799

АлАТ является внутриклеточным цито-

стей слизистой оболочки двенадцатиперстной

зольным ферментом. Он выступает в роли ка-

кишки у разновозрастных крольчат породы

тализатора для обратимых переносов аланина

серый великан.

из аминокислоты для альфа-кетоглутарата. В

Методика.

Исследования

проведены

с

результате переноса аминогруппы образуются

использованием крольчат породы серый вели-

глутаминовая и пировиноградная

кислоты.

кан в возрасте 1, 6, 12, 18, 24, 30, 45, 60, 90 и

Наиболее высокая активность АлАТ выявля-

120 суток,

выращенных в условиях личного

ется в клетках печени, меньшая — в клетках

хозяйства Чувашской республики с соблюде-

почек, поджелудочной железы, сердца, ске-

нием необходимых ветеринарно-санитарных

летных мышц и кишечника.

АсАТ также является внутриклеточным

правил и норм кормления в весенне-летний

ферментом, который обратимо катализирует

сезон, по 5 голов в каждом возрасте.

трансаминирование, межмолекулярный пере-

Крольчат натощак

вводили в состояние

нос аминогруппы с 1-аспарагиновой кислоты

общего наркоза. Эвтаназию и все манипуля-

на α-кетоглутаровую кислоту. AсАT содер-

ции выполняли в соответствии с «Правилами

жится в скелетных мышцах и практически во

проведения работ с использованием экспери-

всех паренхиматозных органах —

печени,

ментальных животных» (1977) [9].

сердце, почках, головном мозге, поджелудоч-

Извлеченную двенадцатиперстную кишку

ной железе, легких, кишечнике, в клетках кро-

очищали от содержимого, промывали с хо-

ви – эритроцитах и лейкоцитах. Большая часть

лодным физиологическим раствором, разде-

AсАT (80% активности) обнаруживается в ми-

ляли на проксимальную, медиальную и ди-

тохондриях и составляет митохондриальную

стальную части и замораживали их отдельно в

изоформу, и лишь около 20% содержится в ци-

жидком азоте сосуда Дюара. В лабораторных

тозольной фракции – цитозольная изоформа.

условиях части (пробы) кишки отделяли на

При незначительном поражении клеток тканей

слизистую и мышечную слои,

ткани гомоге-

органов происходит высвобождение AсАT из

низировали в гомогенизаторе.

В гомогенатах

цитозоля, митохондриальные структуры по-

определяли активность АсАТ и АлАТ мето-

вреждаются мало, поэтому общее количество

дом Райтмана и Френкеля колориметрирова-

попадающего в кровь AсАT невелико, в отли-

нием (КФК-2) и одновременно спектрофото-

чие от уровня АлАТ, которая целиком локали-

метрированием

((UV-1800),

описанным

в

зуется в цитозоле и переходит в кровь при по-

справочниках [7], с использованием

набора

вреждении тканей органов [1, 6, 10].

реагентов компании ОАО «Витал Девелопмен

При тяжелом поражении тканей органов

Корпорэйшн» СПб. Расчет активности фер-

АсАT существенно высвобождается из повре-

мента провели по калибровочному графику.

жденных митохондрий клеток тканей органов.

Результаты.

Полученные в ходе иссле-

В связи с этим в диагностике болезней в каче-

стве индикатора состояния целостности тка-

дований данные обобщены в таблице. Приве-

ней висцеральных органов чаще используют

денные

результаты исследований свидетель-

соотношение АсАТ/АлАТ, называемое коэф-

ствуют

о

том,

что

уровень

соотношения

фициентом де Ритиса [13, 14, 15].

АсАТ/АлАТ у односуточных крольчат в ис-

Вместе с тем, результаты научных иссле-

следуемых тканях двенадцатиперстной кишки

дований в этом направлении у продуктивных

разный: наибольший – в тканях мышечного

животных малочисленны [2, 3, 4, 5, 7, 11, 12].

слоя проксимальный части (1,85), слизистого

С целью установления особенностей физиоло-

слоя проксимальной части (1,22±0,009) и сли-

гических параметров коэффициента де Ритиса

зистого

слоя

медиальной

части

(1,12),

в тканях органов пищеварения у

кроликов

наименьший – в тканях мышечного слоя ме-

нами определены активность ферментов АсАТ

диальной части (0,82),

мышечного слоя ди-

и АлАТ в тканях слизистой и мышечной слоев

стальной части (0,76) и слизистого слоя ди-

проксимальной, медиальной и дистальной ча-

стальной части (0,68).

