патенты / 21241

818518-- = "/"; . , . . , . . , . , , . .



. :
:
УведомлениеЭтот перевод сделан компьютером. Невозможно гарантировать, что он является ясным, точным, полным, верным или отвечает конкретным целям. Важные решения, такие как относящиеся к коммерции или финансовые решения, не должны основываться на продукте машинного перевода.
РћРџРРЎРђРќРР• РЗОБРЕТЕНРРЇ GB818518A
[]
ПАТЕНТНАЯ СПЕЦРР¤РРљРђР¦РРЇ 818,518 Дата подачи заявки Рё подачи полной спецификации: 28 марта 1958 Рі. 818,518 : 28, 1958. Заявка подана РІ Германии 12 апреля 1957 Рі. Полная спецификация опубликована: 19 августа 1957 Рі. 1959 12, 1957 : 19, 1959 Рндекс РїСЂРё приемке:-Класс 145, 03 Рќ. :- 145, 03 . Международная классификация:- 27 . :- 27 . ПОЛНАЯ СПЕЦРР¤РРљРђР¦РРЇ Усовершенствования РІ устройствах для ручных станков для выполнения гребенчатых Рё подобных операций или РІ отношении РЅРёС…. РњС‹, , немецкая компания, расположенная РїРѕ адресу: 4, Брайтшайдштрассе, Штутгарт-Р—, Германия, настоящим заявляем РѕР± изобретении, для чего РјС‹ молимся, чтобы нам был выдан патент, Р° метод, СЃ помощью которого РѕРЅ должен быть реализован, был РїРѕРґСЂРѕР±РЅРѕ описан РІ следующем заявлении: - - , , 4, , -, , , , , :- Настоящее изобретение относится Рє устройству, РІ первую очередь предназначенному РІ качестве вспомогательного приспособления для ручных станков для выполнения гребенчатых соединений Рё подобных операций, РїСЂРё этом указанное устройство имеет рабочую поверхность, называемую здесь для удобства ссылки «столешницей», которая служит для направления обрабатываемые детали Рё который имеет прорезь для прохождения полотна РґРёСЃРєРѕРІРѕР№ пилы, соединенного СЃ инструментальным шпинделем ручного станка Рё РїСЂРёРІРѕРґРёРјРѕРіРѕ РІ движение РёРј. - , - , " ", - . Уже известны гребенчатые устройства, РІ которых направляющий стержень, проходящий параллельно РѕСЃРё пильного полотна, установлен РЅР° направляющей рамке, которая может перемещаться перпендикулярно РѕСЃРё циркулярной пилы Рё снабжена поворотным зажимным устройством для заготовки, которое подлежит механической обработке, РїСЂРё этом задняя сторона указанного зажимного устройства, обращенная Рє направляющей раме, имеет РїРѕ меньшей мере РѕРґРёРЅ штифт, посредством которого зажимное устройство может выборочно вставляться РІ РѕРґРЅРѕ или РґСЂСѓРіРѕРµ РёР· нескольких установочных отверстий РІ направляющей раме, причем эти отверстия расположены СЂСЏРґРѕРј СЃ РґСЂСѓРі РґСЂСѓРіР° РЅР° интервалах, равных интервалам между выемками гребенчатого соединения, так что штифт можно вставить РІ следующее отверстие для подготовки Рє вырезанию следующей выемки гребенчатого соединения. Однако стало очевидно, что заготовки больших размеров потребуют длинной серии установочных отверстий, промежутки между которыми должны быть точно равными. Более того, необходимые СѓР·РєРёРµ РґРѕРїСѓСЃРєРё значительно увеличивают стоимость изготовления таких аксессуаров Рё РјРѕРіСѓС‚ использоваться только СЃ дисковыми пилами, ширина зубьев которых точно соответствует зазорам. 3 СЃ 6 между установочными отверстиями. - , , , , - - , , , , 3 6 . Согласно настоящему изобретению существенное упрощение изготовления устройства, предназначенного РІ первую очередь для гребенчатого соединения Рё подобных операций, достигается Р·Р° счет наличия РїСЂСЏРјРѕР№ направляющей, которая может быть установлена РЅР° столешнице Рё которая состоит РёР· стержня, предпочтительно металлический стержень, поперечное сечение которого РЅРµ более чем равно выемке гребенчатого соединения, подлежащей вырезанию 55 заготовки пильным полотном так, чтобы заготовка была подготовлена Рє вырезанию следующей выемки гребенчатого соединения, можно установить РЅР° направляющую, зацепив ее СЃ заранее вырезанным РІ заготовке углублением. Р’РІРёРґСѓ 60 того, что РІ каждом случае для направления заготовки используется предыдущее комбинированное углубление, можно также использовать дисковые пилы СЃ разной шириной зубьев , так как РІ каждом случае необходимо менять только регулировку 65 РїСЂСЏРјРѕР№ направляющей. , - 50 , , , , - 55 , - , 60 , , 65 . Рзобретение дополнительно описано СЃРѕ ссылкой РЅР° прилагаемые чертежи, которые иллюстрируют предпочтительные варианты осуществления изобретения только РІ качестве примера, Рё фиг.70, РЅР° которых: фиг. 1 представляет СЃРѕР±РѕР№ осевой разрез соединительного устройства согласно изобретению; фиг. 2 представляет СЃРѕР±РѕР№ поперечное сечение, взятое РїРѕ линии - РЅР° СЂРёСЃ. 1 Рё показан частично РІ перспективе 75, фиг. 3 - РІРёРґ сверху верхней части рабочего стола устройства, показанного РЅР° СЂРёСЃ. 1 Рё 2, фиг. 4 - РІРёРґ СЃР±РѕРєСѓ измененной формы направляющей, 80 РќР° СЂРёСЃ. 5 показан РІРёРґ СЃР±РѕРєСѓ еще более модифицированной формы направляющей, Р° РЅР° СЂРёСЃ. 6 показан план СЂРёСЃ. 5. 70 : 1 , 2 , - 1 75 , 3 1 2, 4 , 80 5 , 6 5. Как показано РЅР° чертежах, соединительное устройство включает РІ себя РѕРїРѕСЂРЅСѓСЋ пластину 85, Рє которой приварены направляющие трубки 11 Рё 12 для приема соответствующих направляющих штифтов 13 Рё 14, верхние концы которых приклепаны Рє столешнице 16, которая служит опорным основанием для обработки, РїСЂРё этом заготовка 15 представляет СЃРѕР±РѕР№ показано 90, СЂРёСЃ. 4 в„– 9956/58 818,518 РЅР° СЂРёСЃ. , РІ положении РЅР° столешнице. Р’ столешнице имеется прорезь 17 для прохождения РґРёСЃРєР° циркулярной пилы 18 СЃ шириной Р·СѓР±Р° около 5 РјРј. Для фиксации -5 опорная пластина 10 Рё, следовательно, столешница 16 Рє РѕРїРѕСЂРЅРѕР№ шейке 20 шпинделя ручного электрического станка предусмотрена трубчатая деталь 21, которая выполнена РІ качестве трубного зажима Рё приварена. РЅР° РѕРґРЅРѕРј конце Рє РѕРїРѕСЂРЅРѕР№ пластине 10 так, чтобы проходить РѕС‚ нее горизонтально. , 85having 11 12 13 14 16 , 15 90 4 9956/58 818,518 17 18 5 -5 10, 16, 20 - , 21 10 . РЎРѕРѕСЃРЅРѕ трубчатому элементу 21 зажато внешнее кольцо 22 шарикоподшипника, внутреннее кольцо 23 которого предназначено для установки оправки 24, несущей полотно циркулярной пилы 18. Оправка может быть жестко зажата РЅР° ее уменьшенном конце 25 РІ патрон 26 ручного станка СЃ электрическим РїСЂРёРІРѕРґРѕРј, который обозначен пунктирными линиями РЅР° фиг. 1, РєРѕРіРґР° трубчатый элемент 21 зацепляется Р·Р° защитную втулку 27 Рё затягивается РЅР° ней СЃ помощью зажимного винта 28, причем втулка 27 зацепляется Р·Р° патрон 26 Рё относится Рє ручному станку, который более РїРѕРґСЂРѕР±РЅРѕ РЅРµ показан. 21 22 -, 23 24 18 25 26 - , 1, 21 27 28, 27 26 - . Для того чтобы иметь возможность фрезеровать РІ заготовке 15 гребенчатые углубления 30 СЃ точно одинаковыми интервалами, РЅР° столешнице перпендикулярно РѕСЃРё циркулярного пильного полотна 18 расположена прямая направляющая 31. 15 - 30 , 31 18. Направляющая 31 имеет квадратное поперечное сечение, размеры которого несколько меньше размеров выемок 30, которые подлежат фрезерованию Рё которые показаны уже фрезерованными. РР· нижней стороны направляющей 31 выходят РґРІР° штифта 32, которые расположены РЅР° расстоянии РґСЂСѓРі РѕС‚ РґСЂСѓРіР° для вставки. РІ любой паре соответственно расположенных направляющих-установочных отверстий 33 4) Рё 34, которые расположены РґРІСѓРјСЏ группами РІ столешнице. Отверстия 34 РѕРґРЅРѕР№ РіСЂСѓРїРїС‹, СЃРј. СЂРёСЃ. 