новая папка 2 / 49968

Таблица 2. Физиолого-биохимические показатели крови коров на поздних сроках стельности (M±m)

Примечание: 1…3 – статистически значимые различия внутри группы; #- статистически значимые различия между опытной и контрольной группой (P 0,05).

Активность ЩФ в сыворотке крови по мере приближения к отелу увеличилась на 87,3% (P<0,01) в контроле и в 2 раза (P<0,01) у животных опытных групп. Увеличение активности ЩФ может быть обусловлено повышенной активностью как плацентарной (маркер нормального функционирования фетоплацентарной системы), так и костной изоформами (созревание матрикса и минерализация костей плода). При этом следует отметить, что по сравнению с контролем у животных первой и второй опытных групп активность ЩФ была выше на 47,7% (P<0,05) и 43,4% (P<0,05) соответственно, что может быть результатом интенсификации углеводного обмена. Известно, что углеводный компонент наиболее важен для рецепторных образований в иммунной системе, поэтому можно предположить, что установленное увеличение его активности обусловлено формированием поствакцинального иммунного ответа. На 267-е сут. стельности у коров отмечено снижение активности ЛДГ, так в контрольной группе она снизилась на 39,8% (P<0,05), и на 33% (P<0,01) и 29,6% (P<0,01) у

коров первой и второй опытных групп соответственно. Поскольку в тканях жвачных в изоферментом спектре преобладают аэробные фракции, то снижение активности данного фермента может быть связано с системным торможением распада углеводов, что служит дополнительным фактором сберегающего углеводы механизма, необходимого для поддержания энергетического статуса плаценты и плода.

3.3. Динамика формирования противовирусного гуморального иммунного ответа у коров на поздних сроках стельности

Результаты оценки антигенной активности вирусных компонентов, входящих в состав двух опытных вакцин, и динамика формирования противовирус-

11

ного гуморального иммунного ответа у стельных коров показали, что применение вакцины «Комбовак» и экспериментальной вакцины приводило к увеличению титра вируснейтрализующих антител более чем в 3-4 раза (рис. 1).

Рис. 1. Динамика изменения уровня вируснейтрализующих антител у коров на поздних сроках стельности

В параллельных исследованиях противовирусные антитела соответствующей специфичности выявляли в ИФА. При сравнительном анализе результатов ИФА и РН установлена положительная корреляция результатов, полученных с помощью этих двух методов (для ВД: r=0,83, P<

0,05; для ИРТ: r=0,91, P< 0,05; для РСИ: r=0,67, P< 0,05).

Таким образом, результаты ИФА подтвердили результаты РН и также свидетельствовали о формировании выраженного поствакцинального гуморального иммунного ответа у вакцинированных животных. Максимальное содержание антител к вирусам ИРТ, ВД, ПГ-3, РСИ, КВ и РВ было отмечено в период формирования вторичного иммунного ответа.

3.4. Морфофизиологические показатели крови телят

Согласно полученным нами результатам, наиболее существенные изменения клеточного состава крови у телят всех групп установлены на 10-е сутки после рождения (табл. 3).

Вэтот период зафиксирован максимальный уровень содержания лейкоцитов

вкрови животных всех групп, при этом количественные показатели у

12

контрольных телят на 48% превышали показатели периода колострального иммунитета (3-и сут. после рождения), у телят двух опытных групп эти значения составили 33,7% и 33% соответственно.

Таблица 3. Морфофизиологические показатели крови телят (M±m)

Примечание: 1…7 – статистически значимые различия внутри группы; * - статистически значимые различия между опытными группами; #- статистически значимые различия между опытной и контрольной группой (P<0,05).

К 235-ти сут. возрасту количество лейкоцитов во всех группах было в 2,2- 2,5 раза (P<0,01) ниже по сравнению с показателями в 10-ти сут. возрасте. Отмеченная динамика содержания лейкоцитов у телят может быть обусловлена тем что, фаза новорожденности представляет собой критический временной промежуток в течение которого происходит наиболее активная адаптационная перестройка организма к внеутробной среде обитания и начало активного

13

функционирования всех органов и систем и процессом физиологического лейкоцитоза (пищеварительный, миогеный и лейкоцитоз новорожденных).

Содержание тромбоцитов у телят было максимальным также на 10-е сут. жизни, при этом их количество у телят контрольной группы повысилось на 71% ,у животных первой и второй опытных групп - в 2,1 раза (P<0,01) и на 82,8% (P<0,05) соответственно по сравнению с данными в период колострального иммунитета, что может быть связано с явлением реактивного (вторичного) тромбоцитоза, обусловленного действием адреналина, стрессом и повышенными физическими нагрузками в ранний постнатальный период.

Количество эритроцитов в крови у телят также претерпевало возрастные изменения. На 117-е сутки жизни их количество значимо увеличилось на 24,5% (P<0,05), 22,3% (P<0,05) и 23,3% (P<0,01) в контроле, первой и второй опытных группах соответственно относительно значения в 3-х сут. возрасте.