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

71

Таблица

Коэффициент де Ритиса в тканях двенадцатиперстной кишки

у разновозрастных крольчат

Часть

Возраст, сут

кишки

1

6

12

18

24

30

45

60

90

120

Проксим.

1,22±

0,68±

0,85±

0,43±

0,35±

0,38±

0,37±

0,39±

0,81±

2,93±

слизистая

0,011**

0,009

0,004**

0,007

0,003**

0,002

0,003

0,003

0,002

0,005***

*

Проксим.

1,85±

0,72±

0,64±

2,66±

2,69±

2,53±

3,08±

2,38±

2,32±

2,35±

мышечная

0,009

0,004***

0,003

0,012***

0,008

0,013

0,013

0,008

0,011

0,009

Мед.

1,12±

1,62±

1,36±

3,04±

3,23±

2,93±

2,72±

2,97±

2,98±

2,62±

слизстая

0,008

0,005

0,006

0,015***

0,012

0,18

0,012

0,014

0,013

0,017

Мед.

0,82±

0,75±

0,65±

2,83±

3,22±

3,34±

1,87±

2,34±

2,76±

2,79±

мышечная

0,004

0,003

0,003

0,014***

0,017.

0,019

0,012***

0,016

0,015

0,011

Дист.

0,68±

2,27±

1,77±

2,40±

2,87±

2,82±

2,31±

2,48±

2,63±

2,91±

сизистая

0,003

0,016***

0,011*

0,017*

0,015

0,009

0,017

0,016

0,019

0,013

Дист.

0,76±

0,87±

0,69±

2,22±

2,28±

2,45±

1,25±

1,27±

2,65±

2,59±

мышечная

0,005

0,004

0,003

0,015***

0,011

0,016

0,009***

0,011

0,019***

0,014

Примечания:* - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,001 – по отношению к предыдущему возрас-

ту.

К шестисуточному возрасту крольчат ве-

слизистой оболочки кишки значительно воз-

личина коэффициента де Ритиса в тканях сли-

растает, и в последующем на таком относи-

зистого слоя проксимальной части слизистой

тельно высоком уровне стабилизируется.

оболочки двенадцатиперстной кишки значи-

В тканях слизистого слоя медиальной ча-

тельно, на 45,1% (р≤0,01), до 0,68±0,004, сни-

сти слизистой оболочки двенадцатиперстной

жается. В последующие шесть суток жизни

кишки у шести- (1,62±0,005) и двенадцатису-

крольчат она сохраняется примерно на преды-

точных (1,36±0,006) крольчат коэффициент де

дущем уровне (0,85±0,007). К восемнадца-

Ритиса определяется на относительно низком

тисуточному возрасту крольчат величина по-

уровне, на уровне односуточных. К восемна-

казателя вновь значительно уменьшается (на

дцатисуточному возрасту крольчат изучаемый

49,4% (р≤0,01))

до 0,43±0,003. С возрастом

показатель значительно – в 2,2 раза (р≤0,001)

крольчат,

примерно на восемнадцатые сут-

до 3,04±0,015 повышается, и в последующем

ки, исследуемый

показатель выявляется у

на таком же уровне стабилизируется.

двадцатичетырех-

(0,35±0,002),

тридцати-

В тканях мышечного слоя медиальной ча-

(0,38±0,003), сорокапяти- (0,37±0,003) и ше-

сти слизистой оболочки двенадцатиперстной

стидесятисуточных

(0,39±0,002).

У трехме-

кишки коэффициент де Ритиса в течение пер-

сячных крольчат коэффициент де Ритиса су-

вых двенадцати суток жизни крольчат так же

щественно, в 2,1 раза (р≤0,001) (до 0,81±0,005)

как и в тканях слизистого слоя, относительно

увеличивается. У четырехмесячных он значи-

низкий, соответственно у шестисуточных об-

тельно выше, чем у трехмесячных (в 3,6 раза,

наруживается на уровне 0,75±0,003, а у двена-

р≤0,001) и составляет 2,93±0,011.