3, смещены несколько вперед РґСЂСѓРі РґСЂСѓРіР°, Р° отверстия 33 другая РіСЂСѓРїРїР° смещается соответствующим образом Рё таким образом, что, РєРѕРіРґР° штифты 32 направляющей 31 вставлены РІ любую пару отверстий 33, 34, направляющая 31 РїСЂРѕС…РѕРґРёС‚ параллельно плоскости полотна РґРёСЃРєРѕРІРѕР№ пилы. Как более четко показано РЅР° фиг. 3, отверстия каждой РіСЂСѓРїРїС‹ расположены РІ шахматном РїРѕСЂСЏРґРєРµ относительно РґСЂСѓРі РґСЂСѓРіР° СЃ небольшими интервалами, так что расстояние между направляющей 31 Рё плоскостью полотна циркулярной пилы можно регулировать РІ соответствии СЃ соответствующей шириной Р·СѓР±Р° полотна циркулярной пилы. 31 30 31 32 - 33 4) 34 34 , 3, 33 31 32 33, 34, 31 3, 31 . Направляющая для определения рабочего места, показанная РЅР° СЂРёСЃ. 4, отличается РѕС‚ показанной РЅР° СЂРёСЃ. Рё 2 тем, что РѕРЅР° состоит РёР· стержня, РѕР±Р° конца которого согнуты РїРѕРґ прямым углом. может удерживаться Р·Р° счет натяжения собственной пружины после вставки РІ подходящие прямоугольные углубления РІ столешнице. 4 2 69 - . Р’ отличие РѕС‚ направляющих ранее описанных вариантов реализации, направляющая, показанная РІ примере РЅР° фиг. 5 Рё 6, РЅРµ требует каких-либо отверстий или углублений для размещения направляющих РІ столешнице. Р’ этом примере направляющая состоит РёР· стального стержня 40, который имеет РѕРґРёРЅ конец 70 приклепан Рє рифленому направляющему элементу 41, Р° РґСЂСѓРіРѕР№ конец РёР·РѕРіРЅСѓС‚ РІ форме хомута, РїСЂРё этом РЅР° конце хомута установлен зажимной РІРёРЅС‚ 42. Направляющую можно легко прикрепить, зацепив ее рифленый элемент 41 над 75 продольным краем столешницы, обозначенной позицией 45 РЅР° СЂРёСЃ. 2, Рё зацепив РґСЂСѓРіРѕР№ конец РІ форме стремени СЃ противоположным Рё фланцевым продольным краем столешницы, обозначенным позицией 46 РЅР° СЂРёСЃ. 2, так, чтобы зажимной РІРёРЅС‚ 80 42 можно было привинтить Рє край столешницы СЃ фланцем, чтобы зафиксировать РЅР° ней направляющую. , 5 6 - , 40 70 41 , 42 41 75 , 45 2, - , 46 2, 80 42 .
, ."> . . .
: 506
: 2024-04-12 13:06:45
: GB818518A-">
: :

818519-- = "/"; . , . . , . . , . , , . .



. :
:
УведомлениеЭтот перевод сделан компьютером. Невозможно гарантировать, что он является ясным, точным, полным, верным или отвечает конкретным целям. Важные решения, такие как относящиеся к коммерции или финансовые решения, не должны основываться на продукте машинного перевода.
РћРџРРЎРђРќРР• РЗОБРЕТЕНРРЇ GB818519A
[]
ПАТЕНТНАЯ СПЕЦРР¤РРљРђР¦РРЇ 8185519 Дата подачи заявки Рё подачи полной спецификации 15 сентября 1955 Рі. 8185519 15, 1955. в„– 26481/55. 26481/55. Заявление подано РІ Соединенных Штатах Америки 15 сентября 1954 РіРѕРґР°. 15, 1954. Полная спецификация опубликована 19 августа 1959 Рі. 19, 1959. Рндекс РїСЂРё приемке: -Класс 2 (3), 2. : - 2 ( 3), 2. Международная классификация: -07 Рі, ПОЛНАЯ СПЕЦРР¤РРљРђР¦РРЇ : -07 , Белковые комплексы РЇ, ГОВАРД БЛРРЎРЎ КЛЕВЕНС, гражданин Соединенных Штатов Америки, проживающий РїРѕ адресу: 5545, Форбс Авеню, Питтсбург, Пенсильвания, Соединенные Штаты Америки, настоящим заявляю РѕР± изобретении, РЅР° которое СЏ молюсь, чтобы РјРЅРµ был выдан патент. Рё метод, СЃ помощью которого это должно быть выполнено, должен быть РїРѕРґСЂРѕР±РЅРѕ описан РІ следующем утверждении: , , , 5545, , , , , , , , :- Настоящее изобретение относится Рє связыванию полностью фторированных или частично фторированных алифатических кислот, спиртов, производных спиртов, аминов Рё РёС… солей СЃ белковыми материалами СЃ образованием флюоросоединений-белковых комплексов Рё, более конкретно, относится Рє защите белковых материалов РѕС‚ тепловой денатурации. Рё денатрация мочевиной Рё РґСЂСѓРіРёРјРё химическими веществами. , , ,, , , , . Ранее было показано, что анионы низших жирных кислот, присутствующие РІ РЅРёР·РєРёС… концентрациях РІ растворах сывороточного альбумина человека, оказывают заметное стабилизирующее действие против коагуляции белка РїСЂРё нагревании. кислый анион, максимальная стабилизация достигается РїСЂРё использовании солей жирных кислот, имеющих семь или восемь атомов углерода РІ цепи, Р° РІ концентрации около 0,15 молярной. Выше этой концентрации РїСЂРѕРёСЃС…РѕРґРёС‚ гелеобразование, Р° ниже этой концентрации обнаружено, что стабилизация увеличивается СЃ увеличением длины цепей РґРѕ двенадцати атомов углерода РІ цепи эффект падает СЃ увеличением концентрации. Уменьшение эффективности солей высших жирных кислот РїСЂРё длине цепи выше РІРѕСЃСЊРјРё атомов углерода считалось вероятным следствием денатурирующего действия веществ СЃ моющими свойствами. . , , , , 0.15 , , . Было обнаружено, что додецилсульфат вызывает денатурацию серового альбумина, РЅРѕ оказывает стабилизирующее действие РІ РЅРёР·РєРёС… концентрациях, РїРѕРґРѕР±РЅРѕРµ эффекту, вызываемому лаурат-РёРѕРЅРѕРј. РџРѕ мере увеличения концентрации солей жирных кислот СЃ углеродной цепью РёР· семи или более атомов была достигнута точка, РїСЂРё которой облако больше РЅРµ образовывалось, Р° вместо этого РїСЂРё повышенных температурах образовывался прозрачный гель. Сообщалось, что обстоятельства, которые защищают альбумин РѕС‚ тепловой денатурации, РЅРµ действуют таким же образом, чтобы защитить РґСЂСѓРіРёРµ белки. цент сывороточного гамма-глобулина, измеряемый РїРѕ времени образования геля, уменьшался РїСЂРё добавлении РёРѕРЅРѕРІ каприлата или манделата. , , 10 20 -, , . Диптерийный токсин, дифтерийный антитоксин Рё папаин также становились более термолабильными РёР·-Р·Р° присутствия каприлат-РёРѕРЅР°. Р’ отличие РѕС‚ действия анионов было обнаружено, что катионы СЃ неполярными группами повышают чувствительность серового альбумина Рє тепловой денатурации. , , - , - . РџСЂРё РѕС‚ семи РґРѕ РІРѕСЃСЊРјРё добавление гидрохлорида додециламина Рё гзксиламинла Рє джин-процентным растворам альбумина снижало температуру помутнения пропорционально концентрации молярных растворов амина 0,15, что приводило Рє снижению температуры РЅР° 10°С Рё 400°С соответственно. , 0 15 10 400 . Было обнаружено, что наличие дополнительных карбоксильных РіСЂСѓРїРї снижает защитное действие алифатической кислоты, причем сукцинат Рё фумарат натрия гораздо менее эффективны, чем пропионат Рё бутират. Трихлорацетат, который РІ кислотном состоянии использовался РІ качестве осадителя белков, повышал термическая стабильность альбумина Рё его эффект были РїРѕ степени аналогичны эффекту капроат-РёРѕРЅР°, тогда как монохлорацетат был гораздо менее эффективным защитным средством, чем трихлорацетат, хотя Рё более эффективным, чем ацетат. , , , , . Сообщается, что трифторуксусная кислота является новым реагентом для осаждения Рё РґСЂСѓРіРёС… белков. . Было обнаружено, что анионные детергенты соединяются СЃ белками даже РЅР° щелочной стороне изоэлектрической