3.5. Физиолого-биохимические показатели крови телят

Результаты исследований показали, что у телят в процессе раннего постнатального онтогенеза изменяется концентрация общего белка, активность трансаминаз, ЩФ и ЛДГ (табл. 4). Так, максимальная концентрация общего белка установлена на 235-е сут. жизни, которая была выше на 42,3% (P<0,01), 36,3% (P<0,01) и 35,8% (P<0,01) в крови телят контрольной, первой и второй опытной группы соответственно относительно значений в 3-х сут. возрасте. Одновременно с увеличением концентрации общего белка в сыворотке крови телят увеличивалась и активность трансаминаз. В этот же возрастной период отмечена максимальная активность АсАТ, которая была выше в 2,3 раза

(P<0,01), на 60,5% (P<0,01) и 67% (P<0,01) в крови телят контрольной, первой и второй опытной группы соответственно. Активность АлАт была выше в 2,7 раза (P<0,01) в контроле, 2,5 (P<0,001) и 1,9 (P<0,01) раза в опытных группах соответственно. Эти процессы могут быть связаны со становлением и усилением белоксинтезирующей функции печени, уравновешиванием процессов переаминирования и дезаминирования. Кроме того, активность трансаминаз повышается в период активного роста и развития мышечной массы (4-12 мес. жизни), достигая при этом максимальных значений.

Активность ЩФ в сыворотке крови телят с возвратом имела тенденцию к снижению. Причем наиболее резкое снижение наблюдалось в начальный период постнатального развития. В возрасте 235-ти сут. ее активность была ниже на 25,2% (P<0,05), 38,7% (P<0,05) и 25,4% (P<0,05) в крови телят контрольной, первой и второй опытной группы соответственно. У телят первой и второй опытных групп в период формирования вторичного иммунного ответа ее активность была выше на 37,3% (P<0,05) и 32,8% (P<0,05) по сравнению с

14

контролем. Подобная тенденция была установлена и у коров-матерей, из чего можно сделать заключение, что иммунизация крупного рогатого скота инактивированными препаратами вызывает умеренное увеличение активности данного фермента, обусловленное его физиологическими функциями.

Таблица 4. Физиолого-биохимические показатели крови телят(M±m)

Примечание: 1…7 – статистически значимые различия внутри группы; * - статистически значимые различия между опытными группами; #- статистически значимые различия между опытной и контрольной группой (P<0,05).

Активность ЛДГ, в отличие от таковой у ЩФ, в сыворотке крови экспериментальных животных с возрастом увеличивалась. Значительное повышение активности ЛДГ установлено в молочную фазу постнатального онтогенеза, и данный уровень ферментативной активности сохранялся до конца исследований. Так в возрасте 75-ти сут. ее активность повысилась в 2,5 (P<0,001), 2,3 (P<0,001) и 2 раза (P<0,001) в контроле, первой и второй опытных группах соответственно по сравнению с данными колострального иммунитета.

15

3.6. Динамика формирования противовирусного гуморального иммунного ответа у телят

Результаты проведенных экспериментов показали, что динамика формирования противовирусного гуморального иммунного ответа у телят характеризуется рядом закономерностей (рис. 2).

Рис. 2. Динамика изменения уровня вируснейтрализующих антител у телят

Так результатом вакцинации стельных коров опытных групп является высокий уровень колостральных антител в сыворотке крови новорожденных

16

телят, полученных от иммунных матерей, установленный на 3 – 10-е сутки жизни. У этих телят титр антител ко всем вирусам значительно превышал аналогичные показатели контрольных животных (P<0,01). Последующая двукратная вакцинация телят опытных групп привела к формированию выраженного иммунного ответа и статистически значимому приросту антител. При этом максимальное содержание антител к вирусам ИРТ, ВД, ПГ-3, РСИ, КВ и РВ было зафиксировано в процессе формирования вторичного иммунного ответа. В период 117 – 235 сут. жизни наиболее высокий титр вируснейтрализующих антител был зафиксирован в сыворотке крови телят второй опытной группы (P<0,05).

3.7 Корреляции между показателями крови стельных коров и телят

Анализ полученных результатов позволил установить, что между морфофизиологическими, физиолого-биохимическими показателями крови и формированием иммунного ответа прослеживается связь, которая подтверждается наличием корреляционных связей между ними, отличающимися по типу и силе (табл. 5).

Так на уровень вируснейтрализующих антител в сыворотке крови опытных коров наибольшее влияние оказывают глобулины, общий белок, альбумины, АсАт, АлАт, ЛДГ. Сильная корреляционная связь между концентрацией глобулинов и уровнем вируснейтрализующих антител к РВ, ИРТ и ВД в сыворотке крови обнаружена у коров первой опытной группы, у животных второй опытной группы отмечена прямая зависимость с коэффициентом корреляции выше 0,69 между уровнем вируснейтрализующих антител к ВД и РСИ и активностью АсАт. Также при проведении анализа было отмечено, что штаммы вирусов ИРТ и РВ, а также ВД и РСИ имеют высокий уровень корреляции, что говорит о наличии протективного синергизма между ними. У телят опытных групп на уровень иммунного ответа оказывают влияние концентрация альбуминов, глобулинов, активность трансаминаз и ЛДГ, концентрация общего белка, количество тромбоцитов, эритроцитов, гематокрит, концентрация гемоглобина. У телят первой опытной группы данные корреляционного анализа свидетельствуют о наличии обратной зависимости с коэффициентом корреляции выше 0,69 между уровнем альбуминов и титром вируснейтрализующих антител к ВД и КВ, сильной корреляционной зависимости между активностью АсАт и уровнем вируснейтрализующих антител к ПГ-3 и РВ. У телят второй опытной группы отмечен высокий уровень корреляции между уровнем антител к ИРТ и концентрацией общего белка и глобулинов, а также между уровнем антител к РВ и количеством эритроцитов и тромбоцитов.

