоресценции доксорубицина при воздействии верапамила или генистеина.

Pgp+ и MRP+ – экспрессия в опухолевых клетках активности Pgp или MRP соответственно.

А и Б – увеличение накопления доксорубицина в цитоплазме клеток после воздействия верапамила и генистеина соответственно.

Ви Г – увеличение накопления доксорубицина в ядре после воздействия верапамила и генистеина соответственно

и бокового (SSC) светорассеивания. Сбор и анализ клеток осуществляли по FL2-параметру. Сигнал флюоресценции внутриклеточного Докс регистрировали при длине волны 585 нм. Полученные данные анализировали с помощью программы WinMDI по показателям средней флюоресценции клеток во всей исследуемой популяции.

Возможность химического и/или спектрального взаимодействия 5ФУ и Докс оценивали по изменению флюоресценции 2×10-6М антрациклина в растворе, содержащем разные концент-

рации 5ФУ. Измерения проводили на спектрофлюориметре «Hitachi F2000» при длине волны возбуждения 470 нм и длине волны испускания 590 нм.

При статистической обработке результатов использовался метод Фишера–Стьюдента. Различия считали достоверными при р<0,05.

Результаты исследова ния и их обсуждение

Все исследованные образцы нормальной и опухолевой тканей были охарактеризованы по фе-

нотипу множественной лекарственной резистентности, который оценивали по изменению внутриклеточного накопления Докс при воздействии специфических ингибиторов Pgp и MRP – верапамила и генистеина. Примеры реакций опухолевых клеток на такое воздействие представлены на рис. 1. Обращает внимание разнонаправленность изменения внутриклеточной флюоресценции Докс при увеличении его внутриклеточного накопления в ответ на ингибирование функции АВС-транспортеров: повышение и снижение флюоресцен-

Новости колопроктологии

				Таблица 1
	Влияние 5 фторурацила на флюоресценцию доксорубицина в растворе

5ФУ, М	Флюоресценция доксорубицина в присутствии 5ФУ, усл. ед.1			Изменение флюоресценции
5ФУ, М				доксорубицина относительно
	Опыт 1	Опыт 2	Опыт 3	контроля2
–	237±8,1	253±9,8	231±9,3	1

3,8×10-5	108±4,5	116±3,7	112±5,0	↓2,1*
3,8×10-6	186±7,2	185±8,0	187±6,1	↓1,3*
3,8×10-7	240±9,4	220±8,5	245±9,1	←→
3,8×10-8	231±8,3	213±7,6	230±7,8	←→

1 Представлены данные повторных измерений флюоресценции доксорубицина в концентрации 2×10-6М при добавлении 5-фторурацила в разных концентрациях (данные трех независимых измерений).

2 Отношение показателя средней флюоресценции доксорубицина в растворе, не содержащем 5-фторурацил, к средней флюоресценции антрациклина в присутствии 5-фторурацила.

↓ Снижение флюоресценции.

←→ Отсутствие изменения флюоресценции.

* Различия статистически достоверны (p<0,05).

ции клеток, включивших Докс. Первое (рис. 1А, 1Б) объясняется увеличением цитоплазматического содержания антрациклина, второе (рис. 1В, 1Г) – изменением внутриклеточного распределения Докс, приводящим к увеличению накопления антибиотика в ядре и его связыванию с ДНК, при котором флюоресценция антрациклина

значительно угасает. Аналогичные изменения внутриклеточной флюоресценции Докс при повышении его внутриклеточного накопления под влиянием ингибиторов функции Pgp и MRP выявлены и при исследовании образцов соответствующей нормальной слизистой оболочки толстой кишки, но совпадения характеристик фенотипа множе-

ственной лекарственной резистентности нормальной и опухолевой тканей одного и того же больного не отмечено.