точки, Р° свойства полученного комплекса обнаруживают поразительную зависимость РѕС‚ массового соотношения детергент/белок, Р° РЅРµ РѕС‚ абсолютной концентрации детергента. Такие детергенты вызывают глубокие изменения. Хотя было показано, что осаждение белков детергентами ограничивается областями, РІ которых белок Рё детергент несут заряды противоположного знака, комбинации анионных детергентов Рё белка сохраняются РЅР° щелочной стороне изоэлектрической точки. Была изучена относительная эффективность гомологичных СЂСЏРґРѕРІ различных анионных детергентов РЅР° яичный альбумин Рё бета-лактоглобулин, Рё было обнаружено, что производные сульфатов Рё сульфонатов, содержащие более РІРѕСЃСЊРјРё атомов углерода, являются осадителями белков. Электрофоретический анализ показал, что РѕРґРЅРѕ осаждение додецилсульфатом натрия обеспечивает лишь частичное разделение компоненты синтетической смеси очищенного альбумина Рё глобулина, забуференных РІ изоэлектрической области, 153, 589 (1944); Журнал биологической С…РёРјРёРё 159, 111 (1945); Журнал биологической С…РёРјРёРё 162, 181 (1946); 167,407 (1947); В« В», том , 1948, стр. 79–122 Рё «Дискуссии Общества Фарадея», в„– 13, стр. 251 (1953). , , / , , - 153, 589 ( 1944); 159, 111 ( 1945); 162, 181 ( 1946); 167,407 ( 1947); , ,1948, 79-122 , 13, 251 ( 1953). Целью настоящего изобретения является образование комплекса белкового материала СЃ полностью фторированной или частично фторированной алифатической кислотой, спиртом, производным спирта, определенным здесь, или амином, имеющим РїРѕ меньшей мере РґРІР° атома углерода, или РёС… солями. , , , . Другой целью настоящего изобретения является образование комплекса белкового материала СЃ полностью фторированной или частично фторированной алифатической кислотой, спиртом, производным спирта, определенным здесь, или амином, имеющим РїРѕ меньшей мере РґРІР° атома углерода, или РёС… солями, которые РјРѕРіСѓС‚ быть нагретый РґРѕ повышенной температуры без тепловой денатурации белка Рё который РІ присутствии мочевины или РґСЂСѓРіРёС… веществ, способных денатурировать белки, защищает белок РѕС‚ денатурации. , , , , , , , , . РџСЂРё добавлении Рє раствору белка такого полностью фторированного или частично фторированного алифатического соединения, имеющего РїРѕ меньшей мере РґРІР° атома углерода, или его соли, присутствующего РІ РІРѕРґРЅРѕРј растворе РІ РІРёРґРµ аниона или катиона СЃ неполярной РіСЂСѓРїРїРѕР№, СЂ полученного раствора, находящегося РІ области, РІ которой фторсодержащее соединение несет заряд того же знака, что Рё остаточный заряд белкового материала, образуется комплекс фторсодержащее соединение-белок. Комплекс полностью фторированной или частично фторированной алифатической кислоты или его соль или частично фторированный алифатический СЃРїРёСЂС‚ или РїСЂРѕРёР·РІРѕРґРЅРѕРµ спирта, как определено здесь, растворимы выше изоэлектрической точки белка. Доведение раствора РґРѕ точки, равной или ниже изоэлектрической точки белка, РїСЂРёРІРѕРґРёС‚ Рє флокуляции Рё осаждению. Комплекс Комплекс фторированного алифатического амина или его соли СЃ белковым материалом растворим РїСЂРё ниже изоэлектрической точки белка Рё РїСЂРё доведении раствора РґРѕ изоэлектрической точки белка или выше нее. комплекс флокулирует Рё осаждается. Комплекс фторсодержащее соединение-белок можно нагревать Рё поддерживать РїСЂРё повышенной температуре без денатурации белка. , - , , - , , , , - . Белок можно выделить РІ неденатурированном состоянии РёР· раствора комплекса фторсодержащее соединение-белок, содержащего мочевину или РґСЂСѓРіРёРµ вещества, которые РІ противном случае могли Р±С‹ вызвать денатурацию белка. - . Фторсодержащее соединение можно удалить РёР· осажденного комплекса или раствора комплекса путем разбавления большим объемом РІРѕРґС‹ или подходящего РІРѕРґРЅРѕРіРѕ буферного раствора, путем диализа против РІРѕРґС‹ или подходящего РІРѕРґРЅРѕРіРѕ буферного раствора или путем обработки раствора комплекса. СЃ соответствующей ионообменной смолой. Если осажденный комплекс разбавляют или диализуют против РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора, забуференного РїСЂРё выше или ниже изоэлектрической точки белка, раствор белка извлекается, РїРѕ существу, свободным РѕС‚ фторсодержащего соединения. , , - , . Следующие полностью фторированные Рё частично фторированные алифатические соединения, имеющие РїРѕ меньшей мере РґРІР° атома углерода Рё содержащие РІ РІРѕРґРЅРѕРј растворе анион или катион СЃ неполярной РіСЂСѓРїРїРѕР№, РїРѕРґС…РѕРґСЏС‚ для использования РІ практике настоящего изобретения. Алифатические кислоты, включая перфтормасляную кислоту. , перфторкапроновая кислота, перфторкаприловая кислота, перфторкаприновая кислота Рё перфторлауриновая кислота, Р° также соответствующие кислоты, РІ которых атом омега-фтора заменен атомом РІРѕРґРѕСЂРѕРґР°, Рё соли таких кислот; альфадигидроперфторалифатические спирты, имеющие РѕС‚ РґРІСѓС… РґРѕ двенадцати атомов углерода; производные спиртов, Р° именно производные частично фторированных алифатических спиртов, имеющих формулу () , РІ которой представляет СЃРѕР±РѕР№ фторалкильный радикал, имеющий РїРѕ меньшей мере РґРІР° атома углерода, такие как фтормасляные, -капроновые, -каприловые, -каприновые Рё -лауриновые кислоты. радикалы Рё РёС… соли; () , РІ котором представляет СЃРѕР±РѕР№ радикал металла или аммония, Р° представляет СЃРѕР±РѕР№ фторалкил-радикал, имеющий РїРѕ меньшей мере РґРІР° атома углерода, такой как фтор-масляный, -капроновый, каприловый-каприновый Рё 4 ауровых радикала; Рё () , РІ котором представляет СЃРѕР±РѕР№ фтор--алкильный радикал, имеющий РїРѕ меньшей мере РґРІР° атома углерода, такой как фтормасляный, -капроновый, -каприловый каоровый Рё 4 ауровых радикала, Рё РёС… соли; Рё альфа-дигидроперфторалифатические амины, имеющие РѕС‚ РґРІСѓС… РґРѕ двенадцати атомов углерода, Рё РёС… соли. Соли таких фторсодержащих соединений, включая соли щелочных металлов Рё аммония фторалифатических кислот, Р° также указанные производные спиртов Рё гидрохлоридные, гидробромидсульфатные Рё фосфатные соли. фторалифатические амины особенно РїРѕРґС…РѕРґСЏС‚ для использования РІ СЃРїРѕСЃРѕР±Рµ настоящего изобретения. , - , , , , , , , - , ; ; , () , -, -, -, -, - , ; () , -, -, -, 4 ; () -, -, - , 4 , ; - , , , , , . Следующий пример иллюстрирует образование комплекса полностью фторированной алифатической кислоты СЃ бычьим сывороточным альбумином. . РџР РМЕР Два СЃРј3 однопроцентного РїРѕ весу РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора белка бычьей сыворотки, забуференного ацетатным буфером РїСЂРё СЂРќ 5,8 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, поместили РІ «Целофан» (зарегистрированный торговая марка) оболочка диаметром полдюйма. Оболочку, содержащую белковый раствор, помещали РІ двадцать РјР» 0,5-процентного РїРѕ весу РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора перфторкаприловой кислоты, забуференного РїСЂРё СЂРќ 5,8 ацетатным буфером Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу. 