biohimiyа

Сравните полученные значения с нормальными величинами. Каковы причины повышенного содержания пировиноградной кислоты в сыворотке крови и моче?

Опыт 2. Определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Ступка с пестиком.

4.Водяная баня.

Реактивы. 1. Мышечная ткань.

2.Янтарная кислота, 5%-ный раствор.

3.Метиленовая синь, 0,01%-ный раствор.

4.Растительное масло.

5.Стеклянный песок.

1.Взвесьте 1 г мышечной ткани.

2.Поместите ткань в ступку, тщательно разотрите со стеклянным песком, добавляя 3-4 мл раствора 5%-ной янтарной кислоты.

3.Полученный гомогенат перенесите поровну в 2 пробирки.

4.Содержимое одной пробирки кипятите в водяной бане в течение 3-5 минут.

5.Затем в обе пробирки добавьте по 1 капле раствора метиленовой сини, перемешайте и залейте поверхность жидкости 0,5 мл растительного масла для изоляции от кислорода воздуха. Обе пробирки инкубируйте

вводяной бане (40оС) в течение 10 минут.

Дайте объяснение наблюдаемым явлениям. Какова функция метиленовой сини в данном эксперименте? На какое соединение эта функция возлагается в живой клетке?

51

5. В обе пробирки добавьте по 1 капле 1%-ного раствора йода.

Объясните полученные результаты. Где на практике животные могут столкнуться с формальдегидом?

Опыт 2. Определение концентрации глюкозы в биологических жидкостях ортотолуидиновым методом.

Для определения глюкозы в биологических жидкостях по данному методу в настоящее время различными фирмами выпускаются наборы реактивов. Поэтому суть работы сводится только к правильному использованию набора реактивов согласно инструкции по применению.

Глюкоза с ортотолуидином в кислой среде при повышенной температуре образует комплексное соединение сине-зеленого цвета. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в исследуемой пробе.

Определение без депротеинирования.

Без осаждения белков анализируют сыворотку и плазму крови, мочу. Мочу перед анализом разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:10 до 1:500 и в последующем результат умножают на степень разведения.

1. Приготовьте опытную, калибровочную и контрольную пробы по схеме:

2.Перемешайте. Закройте пробирки фольгой или крышкой.

3.Поместите пробирки в кипящую водяную баню точно на 8 минут.

4.Охладите пробирку под струей холодной воды.

5.Измерьте оптическую плотность опытной (D1) и калибровочной (D2) проб против холостой пробы при длине волны 620 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.

Рассчитайте концентрацию глюкозы по формуле:

53

где Х концентрация глюкозы в калибровочном растворе.

Сравните полученные величины с нормальными физиологическими значениями. Сделайте вывод о состоянии животного. В случае отклонения полученных значений от нормальных величин, предложите возможные причины, объясняющие данный результат.

Назовите факторы, вызывающие гипогликемию и гипергликемию в крови животных.

Опыт 3. Обнаружение глюкозы в моче с помощью качественной пробы Троммера.

Появление глюкозы в моче наблюдается при бешенстве, нервной форме чумы собак, нарушениях функции печени, панкреатической железы и др. У лошадей глюкозурия встречается реже, чем у собак. Лактозурия наблюдается при родильном парезе, воспалении вымени, закупорке сосудов, маститах.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Держатель для пробирок.

4.Газовая горелка.

Реактивы. 1. Моча.

2.Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

3.Сульфат меди, 2%-ный раствор.

1.В пробирку налейте 3 мл мочи, 1 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.

2.Осторожно, по каплям, добавляйте 2%-ный раствор сульфата меди до появления небольшой, неисчезающей при взбалтывании голубой мути гидроксида меди (II).

3.Верхний слой жидкости нагрейте до кипения (не кипятите!).

54

4.В течение 1 минуты (не дольше!) оцените цвет осадка. Образование желто-красного осадка свидетельствует о наличии сахара в моче. (Изменение цвета без осадка может быть при наличии муцина, мочевой кислоты и др.).

Сделайте вывод по результатам эксперимента.

Опыт 4. Полуколичественное определение глюкозы в моче.

Приборы. 1. Ступка с пестиком.

2.Весы.

3.Предметное стекло.

4.Газовая горелка.

5.Пипетка.

Реактивы. 1. Моча.

2.Сульфат меди, кристаллический.

3.Карбонат натрия, кристаллический.

1.В ступке разотрите в тонкий порошок 1 г сульфата меди и 10 г карбоната натрия.

2.На предметное стекло насыпьте немного порошка и нанесите несколько капель мочи.

3.Подогрейте до кипения. Синий цвет означает, что глюкозы нет, желтова- то-зеленый означает, что глюкозы не более 0,5 %, зеленый – не более 1%, коричнево-красный – до 2%, интенсивно красный – свыше 2%.

