- •Аминокислоты, белки, ферменты
- •Задание 2. Определение аминных групп методом формольного титрования
- •Задание 3. Качественные реакции на белки
- •Задание 4. Фракционирование белков сульфатом аммония
- •Задание 5. Определение автолитической активности пшеничной муки
- •Задание 6. Определение активности каталазы муки
- •Задание 7. Качественная реакция на α-амилазу муки
- •Задание 8. Определение активности липаз
- •Липиды Задание 9. Качественные реакции на жиры и масла
- •Углеводы Задание 10. Выделение крахмала
- •Задание 11. Качественные реакции на сахара.
- •Витамины Задание 12. Качественные реакции на жирорастворимые витамины.
- •Витамин а
- •Витамин д
- •Задание 13. Качественная реакция на витамин с.
- •Задание 14. Колориметрическое определение витамина в2.
- •Нуклеиновые кислоты Задание 15. Получение нуклеопротеидов
- •Задание 16. Качественные реакции на вещества, входящие в состав нуклеопротеидов
- •Промежуточные продукты обмена веществ Задание 17. Обнаружение этилового спирта
- •Задание 18. Качественная реакция на альдегиды
- •Рекомендуемая литература
- •Оглавление
Задание 7. Качественная реакция на α-амилазу муки
Ферменты являются специфическими высокомолекулярными белковыми веществами, которые синтезируются в клетках под контролем дизоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) ядер, хлоропластов и митохондрий. Они катализируют все реакции обмена веществ в растениях.
Обмен веществ в растениях разных видов характеризуется протеканием различных ферментативных процессов. Без изучения деятельности ферментов и их специфичности нельзя понять изменчивости химического состава растений.
Активность и специфичность ферментов зависят от различных факторов и, в первую очередь, от концентрации субстрата, активной кислотности среды (рН), температуры и пр. При определении активности ферментов нужно иметь в виду, что каждый фермент характеризуется определенными интервалами величин рН и температуры, при которых он проявляет наибольшую активность и устойчивость. Ферменты весьма чувствительны к воздействию кислот, щелочей, солей тяжелых металлов и к нагреванию.
Для определения ферментов критерием служит специфическая активность, поскольку они часто находятся в клетках в небольшой концентрации и по другим химическим реакциям значительно не отличаются от остальных белков. Основанное на этом принципе определение легко выполнимо, т.к. ферменты сохраняют свою активность при очень большом разведении. Под действием амилаз в растениях происходит гидролиз высокополимерного углерода – крахмала с образованием декстринов и мальтозы. В растениях встречаются α и β-амилазы. Методы определения активности амилазы основаны на учете количества сахара, образовавшегося под действием фермента на крахмал, либо на учете количества нерасщепленного ферментом крахмала, который определяют фотометрически.
Оборудование и реактивы: цитратный буфер, рН 5,6; 2% р-р крахмала, растворимого в воде (2 г крахмала, размешанного в 20 см3 холодной воды, выливают в 80 см3 кипящей воды, после этого нагревают на кипящей бане до просветления раствора); 0,1 н титрованный раствор перманганата, раствор Фелинга, водяная баня с терморегулятором, термостат.
Ход работы. 1. Навеску муки 5 г поместить в коническую колбу на 100 см3.
2. Добавить 50 см3 дистиллированной воды, перемешать и оставить на 30 мин. при комнатной температуре.
3. Отфильтровать содержимое колбы через плотный складчатый фильтр (первые мутные порции фильтрата возвращать на фильтрование).
4. В 4 колбы по 100 см3 внести по 5 см3 вытяжки.
5. Нагреть в течение 15 мин. на водяной бане при температуре 70оС.
6. Охладить быстро под краном с холодной водой (при этом β-амилаза полностью инактивируется, а α-амилаза продолжает оставаться активной).
7. После охлаждения добавить во все колбы цитратного буфера по 5 см3 рН 5,6.
8. В две контрольные колбы добавить по 20 см3 раствора Фелинга, 10 см3 2 % раствора крахмала. Наблюдают образование красно-бурого осадка.
9. Две другие колбы нагревают на водяной бане при 40оС в течение 10 мин, после чего в колбы добавляют по 10 см3 2 % р-ра крахмала, предварительно нагретого до 40 оС. Точно замечают время и выдерживают в водяной бане или термостате при 40щС в течение 30 мин.
10. Добавить 20 см3 раствора Фелинга и определить количество мальтозы, образовавшейся под действием фермента на крахмал.