0,1 Колбу выдерживали РїСЂРё температуре 25°С Рё встряхивали РІ течение РґРІСѓС… часов, время, необходимое для достижения равновесия. Диализат анализировали РЅР° перфторкаприлат-РёРѕРЅ путем измерения поверхностного натяжения, причем разница РІ концентрации свободных РёРѕРЅРѕРІ Рё РёСЃС…РѕРґРЅРѕР№ концентрации РёРѕРЅРѕРІ представляла СЃРѕР±РѕР№ количество комплекс перфторкаприлат-РёРѕРЅР° СЃ бычьим сывороточным альбумином. РЎ каждой молекулой бычьего сывороточного альбумина образовывали комплекс СЃ 54 молекулами перфторкаприлат-РёРѕРЅР°. Рљ содержимому «Целлофановой» оболочки добавляли достаточное количество ацетатного буфера СЃ СЂРќ 4 3 Рё РёРѕРЅРЅРѕР№ силой 0 1 довести его РґРѕ 4,8. Осадок комплекса образуется, как только снижается РґРѕ 4,88, изоэлектрической точки бычьего сывороточного альбумина. , 5 8 0 1, 818,519 18,519 " "" ( ) - 0 5 , 5 8 0 1 25 , , 4 3 0 1 "" 4 8 4 88, . Оболочку «Целлофан», содержащую осажденный комплекс, диализовали против 55 СЃРј3. "" 55 . РІРѕРґРЅРѕРіРѕ ацетатного буферного раствора, имеющего СЂРќ 5,8 Рё РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1 РґРѕ тех РїРѕСЂ, РїРѕРєР° РѕРЅ РЅРµ освободится РѕС‚ перфторкапирилат-РёРѕРЅР°. Альбумин бычьей сыворотки полностью находился РІ растворе, Рё тест РЅР° преципитацию показал, что РѕРЅ неденатурирован. 5 8 0 1 . Р’ системе 1% бычий сывороточный альбумин-перфторкаприловая кислота связывание кислоты или ее солей СЃ бычьим сывороточным альбумином РЅРµ зависит РѕС‚ СЂРќ раствора РґРѕ двадцати девяти молекул кислоты РЅР° молекулу белка Связывание РІ избытке Содержание двадцати девяти молекул перфторкаприловой кислоты РЅР° молекулу бычьего сывороточного альбумина зависит РѕС‚ концентрации фторсодержащего соединения, Рё РёРѕРЅРЅРѕР№ силы раствора. РџРѕ мере увеличения РёРѕРЅРЅРѕР№ силы раствора связывание превышает двадцать -девять молекул перфторкаприловой кислоты РЅР° молекулу бычьего сывороточного альбумина снижается. , - , - - , , , - . Число связанных молекул перфторкаприловой кислоты, превышающее двадцать девять РЅР° молекулу бычьего сывороточного альбумина, заметно уменьшается СЃ увеличением концентрации белка РІ растворе. Максимальное количество связанных молекул перфторкаприловой кислоты РЅР° молекулу бычьего сывороточного альбумина, РІ однопроцентный РїРѕ весу раствор белка, имеющий РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, составляет около СЃРѕСЂРѕРєР°, РєРѕРіРґР° раствора РЅРµ более чем РЅР° РѕРґРЅСѓ единицу ниже изоэлектрической точки, Рё около восьмидесяти, РєРѕРіРґР° раствора находится РЅРµ более чем РЅР° РѕРґРЅСѓ единицу выше изоэлектрической точки. , - , , 0 1, , . Р’ целом, РїСЂРё более РЅРёР·РєРёС… концентрациях анионных фторсодержащих соединений связывание СЃ белками РЅРµ зависит РѕС‚ ; РїСЂРё более высоких концентрациях анионных фторсодержащих соединений мольное соотношение фторсодержащего фунта Рє белку имеет более высокий РїРѕСЂСЏРґРѕРє, РєРѕРіРґР° выше изоэлектрической точки, чем РєРѕРіРґР° раствора ниже 65 изоэлектрической точки белка. Аналогично, РїСЂРё РЅРёР·РєРѕРј фторсодержащем соединении концентрации мольное соотношение фторсодержащее соединение-белок РЅРµ зависит РѕС‚ РёРѕРЅРЅРѕР№ силы; РїСЂРё более высоких концентрациях фторсодержащих соединений соотношение фторсодержащее соединение-белок РјРѕР». 70 уменьшается СЃ увеличением РёРѕРЅРЅРѕР№ силы. , , ; , - 65 , - ; - 70 . Степень связывания фторсодержащего соединения СЃ белком практически РЅРµ зависит РѕС‚ температуры РІ диапазоне РѕС‚ 0 РґРѕ 500°С. 500 . Следующие эксперименты иллюстрируют влияние концентрации перфторкаприловой кислоты РЅР° кислотно-белковое соотношение РІ комплексе. 75 - . РџР РМЕР Р СЏРґ «целлофановых» оболочек, каждая РёР· которых содержала РґРІР° СЃРј3 однопроцентного РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного РїСЂРё СЂРќ 5,8 ацетатным буфером Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, каждая погружали РІ 20 СЃРј3. "" , , 5.8 0 1, 20 . забуференного РїСЂРё том же СЂРќ РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора, содержащего перфторкаприловую кислоту, РїСЂРё варьировании концентрации фтористоводородной кислоты. Колбу, содержащую раствор фтористоводородной кислоты, Рё погруженный РІ нее «целлофановый» РєРѕСЂРїСѓСЃ поддерживали РїСЂРё температуре 250°С. , , , "" 250 . Рё встряхивали РІ течение РґРІСѓС… часов. Диализат РІ каждой колбе анализировали РЅР° перфторкаприлат-РёРѕРЅ путем измерения поверхностного натяжения. Результаты экспериментов представлены ниже РІ табличной форме. . Молярная концентрация -кислоты 0,0227 0,0176 0,011 0,0088 0,0066 0,0044 0,0022 0,001 Количество молекул связанной кислоты РЅР° молекулу белка 69 66 56,5 49,5 37,0 24,3 12,7 4,5 РџР РМЕР 0.0227 0.0176 0.011 0.0088 0.0066 0.0044 0.0022 0.001 69 66 56.5 49.5 37.0 24.3 12.7 4.5 Р СЏРґ «целлофановых» оболочек, каждая РёР· которых содержала РґРІР° РјР» однопроцентного раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного РїСЂРё СЂРќ 4,6 ацетатным буфером 110 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, каждая была погружена РІ двадцать РјР» РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора. забуференные РїСЂРё РѕРґРЅРѕРј Рё том же СЂРќ, имеющие одинаковую РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу Рё содержащие перфторканриловую кислоту, РїСЂРё этом концентрация 115 фторкислоты РІ серии колб варьируется. " " , , 4 6 110 0.1, , , 115 . Колбы, содержащие раствор перфторкаприловой кислоты, Рё погруженный РІ РЅРёС… РєРѕСЂРїСѓСЃ «Целлофан» выдерживали РїСЂРё температуре 25°С Рё встряхивали РІ течение РґРІСѓС… часов. 120 Диализат РІ каждой колбе анализировали РЅР° перфторкаприлат-РёРѕРЅ путем измерения поверхностного натяжения. Результаты экспериментов приведены ниже РІ табличной форме. "" 25 120 . Р° Молекулы связанной кислоты РЅР° молекулу белка 38 36 37 28 16 8,5 4,0 РџР РМЕР 38 36 37 28 16 8.5 4.0 Два СЃРј3 однопроцентного раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного ацетатным буфером СЃ СЂРќ 4,6 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, помещали РІ «целлофановый» РєРѕСЂРїСѓСЃ диаметром полдюйма. РљРѕСЂРїСѓСЃ погружали РІ двадцать СЃРј3 РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора 0,5% концентрации фторкаприловой кислоты, забуференного РїСЂРё СЂРќ 4,6 ацетатным буфером Рё имеющего РёРєСЂРёРєРѕРІСѓСЋ прочность 0,1. Колбу, содержащую раствор фторокислоты Рё «целлофановую» оболочку, поддерживали РїСЂРё температуре РїСЂРё температуре 25°С Рё встряхивании РІ течение РґРІСѓС… часов комплекс альбумина бычьей сыворотки присутствовал РІ оболочке «Целлофан» РІ РІРёРґРµ осадка. Анализ диализата методом измерения поверхностного натяжения показал, что РЅР° молекулу бычьей сыворотки приходится тридцать шесть молекул перфторкаприловой кислоты. РІ комплексе присутствовал альбумин. Целлофановую оболочку, содержащую осажденный комплекс, диализовали против пятидесяти РјР» РІРѕРґРЅРѕРіРѕ ацетатного буферного раствора, имеющего 4,6 Рё РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1. Р’Рѕ время диализа бычий сывороточный альбумин повторно растворялся. Тест РЅР° преципитацию показал что бычий сывороточный альбумин был неденатурированным. , 4 6 0 1 "" - 0 5 , 4 6 0 1 ' "" 25 "" - " " 4 6 0 1 . Если комплекс фторальфатическая кислота-бычий сывороточный альбумин содержит РЅРµ более РґРІСѓС…-трех молекул кислоты РЅР° молекулу бычьего сывороточного альбумина Рё СЂРќ раствора бычьего сывороточного альбумина ниже изоэлектрического пикинта, осаждения РЅРµ РїСЂРѕРёСЃС…РѕРґРёС‚. соотношение фторкислоты Рё бычьего сывороточного альбумина превышает РґРІРµ или три молекулы РЅР° молекулу бычьего сывороточного альбумина, комплекс осаждается, РєРѕРіРґР° бычьего сывороточного альбумина ниже изоэлектрической точки. - , , , . РџСЂРё ниже изоэлектрической точки белка, используемого РїСЂРё образовании комплекса фторсодержащего соединения СЃ белками, количество фторалифатической кислоты, необходимое для осаждения комплекса, уменьшается СЃ увеличением молекулярной массы кислоты. , . Количество связанной фторалифатической кислоты РІ комплексе увеличивается СЃ увеличением концентрации Рё уменьшается СЃ увеличением молекулярной массы кислоты, что иллюстрирует пример . , . РџР РМЕР Серию экспериментов РїРѕ диализу проводили так же, как РІ примере , СЃ использованием серии перфторалифатических кислот различной концентрации, каждая РёР· которых была забуферена РїСЂРё СЂРќ 4,3 Рё имела РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, Р° также РѕРґРёРЅ процент РІРѕРґРЅРѕР№ бычьей сыворотки. раствор альбумина, забуференный РїСЂРё том же СЂРќ Рё имеющий такую же РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу. Результаты экспериментов представлены РІ табличной форме ниже, причем значения РІ третьем столбце представляют СЃРѕР±РѕР№ минимальное молярное соотношение кислота-белок, необходимое для осаждения комплекса. , , 4 3 0 1 , - . Молярная концентрация кислоты Перфтормасляная кислота 085 150-1 Перфторкапроновая кислота 0 011 50-1 Перфторкаприловая кислота 0 006 ( 3-4)-1 Перфторкаприновая кислота 0 00035 2-1 Следую‰РёР№ пример иллюстрирует эффект увеличения концентрации бычьего альбумина. сыворотке РЅР° количество перфторалифатической кислоты, связанной РІ комплексе, Рё влияние увеличения концентрации перфторалифатической кислоты РЅР° количество кислоты, связанной РІ комплексе. 085 150-1 0 011 50-1 0 006 ( 3-4)-1 0 00035 2-1 , . РџР РМЕР Р’ колбу погружали серию «целлофановых» оболочек диаметром полдюйма, каждая РёР· которых содержала РґРІР° РјР» раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного актатным буфером РїСЂРё СЂРќ 5,8 Рё РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу Рћ 1 . содержащий двадцать РјР» раствора перфторкаприловой кислоты, забуференный СЃ СЂРќ 5,8 ацетатным буфером Рё имеющий РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1. Колбу, содержащую раствор кислоты Рё «целлофановые» оболочки, выдерживали РїСЂРё температуре 25°С Рё встряхивали РІ течение РґРІСѓС… часов. Диализат анализировали РЅР° наличие перфторкаприлат-РёРѕРЅР° путем измерения поверхностного натяжения, причем разница РІ концентрации свободных РёРѕРЅРѕРІ Рё РёСЃС…РѕРґРЅРѕР№ концентрации РёРѕРЅРѕРІ, присутствующих РІ диализате, представляет СЃРѕР±РѕР№ количество перфторкаприлат-РёРѕРЅР°, образовавшего комплекс СЃ бычьим сывороточным альбумином. Результаты экспериментов приведены ниже РІ таблице. форма, РІ которой мольное соотношение кислоты Рё белка, присутствующего РІ комплексе, указано РІ третьем столбце. "" , - , , 5 8 1 5 8 0 1 "" 25 , , . Центроцентр раствора кислоты РІ процентах РїРѕ массе Концентрация раствора белка РІ процентах РїРѕ массе 0,2 0 5 47-1 0,2 1 0 23-1 0,2 2 0 12-1 0,2 4 0 7-1 0,5 5 100-1 0,5 1 0 52-1 0,5 2 0 28-1 0,5 4 0 14-1 Другие белки, такие как овальбумин, бычий гамма-глобулин, бета-лактоглобулин, уреаза, желатин Рё сывороточный альбумин человека, обладают способностью связывать фторсодержащие соединения Кислота 818,519 Молярная Концентрация кислоты 0,0148 0 01185 0,00889 0,00594 0,00296 0,00148 0 00074 818 519 аналогична концентрации, наблюдаемой для бычьего сывороточного альбумина, Рё это сходство присутствует как выше, так Рё ниже изоэлектрической точки белка. 0.2 0 5 47-1 0.2 1 0 23-1 0.2 2 0 12-1 0.2 4 0 7-1 0.5 5 100-1 0.5 1 0 52-1 0.5 2 0 28-1 0.5 4 0 14-1 , -, -, , , 818,519 0.0148 0 01185 0.00889 0.00594 0.00296 0.00148 0 00074 818,519 , . Максимальное связывание РІ случае перфторкаприловой кислоты приближается Рє значению насыщения, которое является функцией как предела растворимости кислоты, равного РѕРґРЅРѕРјСѓ проценту РїРѕ массе, так Рё кислотосвязывающей способности конкретного белка. Для однопроцентных белковых растворов максимальный связывание РїСЂРё 5,8 Рё РёРѕРЅРЅРѕР№ силе 0,1 для бычьего сывороточного альбумина, бета-лактоглобулина, уреазы, желатина, овальбумина Рё человеческого сывороточного альбумина составляет 80, 25, 235, 30, 35 Рё 78 молей кислоты РЅР° единицу. молекулы белка соответственно. Максимальное связывание для однопроцентного РїРѕ массе раствора бычьего гамма-глобулина, забуференного РїСЂРё СЂРќ 7,5 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, составляет 145 молей перфторкаприловой кислоты РЅР° молекулу бычьего гамма-глобулина. глобулин. , , , , 5 8 0 1, , -, , , 80, 25, 235, 30, 35, 78 , -, 7 5, 0 1, 145 -. Перфторсоединения, полностью смешивающиеся СЃ РІРѕРґРѕР№, образуют комплексы СЃ белками Рё устанавливают равновесие между фторсодержащим соединением, связанным СЃ белком, Рё свободным фторсодержащим соединением РІ РІРѕРґРЅРѕРј растворе. , , . Первые восемьдесят молекул таких фторсодержащих соединений, связанных СЃ молекулой бычьего сывороточного альбумина, причем белок присутствует РІ концентрации РѕРґРёРЅ процент, Р° раствор имеет СЂРќ 5,8 Рё РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, следуют типичной изотерме адсорбции. , 5 8 0.1, . Дополнительное связывание РїСЂРѕРёСЃС…РѕРґРёС‚, РЅРѕ РІ гораздо меньшей степени, СЃ увеличением концентрации фторсодержащего соединения. 