новая папка 2 / 49948

3

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы. Одним из резервов повышения продуктивно-

сти жвачных животных является предотвращение экономического ущерба, причиняемого гельминтозами вследствие падежа и значительного снижения роста и развития молодняка, а также количества и качества продукции.

К числу широко распространенных заболеваний жвачных животных в России относится мониезиоз (В.Я. Шубадеров, 1972; М.Ш. Акбаев, 1986). По данным ряда исследователей зараженность овец и крупного рогатого скота Moniezia spp. в отдельных регионах страны достигает 80–100 % (В.А. Потемкина, 1965; М.И. Кузнецов, 1972; Р.А. Магомедов, 2002; А.Х. Цолоев, 2002; Е.Е. Белова, 2005). Мониезиоз причиняет большой экономический ущерб вследствие падежа овец, особенно ягнят при высокой степени зараженности, а также из-за снижения их продуктивности. По обобщенным данным Р.Т. Сафиуллина (1997) потери при мониезиозе овец составляют от снижения прироста массы тела 4,16 кг, настрига шерсти – 0,42 кг, а летальность достигает 7,1 %. Большой ущерб причиняют стронгилятозы пищеварительного тракта. От одной овцы недополучают в год 6 кг прироста массы тела и 0,32 кг шерсти, а летальность достигает 12 %. Между тем, нематодозы распространены повсеместно, особенно при пастбищной технологии содержания (А.В. Радионов, 2012).

Основным методом борьбы с мониезиозом жвачных до сих пор остается дегельминтизация, которую проводят согласно существующей Инструкции (1999) трехкратно: первый раз через 25-30 сут после выгона овец на пастбище, повторно – через 15-20 сут после первой и третий раз – через 25-30 сут после второй дегельминтизации. Для лечения и профилактики мониезиоза предложены фенасал и его лекарственные формы, альбендазол, сульфат меди и другие препараты (И.А. Архипов, М.Б. Мусаев, В.Е. Абрамов, 2004; И.А. Архипов, 2009). Однако фенасал в странах СНГ не производится. Применяемые лекарственные формы альбендазола не эффективны против неполовозрелых мониезий. Необходимо учитывать и то, что мониезиоз, особенно вызываемый Moniesia benedeni, и стронгилятозы пищеварительного тракта мелкого рогатого скота часто встречаются в форме смешанной инвазии. А несоблюдение зоогигиенических мероприятий еще более усугубляет течение болезни (Кочиш И.И., Калюжный Н.С., Волчкова Л.А., Нестеров В.В., 2008). В связи с этим был разработан комбинированный пре-

4

парат на основе фенасала и фенбендазола – вигисокс, полагая, что он будет более эффективным как против цестод, так и нематод.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение фармакотоксикологических свойств и эффективности нового отечественного антигельминтика вигисокса при основных гельминтозах овец.

Для выполнения поставленной задачи мы считали необходимым изучить:

-параметры острой пероральной и накожной токсичности вигисокса;

-раздражающее действие вигисокса на кожу и слизистые оболочки;

-субхроническую токсичность и кумулятивное действие вигисокса;

-эмбриотропные свойства и антимитотическое действие;

-эффективность вигисокса при основных гельминтозах овец;

-сроки выведения фенасала, фенбендазола и его метаболита у овец после дегельминтизации вигисоксом;

-влияние вигисокса на организм клинически здоровых овец.

Научная новизна. Впервые установлена высокая эффективность нового отечественного препарата вигисокс при мониезиозе, диктиокаулезе и же- лудочно-кишечных стронгилятозах овец. Дана фармакотоксикологическая характеристика вигисокса. Установлены параметры острой пероральной и накожной токсичности, субхронической токсичности. Показано, что препарат не обладает раздражающим, кумулятивным, эмбриотоксическим и тератогенным действиями. Вигисокс в терапевтической, 3 и 5 раз увеличенной дозах не оказывает отрицательного влияния на клинические, гематологические и биохимические показатели клинически здоровых овец. Изучена динамика выведения фенасала, фенбендазола и его метаболита - оксфендазола из организма овец и установлены сроки ожидания для возможного убоя и использования мяса в пищу после лечения животных вигисоксом.

Научная новизна работы подтверждена полученным Патентом на изобретение «Антигельминтное средство» № 2452489 от 10.06.2012 г.