Запишите Ваши результаты. Сравните результаты с предыдущим опытом.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Занятие № 14. «Обмен углеводов (часть 2)»

Цель занятия: сформировать знания об основных метаболических путях превращения глюкозы.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

55

1.Гликолиз. Последовательность этапов превращения и их роль в организме.

2.Гликогенолиз. Последовательность этапов превращения и их роль в организме.

3.Глюконеогенез. Последовательность этапов превращения и их роль в организме. Биологическая роль данного процесса.

4.Пентозный путь окисления углеводов. Охарактеризуйте стадии данного процесса. Укажите биологическое значение каждой стадии.

5.Гормональная регуляция углеводного обмена.

6.Сравните энергетический выход аэробного и анаэробного окисления молекулы глюкозы.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Выделение гликогена из тканей животных и качественные реакции на гликоген.

Гликоген хорошо растворим в воде и достаточно устойчив в слабокислой среде, поэтому его выделения сводится к механическому разрушению клеток ткани и экстракции гликогена 5%-ным раствором ТХУК.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Водяная баня.

4.Ступка с пестиком.

5.Весы.

6.Стеклянная воронка.

7.Фильтровальная бумага.

Реактивы. 1. Печень.

2.Мышечная ткань

3.Физраствор.

4.Трихлоруксусная кислота, 5%-ный раствор.

5.Дистиллированная вода.

6.Сульфат аммония, насыщенный раствор.

7.Ацетат свинца, 5%-ный раствор.

8.Этанол.

9.Люголя раствор.

1.Печень убитого животного быстро извлекают, разрезают на тонкие пласты, которые немедленно опускают в стакан с кипящим физиологическим раствором на 10-15 минут для инактивации фосфорилазы. Такая печень может храниться в морозильной камере 1-1,5 месяца.

2.Взвесьте 0,5 г печени.

3.Поместите навеску ткани в ступку. Налейте 3 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и разотрите пестиком в течение 10 минут.

4.Затем добавьте 5 мл дистиллированной воды.

5.Полученную суспензию фильтруйте в другую пробирку.

6.Повторите пункт 2-5 с мышечной тканью.

7.С полученными фильтратами проведите нижеследующие реакции:

56

здоровье животных и качество животноводческой продукции? Обоснуйте свою точку зрения.

Опыт 4. Влияние физических нагрузок различного характера на активную реакцию слюны.

Приборы. 1. Стаканчики пластиковые.

2.рН-метр.

3.Глюкометр.

Реактивы. 1. Дистиллированная вода.

2.Сульфат меди, кристаллический.

3.Карбонат натрия, кристаллический.

1.Четырем испытуемым предлагают тщательно прополоскать рот.

2.Затем каждому из них дают по 20 мл дистиллированной воды с тем, чтобы он держал ее во рту, размешивая языком в течение 1-2 мин. Полученные пробы слюны выливают в стаканчики, отмеченными инициалами испытуемых и цифрой 1 (первая проба – уровень покоя).

3.После этого половине испытуемых предлагают бежать на месте в максимально высоком темпе, с подниманием колена до горизонтального положения бедра и энергичными движениями руками в течение 30 сек. Второй половине испытуемых – в умеренном темпе («рысцой») в течение 3 мин.

4.По окончании бега у всех испытуемых снова собирают пробы слюны (как описано выше) – в новые стаканчики (пометив их инициалами и цифрой 2).

5.В стаканчиках и определяют рН с помощью рН-метра.

6.В пробах слюны определяют также содержание молочной кислоты с помощью анализатора молочной кислоты и глюкозы.

Объясните полученные результаты.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

59

Занятие № 15. «Обмен липидов (часть 1)»

Цель занятия: сформировать знания о строении, функции и метаболизме липидов. Освоить методику определения общих липидов в сыворотке крови.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1.Липиды пищи: строение и классификация.

2.Биологическая роль и функции липидов в организме.

3.Переваривание липидов в желудочно-кишечном тракте и их всасывание. Ресинтез жиров в клетках слизистой оболочки кишечника.

4.Транспорт жиров в организме.

5.Строение и биологическая роль желчных кислот.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Влияние желчи на активность липазы.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Водяная баня.

Реактивы. 1. Молоко.

2.Фенолфталеин, раствор.

3.Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

4.Липаза, вытяжка.

5.Желчь.

1.Возьмите две пробирки.

2.В обе пробирки внесите по 1 мл молока и по 1 капле раствора фенолфталеина.

3.В каждую пробирку добавьте по каплям раствор гидроксида натрия до слабо-розовой окраски по фенолфталеину.

4.В каждую пробирку внесите по 2 капли вытяжки липазы, а в пробирку 1, кроме того, и каплю желчи.

5.Пробирки поместите в водяную баню при 37°С и отметьте время обесцвечивания фенолфталеина в опыте с желчью и без нее.

Объясните наблюдаемые явления.

60