2-процентный РїРѕ массе водный раствор перфторпропионовой кислоты Рё 0,7-процентный РїРѕ массе водный раствор омегагидрофторвалериановой кислоты, каждый РёР· которых забуферен РїСЂРё СЂРќ 5,8 ацетатным буфером Рё имеет РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу РѕС‚ 0,1 РґРѕ РѕРґРЅРѕРіРѕ процента. РїРѕ массе водный раствор бычьего сывороточного альбумина, забуференный ацетатным буфером СЃ СЂРќ 5-8 Рё имеющий РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0-1, СЃ молекулой бычьего сывороточного альбумина связывается более восьмидесяти молекул фторкислоты Максимальное связывание перфторкаприловой кислоты , перфторкаприновая кислота, перфторлауриновая кислота, омега-РіРёРґСЂРѕ-перфтор-пеларгоновая кислота, омегагидро-перфтор-ундекоевая кислота Рё омегагидро-перфтортридекоевая кислота, РїСЂРё добавлении насыщенного РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора кислот, забуференного РїСЂРё СЂРќ 58 ацетатом буфера Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, Рє однопроцентному РїРѕ массе РІРѕРґРЅРѕРјСѓ раствору бычьего сывороточного альбумина, забуференному ацетатным буфером СЃ СЂРќ 5,8 Рё имеющему РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, составляет 80, 10, 6, 33 , 8 Рё 4 моля кислоты РЅР° моль бычьего альбумина сыворотки соответственно. , , 5 , , 2 2 , 0 7 , 5 8 0 1, , 5 8 0 1 , , , --- , -- , - , , 5 8 0 1, 5 8 0 1, 80, 10, 6, 33, 8, 4 , . РџРѕ мере увеличения длины цепи фторсодержащего соединения общее количество РёРѕРЅРѕРІ фторсодержащего соединения, необходимое для полного осаждения белка, заметно уменьшается. , . Действие РёРѕРЅРѕРІ омега-гидроперфторсоединений РЅР° связывание Рё осаждение существенно РЅРµ отличается РѕС‚ действия РёРѕРЅРѕРІ полностью фторированных соединений. Снижение связывания наблюдается РїСЂРё постепенном замещении атомов фтора атомами РІРѕРґРѕСЂРѕРґР°, причем снижение особенно заметно, если фтор атомы, соседние СЃ карбоксильной РіСЂСѓРїРїРѕР№ фторалифатических кислот, заменяются атомами РІРѕРґРѕСЂРѕРґР°. Связывание спиртов Рё вышеописанных спиртовых производных аналогично связыванию фторкислот Рё РёС… солей. Аналогичное связывание наблюдается РІ случае фторалифатических аминов Рё РёС… солей, Р·Р° исключением того, что осаждение комплекса фторсодержащих соединений СЃ белками РїСЂРѕРёСЃС…РѕРґРёС‚ РІ изоэлектрической точке или РїСЂРё выше изоэлектрической точки. -- , , . Следующие примеры иллюстрируют образование комплекса различных фторированных алифатических кислот СЃ белками Рё защиту комплекса фторкислота-белок РѕС‚ тепловой денатурации. - . РџР РМЕР 90. Серия РёР· девяти «целлофановых» оболочек диаметром полдюйма, каждая РёР· которых содержит РїРѕ РґРІР° РєСѓР±.СЃРј. 90 "" , ' . 1% РїРѕ массе РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного ацетатным буфером СЃ СЂРќ 5,8 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 95 0,1, каждый РёР· РЅРёС… погружали РІ двадцать РјР» РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора, содержащего фторкислоту, забуференного РїСЂРё тот же самый СЂРќ СЃ ацетатным буфером Рё имеющий ту же РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу. Кислый раствор поддерживали РїСЂРё температуре 100°С или 250°С Рё перемешивали РІ течение РїРѕ меньшей мере РґРІСѓС… часов для установления равновесия Рё образования комплекса фторсодержащее соединение-белок. , 5 8 95 0 1, , 100 250 - . «Целлофановые» оболочки извлекали РёР· раствора кислоты, раствор комплекса 105 переносили РІ стеклянные РїСЂРѕР±РёСЂРєРё Рё нагревали РІ течение РґРІСѓС… часов, РІ течение этого времени температуру содержимого постепенно повышали РѕС‚ комнатной РґРѕ 105 РЎ или РґРѕ тех РїРѕСЂ, РїРѕРєР° РЅРµ будет наблюдаться флокуляция белка 110. Если флокуляция РЅРµ наблюдалась РґРѕ достижения температуры 105°С, стеклянные РїСЂРѕР±РёСЂРєРё запечатывали так, чтобы РЅРµ было заполнено РїРѕ меньшей мере десять процентов объема РїСЂРѕР±РёСЂРєРё. Затем запаянные РїСЂРѕР±РёСЂРєРё 115 помещали РІ бане РїСЂРё 100°С температуру постепенно повышали РґРѕ 120°С РІ течение РґРІСѓС… часов Рё наблюдали Р·Р° флокуляцией раствора. Результаты экспериментов представлены ниже РІ табличной форме. 120 818 519 Концентрация раствора кислоты РІ процентах РїРѕ весу Перфтормасляная кислота Пепфторкапроновая кислота Перфторкаприловая кислота Перфторкаприновая кислота Перфторлауриновая кислота Амего-гидроперуфлоро-валериановая кислота Омега-гидроперфтороэнтановая кислота Омега-гидроперфтор-пеларгоновая кислота Омега-гидроперфтор-ундекоевая кислота Однопроцентный РїРѕ массе водный раствор бычьего сывороточного альбумина, забуференный РїСЂРё 5,8 Рё имея РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0 1, флокулирует РїСЂРё температуре 65°С. "" 105 , 105 110 105 , 115 100 , 120 120 818,519 -- -- -- -- 5 8 0 1 65 ' . Серию экспериментов примера повторяли, Р·Р° исключением того, что нагрев каждой РїСЂРѕР±РёСЂРєРё прекращали, РєРѕРіРґР° содержимое достигало температуры чуть ниже наблюдаемой выше температуры флокуляции или чуть ниже 120°С, если РІ соответствующей РїСЂРѕР±РёСЂРєРµ РІ примере флокуляция РЅРµ наблюдалась. Содержимое каждой РїСЂРѕР±РёСЂРєРё охлаждали Рё диализовали против десятикратного объема РІРѕРґРЅРѕРіРѕ буферного раствора, имеющего тот же Рё РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу, что Рё раствор белка Рё раствор фторсодержащего соединения. Неденатурированное состояние полученного белка было продемонстрировано СЃ помощью бумажного электрофореза Рё тестов РЅР° преципитацию. Бумажный электрофорез предоставил образец нагретого белка, соответствующий образцу РёСЃС…РѕРґРЅРѕРіРѕ белка, Р° тест РЅР° преципитацию показал, что нагретый белок РЅРµ был денатурированным. 120 , . Белки, извлеченные РёР· белковых комплексов фторсодержащих соединений, выдерживаемых РїСЂРё повышенной температуре или РїСЂРё 120В° РІ течение продолжительных периодов времени Рё РІ которых РЅРµ было флокуляции, находились РІ неденатурированной форме. 120 . РџР РМЕР РџРѕ РґРІРµ СЃРј3 каждого однопроцентного РїРѕ весу РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора бычьего гамма-глобулина, яичного альбумина Рё бета-лактеглобулина, забуференных РїСЂРё СЂРќ 7,55, 5,8 Рё 5,8 соответственно Рё имеющих РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,2, 0,1. Рё 0,5 соответственно, были помещены РІ отдельный «целлофановый» РєРѕСЂРїСѓСЃ диаметром полдюйма Рё погружены РІ отдельную колбу, содержащую двадцать РјР» 0,5-процентного РїРѕ весу РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора перфторкаприловой кислоты, забуференной РїСЂРё том же СЂ. Рё иметь ту же РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу, что Рё белковый раствор. Температуру колб поддерживали РЅР° СѓСЂРѕРІРЅРµ 25В° Рё колбы встряхивали РІ течение РґРІСѓС… часов. Содержимое «целлофановых» оболочек переносили РІ РїСЂРѕР±РёСЂРєРё «» (зарегистрированная торговая марка). Рё РїСЂРѕР±РёСЂРєРё запечатывали. Температуру РїСЂРѕР±РёСЂРѕРє постепенно повышали Рё наблюдали Р·Р° флокуляцией РїСЂРѕР±РёСЂРѕРє. -, -, 7 55, 5 8, 5 8 , 0 2, 0 1, 0 5 , "" , - , 0 5 , 25 "" "" ( ) . Флокуляция яичного альбумина Рё бета-лактоглобулина впервые наблюдалась РїСЂРё 110 . Крупный рогатый СЃРєРѕС‚ 2,0 1,0 1,0 0,1 0,01 1,0 2,0 1,0 0,1 83 . - 110 2.0 1.0 1.0 0.1 0.01 1.0 2.0 1.0 0.1 83 . 92 РЎ. 92 . Отсутствие флокуляции РїСЂРё 120 . 120 . Отсутствие флокуляции РїСЂРё 120 . 120 . Отсутствие флокуляции РїСЂРё 120 . 120 . 81.5 РЎ. 81.5 . РЎ. . Отсутствие флокуляции РїСЂРё 120°С. 120 ' . Отсутствие флокуляции РїСЂРё 120 . 120 . гамма-глобулин РЅРµ флокулировал РїСЂРё 120°С. Следующий эксперимент иллюстрирует влияние РЅР° температуру флокуляции увеличения концентрации раствора фторкислоты. - 120 . РџР РМЕР Серию экспериментов проводили таким же образом, как РІ примере , СЃ использованием возрастающих концентраций перфторкаптиловой кислоты РІ растворе кислоты, который был забуферен РїСЂРё СЂРќ 5,8 ацетатным буфером Рё имел РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1. Р’Рѕ всех экспериментах раствор белка представляли СЃРѕР±РѕР№ РґРІР° СЃРј3 однопроцентного РїРѕ массе РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного РїСЂРё СЂРќ 5,8 ацетатным буфером Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1. 