Практическая значимость. Установлены терапевтические дозы вигисокса для рациональной фармакотерапии основных гельминтозов овец. Экспериментально обоснованы сроки убоя животных на мясо после дегельминтизации вигисоксом. На основании проведенных исследований по оценке фармакотоксикологических свойств вигисокса и обобщения полученных результатов разработана одобренная секцией «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 2,

5

23 мая 2013 г «Методика применения вигисокса при гельминтозах жвачных животных».

Основные положения, выносимые на защиту:

-параметры острой и субхронической токсичности и другие показатели фармакотоксикологических свойств вигисокса на лабораторных животных;

-результаты изучения эффективности комплексного антигельминтного препарата на основе фенасала и фенбендазола – вигисокса при основных гельминтозах овец, титрация терапевтической дозы;

-влияние вигисокса на организм овец;

-результаты изучения динамики выведения вигисокса из организма животных.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих научно-практических конференциях: Научная конференция Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы

спаразитарными болезнями» (г. Москва, 2012, 2013 гг.); II Международный конгресс ветеринарных фармакологов и токсикологов, г. С.-Петербург, 2012 г.; научная конференция, посвященная 90-летию М.И.Рабиновича, г. Троицк, 2012 г.; IV съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации», г. Москва, 2013 г.; секция «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, г. Москва, 2013 г., протокол № 2. Диссертационная работа утверждена на межкафедральном совещании по предварительной экспертизе диссертации в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, г. Москва, 2013 г.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена непосредственно аспирантом. Исследования по фармакотоксикологической оценке вигисокса выполнены автором самостоятельно. В работах, опубликованных в соавторстве с другими исследователями, 80 % работы выполнено диссертантом.

Публикации. По материалам исследований опубликовано 10 работ, из них 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам. Получен патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы по изучаемым вопросам и собственных исследований, состоящих из описания

6

материалов, а также результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, содержащего 87 отечественных и 101 иностранных источников. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 20 рисунками. Приложение на 7 страницах.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы

Научные исследования проведены в 2010-2013 гг. на базе кафедры фармакологии и токсикологии им. И.Е. Мозгова ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, хозяйствах Самарской области. Объект исследований – вигисокс, новый комплексный антигельминтный препарат на основе фенасала, фенбендазола и вспомогательных компонентов. Проведено 18 научно-производственных экспериментов (табл. 1). В экспериментальных исследованиях использовали 134 белые крысы, 20 белых мышей, 4 кролика, 490 овец. Выполнено 60 общеклинических, 84 гематологических, 84 биохимических, 936 гельминтологических исследований и гистологическое изучение 90 образцов плодов и внутренних органов крыс.

Таблица 1 – Перечень экспериментов

7

Продолжение таблицы 1

Токсикологические свойства вигисокса изучали в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005) и Правилами лабораторной практики в РФ (Приказ Министерства Здравоохранения Российской Федерации № 708н от 23.08.2010). Опыты на животных проводили согласно правил, принятых Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, ис-

8

пользуемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986) и Приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела, используя весы ВР-0,5 МС-3/0,5-БР, РФ. Необходимые навески препарата взвешивали на весах ВСЛ-60/0,1А, Россия. Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе «Swelab-970» (США). Биохимические показатели крови определяли на анализаторе «Clima MC-15» (Испания). Гистологические срезы внутренних органов готовили на микротоме «Microm HM325» (Германия)

иокрашивали гематоксилин-эозином. Микроскопические препараты исследовали под микроскопом «Prima star» (Швейцария) при увеличении 90 × 10. Влияние вигисокса на эмбриональное развитие крыс изучали согласно «Методическим рекомендациям по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств», утвержденных МинЗдравом РФ (1998). Состояние внутренних органов плодов изучали под стереомикроскопом МБС-2 на 9 сагитальных срезах, сделанных лезвием бритвы. Изучение сроков выведения действующих веществ вигисокса из организма овец проводили методом хроматографирования с использованием жидкостного хроматографа высокого давления WATERS с ультрафиолетовым детектором, обращеннофазовой колонки LUNA C18 (250×4,6 мм)

ипрограммы «Breeze». Эффективность препаратов учитывали по результатам количественных копроовоскопических исследований овец флотационным методом (Г.А. Котельников, 1984) и методом Бермана. Использовали счетную камеру ВИГИС для учета количества яиц мониезий в 1 г фекалий. Действие вигисокса на яйца мониезий изучали по методу Ф.А. Волкова (1975) на основании изучения морфологии и структуры яиц, а также по методу А.Х. Цолоева (2002) путем добавления на каплю с яйцами мониезий одной капли 5 %-го раствора йода.