дцатисуточных – 0,65±0,003. К восемнадца-

В тканях мышечного слоя проксимальной

тисуточному возрасту крольчат коэффициент

части слизистой

оболочки

двенадцатиперст-

де Ритиса значительно возрастает (в 4,3 раза

ной кишки у шестисуточных крольчат коэф-

фициент де Ритиса определяется на уровне

р≤0,001) до 2,83±0,014. На относительно вы-

0,72±0,004, что существенно ниже на 61,1%,

соком уровне изучаемый коэффициент опре-

р≤0,001, чем у односуточных,. Примерно на

деляется и у двацатичетырех- (3,22±0,017), и

таком же уровне он обнаруживается у двена-

тридцатисуточных (3,22±0,017). К сорокапя-

дцатисуточных (0,64±0,003). В последующие

тисуточному возрасту он существенно падает,

шесть суток жизни крольчат, к восемнадца-

на 41,9%, р≤0,001, до 1,87±0,012. В последу-

тисуточному возрасту, коэффициент де Рити-

ющем, к двухмесячному возрасту вновь в 1,2

са в мышечном слое проксимальной части

72

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

ВЕТЕРИНАРИЯ И ЗООТЕХНИЯ

раза, до 2,34±0,016 повышается, однако такое

вается, и с этого возрастного срока на относи-

возрастное изменение недостоверно, р>0,05.

тельно высоком уровне стабилизируется.

В тканях слизистого слоя дистальной ча-

Временное возрастное снижение величины

сти слизистой оболочки двенадцатиперстной

коэффициента обнаруживается в тканях сли-

кишки у шестисуточных крольчат коэффици-

зистого слоя дистальной части у двенадца-

ент де Ритиса намного выше, чем у односу-

тисуточных, в тканях мышечного слоя ди-

точных (в 3,3 раза, р≤0,001), и составляет

стальной части у сорокапяти- и шестидесяти-

2,27±0,016. В последующие шесть суток жиз-

суточных крольчат. Относительно низкий

ни крольчат, к двенадцатисуточному возрасту,

уровень изучаемого показателя в тканях мы-

величина коэффициента достоверно снижает-

шечного слоя проксимальной части кишки

ся на 22,1%, р≤0,05, до 1,77±0,011. К восемна-

выявляется у шести- и двенадцатисуточных.

дцатисуточному возрасту крольчат коэффици-

Несколько иная

закономерность возрастных

ент де Ритиса в слизистом слое медиальной

изменений коэффициента де Ритиса в тканях

части слизистой оболочки кишки вновь по-

слизистого слоя проксимальной части кишки.

вышается, в 1,4 раза, р≤0,05, до 2,40±0,017, и

Здесь он постепенно снижается к восемнадца-

на таком относительно высоком уровне с это-

тисуточному возрасту, на относительно низ-

го возрастного срока стабилизируется.

ком уровне сохраняется до трехмесячного

В тканях мышечного слоя медиальной ча-

возраста, а у более физиологически зрелых

сти слизистой оболочки двенадцатиперстной

крольчат резко возрастает.

кишки уровень коэффициента де Ритиса у ше-

По-видимому, неравномерность и скачко-

сти- и двенадцатисуточных крольчат по срав-

образность возрастных изменений коэффици-

нению с односуточными, одинаков, определя-

ента де Ритиса в тканях слизистого и мы-

ется, соответственно, 0,87±0,004 и 0,69±0,003.

шечного слоев проксимальной, медиальной

В дальнейшем, к восемнадцатисуточному воз-

и дистальной частей слизистой оболочки

расту крольчат

повышается

в

3,2

раза,

двенадцатиперстной кишки связаны с изме-

р≤0,001, до 2,22±0,015. На уровне предыдуще-

нением роли ферментов АсАТ и АлАТ в

го возраста определяется у двадцатичетырех-

процессах переаминирования в клетках тка-

суточных

(2,28±0,011)

и

месячных

ней кишки, неравномерным преобразовани-

(2,45±0,016). К сорокапятисуточному возрасту

ем структуры и функций разных слоев и ча-

крольчат коэффициент де Ритиса уменьшается

стей кишки в постнатальном периоде роста

значительно, на 49,0%, р≤0,001, до 1,25±0,009.

и развития животных.

На уровне сорокапятисуточных он определя-

Полученные

результаты исследований

ется и у двухмесячных (1,27±0,011). У более

могут послужить физиологическим критерием

физиологически зрелых, трехмесячных кроль-

для оценки действия на органы пищеварения

чат, коэффициент де Ритиса в тканях мышеч-

разнообразных подкормок, биодобавок и ле-

ного слоя дистальной части слизистого слоя

карственных препаратов.