5 8 0 1 , 5 8 0 1. Если флокуляция РЅРµ наблюдалась РїСЂРё достижении температуры 1200°С, РїСЂРѕР±РёСЂРєРё поддерживали РїСЂРё этой температуре РґРѕ тех РїРѕСЂ, РїРѕРєР° РЅРµ произошла флокуляция. Результаты экспериментов приведены ниже РІ табличной форме. 1200 , . Концентрация кислоты РІ молях РЅР° литр Температура флокуляции 0,001 92 0,002 1200 через полчаса 0,0044 120 через 2,5 часа 0,0066 120 через пять часов 0,011 Отсутствие флокуляции РїСЂРё температуре 120РЎ через десять часов Следующий пример иллюстрирует эффект увеличения концентрации белка. решение Рѕ степени защиты РѕС‚ тепловой денатурации, обеспечиваемой связанной фторкислотой. 0.001 92 0.002 1200 - 0.0044 120 2 5 0.0066 120 0.011 120after . РџР РМЕР РҐ Два СЃРј3 десятипроцентного РїРѕ весу РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного ацетатным буфером СЃ СЂРќ 5,8 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1 Рё содержащегося РІ «целлофановой» оболочке диаметром полдюйма, погружали РІ двадцать РјР» 0,2-молярного РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора перфторкаприловой кислоты, забуференного ацетатным буфером СЃ СЂРќ 5,8 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1. Раствор кислоты поддерживали РїСЂРё температуре 25°С РІ течение РґРІСѓС… часов РїСЂРё перемешивании. Содержимое «целлофановой» оболочки было помещено РІ трубку «» Рё запечатано, оставив десять процентов объема трубки незаполненной. , 5 8 0 1, "" , - , 0 2 , 5.8 0 1 25 "" "" , 818,519 . РџСЂРѕР±РёСЂРєСѓ постепенно нагревали РґРѕ температуры 120°С. Флоккуляция появлялась через пять часов РїСЂРё этой температуре. 120 . Степень защиты РѕС‚ тепловой денатурации, Рѕ чем свидетельствует температура флокуляции или время флокуляции РїСЂРё 120В°, РІ случае анионных фторсоединений, увеличивается РїРѕ мере увеличения белкового раствора выше изоэлектрической точки, Р° также зависит РѕС‚ типа используемого буфера. , 120 , , . Следующий пример иллюстрирует влияние увеличения выше изоэлектрической точки белка РЅР° степень защиты РѕС‚ тепловой денатурации, обеспечиваемой связанной перфторкислотой. . РџР РМЕР Два СЃРј3 однопроцентного РїРѕ массе РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора бычьего сывороточного альбумина, забуференного фосфатным буфером СЃ СЂРќ 6,5 Рё имеющего РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, Рё РґРІР° СЃРј3 однопроцентного РїРѕ весу РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора бычьей сыворотки альбумин, забуференный фосфатным буфером СЃ СЂРќ 7,5 Рё имеющий РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1, каждый РёР· которых содержался РІ отдельной «целлофановой» оболочке диаметром полдюйма, каждый погружали РІ двадцать РјР». , 6 5 0 1, , 7 5 0 1, "" - , . однопроцентного РїРѕ массе раствора перфторкапроновой кислоты, забуференного фосфатным буфером СЃ 6,5 Рё 7,5 соответственно, Рё РѕР±Р° имеют РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу 0,1. Кислые растворы поддерживали РїСЂРё температуре 25°С РїСЂРё перемешивании РІ течение Затем содержимое «целлофановых» оболочек запечатывали РІ РїСЂРѕР±РёСЂРєРё РёР· «пирекса», оставляя десять процентов объема РїСЂРѕР±РёСЂРєРё незаполненными. Концентрация кислоты РІ процентах РїРѕ весу 1 1 2 2 2 Ронная сила 0,05 0,1 0,2 0,3 0,05 01 0,2 0,3 Белковые материалы можно стерилизовать нагреванием путем образования комплекса белкового материала Рё фторсодержащего соединения РїСЂРё , РїСЂРё котором комплекс растворим, нагревая раствор комплекса РґРѕ температуры Рё РІ течение времени, такого отсутствие флокуляции комплекса Рё РґРѕ тех РїРѕСЂ, РїРѕРєР° РЅРµ будет проведена стерилизация, Рё удаление фторсодержащего соединения РёР· охлажденного раствора стерилизованного комплекса. , 6 5 7 5 , 0 1 25 " " "" , , 1 1 2 2 2 0.05 0.1 0.2 0.3 0.05 01 0.2 0.3 , , , . Р’ одновременно находящейся РЅР° рассмотрении заявке в„– 126482/55 (серийный в„– 818520) описан Рё заявлен СЃРїРѕСЃРѕР± выделения белковых материалов РІ высокоочищенной Рё неденатурированной форме, включающий стадии: добавления полностью или частично фторированной алифатической кислоты, РїСЂРѕР±РёСЂРєРё нагревали РґРѕ тех РїРѕСЂ, РїРѕРєР° РЅРµ будет наблюдаться флокуляция. Содержимое РїСЂРѕР±РёСЂРєРё, забуференное РїСЂРё СЂРќ 6,5, показало флокуляцию РїСЂРё 100°С. 126482/55 ( 818520), , : , 6 5 100 ' . Содержимое РїСЂРѕР±РёСЂРєРё, забуференное РїСЂРё СЂРќ 7,5, РЅРµ обнаруживало флокуляции РїСЂРё 120°С. 7.5 120 . Поскольку ионная сила раствора белка Рё раствора кислоты увеличивается, концентрация кислоты остается прежней, температура флокуляции снижается или время, необходимое для флокуляции РїСЂРё 120 , сокращается. Следующий пример показывает эффект увеличения РёРѕРЅРЅРѕР№ прочность РІ зависимости РѕС‚ температуры флокуляции. , , 120 . РџР РМЕР Р СЏРґ «целлофановых» оболочек диаметром полдюйма, каждая РёР· которых содержала РґРІР° СЃРј3 однопроцентного РїРѕ весу РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора альбумина бычьей сыворотки, забуференного РїСЂРё СЂРќ 5,8 Рё имеющего возрастающую РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу, были погружены РІ двадцать 0,1% РїРѕ массе РІРѕРґРЅРѕРіРѕ раствора перфторкаприловой кислоты, забуференного РїСЂРё 5,8 ацетатным буфером Рё имеющего возрастающую РёРѕРЅРЅСѓСЋ силу, ионная сила кислотных растворов соответствует РёРѕРЅРЅРѕР№ силе белковых растворов. Кислые растворы выдерживали РїСЂРё 25°С РІ течение РґРІСѓС… часов РїСЂРё перемешивании. Содержимое «Целлофановых» оболочек переносили РІ РїСЂРѕР±РёСЂРєРё «Пирекс» Рё РїСЂРѕР±РёСЂРєРё запечатывали, оставляя незаполненными десять процентов объема РїСЂРѕР±РёСЂРѕРє. Запаянные РїСЂРѕР±РёСЂРєРё постепенно нагревали Рё наблюдали. для флокуляции. "" , - , , 5 8 , 0 1 , 5 8 , 25 "" "" , . Если флокуляция РЅРµ происходила РїСЂРё 120°С, РїСЂРѕР±РёСЂРєРё поддерживали РїСЂРё этой температуре РґРѕ тех РїРѕСЂ, РїРѕРєР° РЅРµ наблюдалась флокуляция. Результаты экспериментов представлены ниже РІ табличной форме. 120 . Флокуляция Температура 96 930 87,5 через 4 часа 1200 через 3 часа через 1 час через 1 час амин, СЃРїРёСЂС‚ или РїСЂРѕРёР·РІРѕРґРЅРѕРµ спирта, определенное здесь 100, имеющее РїРѕ меньшей мере четыре атома углерода, или его соль, которая образует РІ РІРѕРґРЅРѕРј растворе анион или катион СЃ неполярной РіСЂСѓРїРїРѕР№, Рє раствору РїРѕ меньшей мере РѕРґРЅРѕРіРѕ белкового материала, РїСЂРё этом фторсодержащее соединение 105 связывается СЃ белковым материалом Рё образуется комплекс фторсодержащее соединение-белок, регулируя раствора комплекса, РІ результате чего Комплекс осаждают, осадок отделяют Рё удаляют связанный 110 комплекс фтор-соединение-белок. 96 930 87.5 4 1200 3 1 1 , 100 , , - , , 105 - , , , 110 - .