В целом фенотип множественной лекарственной резистентности (экспрессия Pgp и/или MRP) обнаружен во всех исследованных образцах опухолевой ткани и только в 2/3 образцов нормальной слизистой

А. Pgp+ MRP+		Б. Pgp– MRP+


Увеличение накопления	Увеличение накопления
доксорубицина в цитоплазме	доксорубицина в ядре
	350

350

0							0
100		101	102	103	104		100		101	102	103	104

Рис. 2. Примеры воздействия 5-фторурацила на накопление доксорубицина в раковых клетках толстой кишки с фенотипом множественной лекарственной резистентности

закрашенные – без воздействия 3,8×10-7М 5-фторурацила (контроль); прозрачные – после воздействия 3,8×10-7М 5-фторурацила.

В рамках указаны фенотипы клеток опухолей. Pgp+ и MRP+ – экспрессия в опухолевых клетках активности Pgp или MRP соответственно. Pgp– – отсутствие экспрессии в опухолевых клетках активности Pgp.

А – увеличение накопления доксорубицина в цитоплазме клеток после воздействия 5-фторурацила. Б – увеличение накопления доксорубицина в ядре после воздействия 5-фторурацила

Новости колопроктологии

Таблица 2

Влияние 5 фторурацила на внутриклеточное накопление доксорубицина в клетках опухолевой и соответствующей нормальной ткани толстой кишки

Kонцентрация доксорубицина, М

7,7×10-5		1,54×10-5		7,7×10-6
Опухоль	Норма	Опухоль	Норма	Опухоль	Норма
+	–	+	+	+	–

–	–	+	–	+	–
+	–	+	–	+	–
–	+	+	+	+	+
–	–	–	–	–	–

сравнению с исходной внутриклеточной флюоресценцией антрациклина свидетельствуют об ингибирующем воздействии

5ФУ на фенотип множественной лекарственной резистентности. При этом воздействие 5ФУ на опухолевые клетки увеличивает накопление Докс не только в цитоплазме, но и в ядре, что является принципиально важным для реализации биологической активности большинства MDR-цитостатиков.

Результаты сравнительной

+ Увеличение внутриклеточного накопления доксорубицина после воздействия

оценки влияния 5ФУ на внут-

5-фторурацила.

риклеточное

накопление Докс

– Отсутствие эффекта 5-фторурацила на внутриклеточное накопление доксо-

в клетках нормальной и опухо-

рубицина.

левой ткани толстой кишки у

одного и того же больного сум-

оболочки толстой кишки. Пока-

центрации 5ФУ, в 10 раз мень-

мированы в табл. 2, из которой

зано, что функционально актив-

шей. При дальнейшем пониже-

следует, что независимо от ис-

ные Pgp и MRP уменьшают не

нии

уровня

5ФУ, начиная

пользовавшейся

концентрации

только цитоплазматическую ак-

с 3,8×10-7М, антиметаболит не

Докс в диапазоне от 7,7×10-6 до

кумуляцию Докс, но и его на-

влиял на флюоресценцию антра-

7,7×10-5 5ФУ увеличивает внут-

копление

ядре

нормальных

циклина. В этих концентрациях

риклеточное накопление антра-

и опухолевых клеток. И нако-

(3,8×10-7М и 2,5×10-7М) препа-

циклина в опухоли чаще, чем

нец, для рака толстой кишки

рат и был использован в последу-

в нормальной ткани. В целом

характерна

большая частота

ющих экспериментах по оценке

количество ответов на воздейст-

экспрессии MRP по сравнению

влияния 5ФУ на фенотип мно-

вие 5ФУ отмечено в 10 из 15 ис-

с Pgp. Так, экспрессия функции

жественной лекарственной резис-

следованных образцов опухоле-

Pgp

выявлена

в половине,

тентности

при

раке

толстой

вой ткани и только в 4 из 15 –

а MRP – в 2/3 исследованных

кишки.

нормальной

слизистой оболоч-

опухолей, тогда как в клетках

На рис. 2 в качестве примера

ки. Таким образом, число слу-

нормальной слизистой оболочки

представлены данные, получен-

чаев

увеличения

накопления

установлена равная частота экс-

ные при исследовании влияния

Докс в опухолевых клетках при

прессии функциональной актив-

5ФУ на накопление Докс в ра-

всех

концентрациях

антрацик-

ности Pgp и MRP – около 50%.