двенадцатиперстной кишки существенно вы-

Выводы. 1. Коэффициент де Ритиса в

ше предыдущего

возраста,

(в

2,1

раза,

тканях слизистого слоя медиальной и ди-

р≤0,001) и составляет 2,65±0,019. Такой же

стальной частей двенадцатиперстной кишки в

уровень коэффициента и у четырехмесячных

молозивной, молозивно-молочной фазах и

крольчат – 2,59±0,014.

первой фазе молочного питания определяется

Обобщая полученные данные, можно от-

минимальными величинами, в последующие

метить, что, судя по результатам расчета, ко-

фазы питания стабилизируется на максималь-

эффициент де Ритиса в тканях слизистого слоя

ных величинах.

медиальной части, мышечного слоя медиаль-

2. Коэффициент де Ритиса в тканях сли-

ной и дистальной частей слизистой оболочки

зистого слоя проксимальной части двенадца-

двенадцатиперстной кишки у крольчат отно-

типерстной кишки в течение молочной, пере-

сительно низкий в течение первых двенадцати

ходной и первых фаз растительного питания

суток жизни. В последующем, к восемнадца-

выявляется минимальными величинами, в те-

тисуточному возрасту в тканях слизистого и

чение фаз молозивной, молозивно-молочной,

мышечного слоев медиальной части кишки

третьей и четвертой фаз растительного пита-

изучаемый показатель значительно увеличи-

ния – на максимальном уровне.

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

73

3. Коэффициент де Ритиса в тканях мы-

первой фазе молочного питания определяется

шечного слоя проксимальной, медиальной и

минимальными величинами, в последующие

дистальной частей двенадцатиперстной кишки

фазы питания стабилизируется на максималь-

в течение молозивной, молозивно-молочной и

ном уровне.

74

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

75

Введение. Сальмонеллезы как в этиоло-

8, 9]. Меньшенин В.В. и др. (2010) предлагают

гическом, так и в клиническом отношении яв-

использовать питательную среду, в основу ко-

ляются самостоятельной группой инфекци-

торой заложен гидролизат форменных эле-

онных болезней – крайне сложной по типови-

ментов крови с содержанием аминного азота

довому составу возбудителей [1, 2, 3, 4]. При-

700…900 мг%. Панасовец О.П. (2007) в каче-

нимая во внимание полиэтиологичность забо-

стве источника питательных веществ для

левания и разнообразие клинических форм,

сальмонелл рекомендует использовать экс-

бессимптомное носительство, по-прежнему

тракт кормовых дрожжей. Галиакберова Н.И.

актуальной остается проблема выявления бак-

(2001) указывает на значение аминокислот в

терионосителей [5]. При этом туши и органы,

качестве фактора роста сальмонелл. Проведя

полученные от таких животных, выпускают в

сравнительную оценку эффективности разных

продажу без ограничений, а контаминирован-

питательных сред для экспресс-индикации

ные сальмонеллами продукты и корма не

сальмонелл, Пашкова А.П. (2006) пришла к

имеют органолептических изменений. Данные

выводу, что все известные среды являются

микроорганизмы могут присутствовать в изу-

эффективными, но укороченная инкубация

чаемых объектах в незначительных количе-

возможна только в случае высокой степени

ствах и преимущественно в сочетании с дру-

обсеменения продукта. Таким образом, про-

гой микрофлорой, что также затрудняет их

блема ускоренного выделения сальмонелл из

выделение методом классического бактерио-

пищевых продуктов остается открытой, и за-

логического анализа [6]. Ряд российских и за-

дача наших исследований – разработка до-

рубежных ученых работают над проблемой

ступного и дешевого метода индикации Sal-

выделения сальмонелл из патологического

monella spp.– весьма актуальна. Только новый

материала и разработкой питательных сред [7,

подход к проблеме диагностики сальмонел-

76

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

леза позволит существенно снизить риск

лективного обогащения сальмонелл. Поэтому

возникновения пищевых

токсикоинфекций

параллельно с ионометрическим измерением

среди людей, что определило выбор темы

кислотности среды использовали индикатор

исследований.

Андраде. Известно, что в щелочной,

Целью научных исследований является

нейтральной

и

слабокислой среде индика-

разработка

ускоренного метода

индикации

тор не изменяет цвет испытуемой жидкости,

бактерий рода Salmonella

в пищевых про-

а при рН 6,5 и ниже происходит переход в

дуктах.