, ."> . . .
: 506
: 2024-04-12 13:06:47
: GB818519A-">
: :

818520-- = "/"; . , . . , . . , . , , . .



. :
:
УведомлениеЭтот перевод сделан компьютером. Невозможно гарантировать, что он является ясным, точным, полным, верным или отвечает конкретным целям. Важные решения, такие как относящиеся к коммерции или финансовые решения, не должны основываться на продукте машинного перевода.
РћРџРРЎРђРќРР• РЗОБРЕТЕНРРЇ GB818520A
[]
СПЕЦРР¤РРљРђР¦РРЇ 818,520 Дата подачи заявки Рё подачи полной спецификации: 15 сентября; 955. 818,520 15,; 955. в„– 26482/55. 26482/55. Заявление подано РІ Соединенных Штатах Америки 15 сентября 1954 РіРѕРґР°. 15, 1954. Полная спецификация опубликована 19 августа 1959 Рі. 19, 1959. Рндекс РїСЂРё приемке: -Класс 2 (3), 2. : - 2 ( 3), 2. Международная классификация: - 07 Рі. : - 07 . ПОЛНАЯ СПЕЦРР¤РРљРђР¦РРЇ Белковые комплексы РЇ, ГОВАРД БЛРРЎРЎ КЛЕВЕНС, гражданин Соединенных Штатов Америки, проживающий РїРѕ адресу: 5545, Форбс Авеню, Питтсбург, Пенсильвания, Соединенные Штаты Америки, настоящим заявляю РѕР± изобретении, РЅР° которое СЏ молюсь, чтобы РјРЅРµ был выдан патент, Рё СЃРїРѕСЃРѕР±, СЃ помощью которого его следует осуществлять, должен быть РїРѕРґСЂРѕР±РЅРѕ описан РІ следующей формулировке: Настоящее изобретение относится Рє связыванию полностью фторированных Рё частично фторированных алифатических кислот, спиртов, производных спиртов, аминов Рё РёС… солей СЃ Данное изобретение, РІ частности, относится Рє СЃРїРѕСЃРѕР±Сѓ очистки белковых материалов путем удаления белковых Рё небелковых примесей, фракционирования смеси белковых материалов Рё разделения РґРІСѓС… или более белковых материалов посредством образования комплексов фторсодержащее соединение-белок, осаждения комплексов или примесей Рё последующего удаления полностью или частично фторированной алифатической кислоты, спирта или амина или РёС… солей РёР· комплексов . , , , 5545, , , , , , , : , , , , , - , , - , , , , , . Ранее было показано, что анионы низших жирных кислот, присутствующие РІ РЅРёР·РєРёС… концентрациях РІ растворах сывороточного альбумина человека, оказывают заметное стабилизирующее действие против коагуляции белка РїСЂРё нагревании. , , . Также наблюдалось усиление этого эффекта СЃ увеличением длины цепи аниона жирной кислоты, причем максимальная стабилизация достигается РїСЂРё использовании солей жирных кислот, имеющих семь или восемь атомов углерода РІ цепи, Рё РїСЂРё концентрации около 0,15 молярной. Выше этой концентрации гель произошло образование, Рё было обнаружено, что ниже этой концентрации стабилизация увеличивается СЃ увеличением длины цепи РґРѕ двенадцати атомов углерода РІ цепи, причем эффект падает СЃ увеличением концентрации. Уменьшение эффективности солей высших жирных кислот СЃ длиной цепи выше РІРѕСЃСЊРјРё атомов углерода Считалось, что атомы ', вероятно, обусловлены денатурирующим действием веществ СЃ детергентными свойствами. Было обнаружено, что додецилсульфат вызывает денатурацию сывороточного альбумина, РЅРѕ оказывает стабилизирующее действие РІ РЅРёР·РєРёС… концентрациях, РїРѕРґРѕР±РЅРѕРµ тому, которое оказывает лаурат-РёРѕРЅ. углеродная цепь РёР· семи или более атомов была увеличена, была достигнута точка, РІ которой облако больше РЅРµ образовывалось, Р° вместо этого РїСЂРё повышенных температурах образовывался прозрачный гель. Сообщалось, что обстоятельства, которые защищают альбумин РѕС‚ тепловой денатурации, действуют РїРѕ-разному. СЃРїРѕСЃРѕР± защиты РґСЂСѓРіРёС… белков Термическая стабильность растворов, содержащих РѕС‚ 10 РґРѕ 20 Рі% сывороточного гамма-глобулина, измеряемая РїРѕ времени образования геля, снижалась РїСЂРё добавлении РёРѕРЅРѕРІ каприлата или манделата. , , 0 15 , , , ' , , 10 20 -, , . Дифтерийный токсин, дифтерийный антитоксин Рё папаин также стали более термолабильными РёР·-Р·Р° присутствия РёРѕРЅР° каприлата. Р’ отличие РѕС‚ действия анионов было обнаружено, что катионы СЃ неполярными группами повышают восприимчивость сывороточного альбумина Рє тепловой денатурации. РЎ семи РґРѕ РІРѕСЃСЊРјРё добавление додециламина Рё гидрохлорида гексиламина Рє 25 Рі-процентным растворам альбумина снижало температуру помутнения пропорционально концентрации амина. , , - , , 25 . 0.15 молярные растворы приводили Рє снижению температуры РЅР° Рё 40 соответственно. 0.15 40 . Было обнаружено, что наличие дополнительных карбоксильных РіСЂСѓРїРї снижает защитное действие алифатической кислоты, причем сукцинат Рё фумарат натрия гораздо менее эффективны, чем пропионат Рё бутират. Трихлорацетат, который РІ кислотном состоянии использовался РІ качестве осадителя белка, увеличивал термическая стабильность альбумина Рё его действие РїРѕ степени СЃС…РѕРґРЅС‹ СЃ действием капроат-РёРѕРЅР°, тогда как монохлорацетат был гораздо менее эффективен РІ качестве защитного средства, чем трихлорацетат, хотя Рё более эффективен, чем ацетат. , , , , . Сообщается, что трифторуксусная кислота является новым реагентом для осаждения слизи Рё РґСЂСѓРіРёС… белков. . Было обнаружено, что анионные детергенты соединяются СЃ белками даже РЅР° щелочной стороне изоэлектрической точки, Р° свойства полученного комплекса обнаруживают поразительную зависимость РѕС‚ массового соотношения детергент/белок, Р° РЅРµ РѕС‚ абсолютной концентрации детергента. изменение молекулярной структуры, приводящее Рє денатурации белков. Хотя было показано, что осаждение белков детергентами ограничивается областями, РІ которых белок Рё детергент несут заряды противоположного знака, комбинации анионных детергентов Рё белка сохраняются РЅР° щелочной стороне изоэлектрической точки. Была изучена относительная эффективность гомологичных СЂСЏРґРѕРІ различных анионных детергентов РЅР° яичный альбумин Рё бета-лактоглобулин, Рё было обнаружено, что производные сульфатов Рё сульфонатов, содержащие более РІРѕСЃСЊРјРё атомов углерода, являются осадителями белков. Электрофоретический анализ показал, что РѕРґРЅРѕ осаждение додезилсульфатом натрия обеспечивает лишь частичное разделение. компонентов синтетической смеси очищенного альбумина Рё глобулина, забуференных РІ изоэлектрической области. 818,520 , , / , , - . Журнал биологической С…РёРјРёРё 153, 589 (1944); Журнал биологической С…РёРјРёРё 159, 111 (1945); Журнал биологической С…РёРјРёРё 162, 181 (1946); Журнал биологической С…РёРјРёРё 167, 407 (1947); «Прогресс РІ С…РёРјРёРё белков», том , 1948, стр. 79–122 Рё «Дискуссии Общества Фарадея», в„– 13, стр. 251 (1953). 153, 589 ( 1944); 159, 111 ( 1945); 162, 181 ( 1946); 167, 407 ( 1947); , , 1948, 79122 , 13, 251 ( 1953). Целью данного изобретения является образование комплекса белкового материала СЃ полностью фторированной или частично фторированной алифатической кислотой, спиртом, производным спирта, как здесь определено, или амином, имеющим РїРѕ меньшей мере четыре атома углерода, или РёС… солями. , , , , , . Другой целью настоящего изобретения является осаждение указанных комплексов фторсодержащего соединения СЃ белком. - . Другой целью настоящего изобретения является удаление водорастворимых РЅР