17

Таблица 5. Результаты корреляционного анализа между показателями крови коров на поздних сроках стельности

Примечание: ↑↑ (↓↓) – средняя прямая (обратная) корреляционная связь; ↑↑↑ (↓↓↓) - сильная прямая (обратная) корреляционная связь; отмеченные корреляции значимы на уровне P<0,05.

Полученные данные корреляционного анализа свидетельствуют о том, что становление и регуляция иммунного статуса осуществляется не только иммунной системой, а представляет собой единую взаимосвязанную реакцию всего организма, его метаболического статуса с большим количеством межсистемных связей.

18

ВЫВОДЫ

1)Определены морфофизиологические и физиолого-биохимические показатели крови коров на последнем триместре беременности и телят в период раннего постнатального онтогенеза при функциональной нагрузке в виде иммунизации коммерческой инактивированной комбинированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота-, коронавирусной болезней крупного рогатого скота Комбовак» (первая опытная группа) и экспериментальной инактивированной вакциной против вышеуказанных болезней, приготовленной на основе масляного адъюванта Montanide ISA 70 (вторая опытная группа).

2)У стельных коров установлена физиологическая закономерность снижения общего количества лейкоцитов, тромбоцитов, обусловленная сроком стельности животных и формированием родовой доминанты, а не действием противовирусных вакцин. Наиболее существенное и статистически значимое изменение количества форменных элементов отмечается на 267сут. стельности.

3)Показано статистически значимое увеличение количества эритроцитов у коров опытных групп в период формирования вторичного иммунного ответа. У животных первой и второй опытных групп количество эритроцитов в данный период увеличилось на 11,7% (P<0,05) и 10,3% (P<0,05) соответственно по сравнению с данными до вакцинации.

4)Показана статистически значимая закономерность снижения концентрации общего белка, активности АлАТ, ЛДГ и увеличение активности ЩФ

вкрови по мере увеличения срока стельности, которая носит физиологоприспособительный характер, обусловленный, в основном изменениями, происходящими в организме беременного животного, а не следствием иммунизации противовирусными вакцинами.

5)Установлено, что морфофизиологический состав крови у телят в раннем постнатальном онтогенезе изменяется в результате активных адаптационноприспособительных реакций в фазу новорожденности, а также изменения способа и характера питания в переходную фазу, при этом влияние вакцинации с учетом данных факторов нивелируется.

6)Определена возрастная динамика изменения количества лейкоцитов и тромбоцитов у телят. Максимальное их содержание в крови приходится на 10-е сутки после рождения, далее эти показатели с возрастом снижаются и к 235-ти суткам приближаются к значению, соответствующему нормативному показателю у взрослых животных.

7)Возрастные изменения физиолого-биохимических показателей крови телят характеризуются статистически значимым увеличением концентрации

19

общего белка, активности аминотрасфераз, ЛДГ и снижением активности ЩФ и, главным образом, являются результатом активного роста и развития животных, функционального созревания систем и органов и как следствие становлением специфической активности ферментов. Влияние вакцинации с учетом вышеперечисленных факторов нивелируется.

8)Формирование вторичного иммунного ответа у коров и телят сопровождается статистически значимым увеличением активности ЩФ. У вакцинированных животных первой и второй опытных групп ее активность по сравнению с контролем была выше на 47,7% (P<0,05) и 43,4% (P<0,05) у коров

ина 37,3% (P<0,05) и 32,8% (P<0,05) у телят соответственно.

9)Показано отсутствие статистически значимых различий морфофизиологических и физиолого-биохимических показателей крови вакцинированных и контрольных животных на различных этапах онто- и иммуногенеза, что свидетельствует о потенциальной безопасности применяемых противовирусных препаратов для крупного рогатого скота и, как следствие, − о пищевой безопасности продуктов, полученных от вакцинированных животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Установленные морфофизиологические и физиолого-биохимические показатели крови стельных коров и телят могут быть использованы в качестве нормативных данных при проведении экспериментальных исследований, составлении учебных и справочных пособий, учебном процессе.

Предлагаемый комплекс морфофизиологических, биохимических и серологических исследований рекомендуется использовать для оценки практической эффективности и биологической безопасности ветеринарных биопрепаратов.

Полученные данные позволяют рекомендовать к использованию Montanide ISA 70 в качестве адъюванта при производстве инактивированных комбинированных вакцин для профилактики инфекционных болезней крупного рогатого скота.

20