красный цвет [17].

Для достижения данной цели поставлены

Опытным путем определили количество

следующие задачи:

индикатора, требуемое для изменения окраски

-

подобрать индикатор,

показывающий

МЗПВ с желтой на красную при условии кис-

кислую реакцию среды;

лой реакции среды. Для этого в опытные об-

-

усовершенствовать

этап

обогащения

разцы вводили от 0,1 до 2,0 см3

индикатора

сальмонелл,

определяемых

в

пищевой

про-

Андраде с шагом 0,1 см3. Визуально видимое

дукции.

изменение окраски произошло при введении

Методика. Работа выполнена в бактерио-

индикатора в объеме 0,5 см3 и более, при этом

логическом отделе ГБУВК «Пермский вете-

интенсивность

окрашивания

усиливалась

ринарный диагностический центр» в период с

прямо пропорционально

количеству

добав-

2014 по 2015 год. Материалом для исследова-

ленного индикатора.

ния служили штаммы S. Typhimutium, S. En-

Также определили время, в течение кото-

teritidis, S. Gallinarum-Pullorum, S. Dublin, S.

рого необходимо учитывать результат. В ито-

Cholerae-suis, S. Infantis, S. Hamburg, S. Vir-

ге оказалось, что для 225 см3 МЗПВ с сальмо-

chow, Shigella flexneri, Escherichia coli, Proteus

неллами оптимальное количество индикатора

vulgaris,

Staphylococcus

aureus,

Listeria

Андраде

составляет

1,0

см3, а

изменение

monocytogenes, полученные из ФГБУ «Науч-

окраски происходит в течение 10-15 секунд.

ный центр экспертизы средств медицинского

Аналогичные испытания были проведены

применения» Минздрава России и выделен-

нами с

Proteus

vulgaris,

E. coli, S.

aureus,

ные из мясной и яичной продукции (всего 39

Listeria monocytogenes и Shigella flexneri. По-

штаммов). Метод исследования – бактериоло-

сле внесения вышеперечисленных культур в

гический.

В

работе использовали две

пита-

МЗПВ и инкубирования при 37ºС, во фла-

тельные среды для неселективного обогаще-

коны вводили по 1,0 см3 индикатора Андра-

ния сальмонелл:

де, при этом среда как контрольных, так и

- модифицированную забуференную пеп-

опытных образцов сохраняла исходное жел-

тонную воду (МЗПВ), которая служила опы-

тое окрашивание.

том (патент № 2570386);

Кроме

визуальной

оценки

изменения

-

забуференную пептонную воду (ЗПВ),

окрашивания контрольных и опытных образ-

приготовленную по ГОСТ

31659-2012

(кон-

цов неселективной питательной среды мы ис-

троль).

пользовали

фотоэлектроколориметр

(ФЭК)

После

инкубации

при

37

°С в

течение

КФК-3. Исходя из цвета испытуемых раство-

18±2

ч в

опытные и

контрольные

образцы

ров, были выбраны синий и зеленый свето-

вносили индикатор Андраде и определяли из-

фильтры, длина волны 420 и 500 нм, соответ-

менение цвета питательной среды.

ственно. Кювету подбирали так, чтобы опти-

Результаты. Известно, что сдвиг реакции

ческая

плотность

испытуемых

растворов

МЗПВ в кислую сторону позволяет предполо-

находилась в интервале от 0,1 до 1,0, чему со-

жить наличие бактерий рода Salmonella в ис-

ответствовала кювета с длиной прохождения

следуемой пробе продукта [16]. Однако, учи-

света 10 мм. Раствор сравнения выбирали со-

тывая массовый характер исследований и за-

гласно закону аддитивности (Аизмерения = ∑Аi).

груженность специалистов ветеринарных ла-

Учитывали, что в качестве раствора сравнения

бораторий,

мы поставили под сомнение эф-

можно использовать аликвотную часть иссле-

фективность

использования

рН-метра

для

дуемого раствора, содержащего все добавлен-

оценки кислотности МЗПВ после этапа несе-

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

77

[Электронный

ресурс].

Систем.

требования:

Adobe

Acrobat

Reader.

URL:

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1574-6968.2010.01904.x/full (дата обращения: 15.01.2012).

Пермский аграрный вестник №1 (13) 2016

79