ковых клетках

толстой

кишки

лина приблизительно в 2 раза

Перед

исследованием

влия-

у 2 больных. Видно, что в обо-

больше, чем в клетках нормаль-

ния 5ФУ на внутриклеточное на-

их случаях опухолевые клетки

ной ткани (67 и 27% соответст-

копление Докс в нормальных и

отвечают на воздействие анти-

венно).

опухолевых клетках были прове-

метаболита изменением внутри-

Различия между нормальны-

дены специальные эксперименты

клеточной

флюоресценции

ми

опухолевыми

клетками

по оценке возможного химичес-

Докс. Повышение интенсивнос-

толстой

кишки

выявляются и

кого и/или спектрального взаи-

ти флюоресценции указывает на

при дифференцированной оцен-

модействия 5ФУ и антрацикли-

увеличение

цитоплазматическо-

ке частоты увеличения цито-

на, которое определялось по из-

го

содержания

антрациклина

плазматического и ядерного на-

менению

флюоресценции

Докс

после воздействия 5ФУ. Умень-

копления Докс при воздействии

в растворе в присутствии 5ФУ

шение внутриклеточной

флюо-

5ФУ (рис. 3). Видно, что при

в разных концентрациях. Дан-

ресценции

Докс

– показатель

увеличении

внутриклеточного

ные, представленные в табл. 1,

увеличения

содержания

препа-

накопления Докс, наблюдаемом

показывают, что в концентрации

рата в ядре и его взаимодейст-

в 67% исследованных опухолей,

3,8×10-5М

5ФУ

значительно

вия с ДНК, при котором, как

в 30% происходило увеличение

(в 2 раза) снижает флюоресцен-

было отмечено выше, происхо-

накопления антрациклина в яд-

цию

Докс. Химическое

и/или

дит

угасание

флюоресценции

ре,

70%

–

цитоплазме.

спектральное

взаимодействие

антрациклина.

В то же время во всех случаях

препаратов, приводящее к пони-

Выявленные изменения вну-

увеличения

внутриклеточного

жению флюоресценции

Докс

триклеточной

флюоресценции

накопления Докс в клетках нор-

в 1,3 раза, выявляется и при кон-

Докс после воздействия 5ФУ по

мальной

слизистой

оболочки,

Новости колопроктологии
Опухоль
Увеличение накопления
доксорубицина в ядре
	30%
67%
	Увеличение накопления
Увеличение внутриклеточного	доксорубицина в цитоплазме
Увеличение внутриклеточного
накопления доксорубицина
	70%
Нормальная слизистая оболочка
Увеличение внутриклеточного
накопления доксорубицина
27%
	100%
	Увеличение накопления
	доксорубицина в цитоплазме
Рис. 3. Частота воздействия 5 фторурацила на накопление и распределение доксорубицина в опухолевых
клетках толстой кишки и соответствующей нормальной ткани

отмеченного в 27% исследованных образцов ткани, выявлено увеличение только цитоплазматического накопления антрациклина.

Анализ полученных результатов позволяет в итоге заключить, что 5ФУ способен ингибировать фенотип множественной лекарственной резистентности в раковых клетках толстой кишки, увеличивая не только внутриклеточное цитоплазматическое, но и ядерное накопление

Докс, что является определяющим в реализации его специфической активности. Меньшая чувствительность клеток нормальной слизистой оболочки толстой кишки к выявленному эффекту 5ФУ и отсутствие случаев увеличения ядерного накопления Докс в клетках нормальной ткани указывают на возможность избирательного повышения цитотоксичности антрациклина при воздействии 5ФУ именно в опухолевых

клетках. Учитывая тот факт, что Докс является универсальным субстратом АВС-транспор- теров и моделирует «поведение» MDR-цитостатиков в целом, сформулированные представления о модифицирующем эффекте 5ФУ не относятся только к антрациклинам. Таким образом, при лечении рака толстой кишки 5ФУ должен рассматриваться не только как противоопухолевый препарат, но и как ингибитор фенотипа множест-

<<< < Предыдущая 1 2 3 4 56 / 106 7 8 9 10 > Следующая >>>

Соседние файлы в папке Гастроэнтерология