Титрация терапевтической дозы вигисокса при мониезиозе овец. 44 овцы, спонтанно инвазированные мониезиями (по результатам предварительных исследований проб фекалий методом флотации) разделили по принципу пар аналогов на 4 подопытные и одну контрольную группы по 8–10 голов в каждой. Животные 1, 2 и 3-й подопытных групп получали индивидуально перорально комбинированный препарат в дозах соответственно 40, 50 и 60 мг/кг. Овцы четвертой подопытной группы получали базовый препарат – фенасал в дозе 60 мг/кг. Эффективность препаратов учитывали по результатам количе-

9

ственных копроовоскопических исследований овец всех групп флотационным методом до и через 10 сут после введения препаратов.

Титрация терапевтической дозы вигисокса при стронгилятозах пищеварительного тракта. Овцы 1, 2 и 3-й подопытных групп получали индивидуально перорально вигисокс в дозах соответственно 40, 50 и 60 мг/кг. Овцы 4-й группы получали базовый препарат фенбендазол в дозе 5 мг/кг. Животные пятой группы препарат не получали и служили контролем. Учет эффективности препаратов проводили как и при мониезиозе.

Эффективность вигисокса при диктиокаулезе овец. Животных разделили по принципу аналогов на 3 группы по 12 голов. Овцам первой группы назначали однократно перорально вигисокс в дозе 50 мг/кг. Животным второй группы задавали базовый препарат фенбендазол (субстанция) в дозе 5 мг/кг. Овцы третьей группы препарат не получали и служили контролем. Эффективность препаратов учитывали по результатам исследований проб фекалий овец всех групп методом Бермана до и через 18 суток после введения препаратов.

Эффективность вигисокса при трихоцефалезе овец. Овец разделяли на три подопытные группы и одну контрольную группу по 8 голов в каждой. Овцам первой, второй и третьей группы задавали вигисокс в дозах соответственно 60, 70 и 80 мг/кг. Животные третьей группы препарат не получали

ислужили контролем. Эффективность препарата оценивали по результатам количественных копроовоскопических исследований методом флотации до

ичерез 18 суток после введения препарата.

Действие антигельминтиков против мониезий разного возраста изучали на 30 овцах породы ставропольский меринос, спонтанно инвазированных Moniezia expansa по результатам предварительных исследований проб фекалий методом флотации. Овцам первой подопытной группы назначали вигисокс в дозе 60 мг/кг однократно перорально. Животным 2, 3, 4 и 5-й групп задавали однократно перорально соответственно празиквантел, фенбендазол, альбендазол и никлозамид в дозах соответственно 3,0; 10; 10 и 100 мг/кг. Овцы пятой группы препарат не получали и служили контролем. Эффективность препаратов методом флотации до и через 7 суток после введения препаратов. Для определения возраста мониезий учитывали их размер, а также наличие зрелых яиц с онкосферой в последних члениках стробилы.

10

Эффективность вигисокса против аноплоцефалят разных видов изучали в летне-осенний период 2012 г. на 42 овцах, спонтанно инвазированных M. expansa (16 гол.), M. benedeni (15 гол.) и Th. giardi (11 гол.). Вигисокс назначали овцам однократно перорально в дозе 60 мг/кг с концентрированным кормом. Учет эффективности препарата проводили через 7 суток после дегельминтизации путем исследования проб фекалий животных методом флотации.

Действие вигисокса на яйца мониезий изучали по морфологии и структуре яиц (Ф.А. Волков, 1975) , а также по методу А.Х. Цолоева (2002) путем добавления на каплю с яйцами мониезий одной капли 5 %-го раствора йода.

Влияние вигисокса на организм овец. Овцам 1, 2 и 3-й групп назначали вигисокс перорально индивидуально однократно в терапевтической, три и пять раз увеличенной дозах (60; 180 и 300 мг/кг). Овцы 4-й группы препарат не получали и служили контролем. Все исследования проводили за сутки до и через 1, 3 и 5 суток после дачи вигисокса. По общепринятым методикам изучали общее клиническое состояние животных и проводили гематологические и биохимические исследования.

Динамику выведения вигисокса из организма овец после введения вигисокса изучали совместно с к.ф.н. И.Е. Шумакович. Определение фенбендазола, его метаболита – оксфендазола и фенасала в органах и тканях овец проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Чувствительность метода 0,05 мкг/кг. Оптимальными параметрами хроматографирования остаточных количеств фенбендазола и его метаболита – оксфендазола из органов и тканей овец, были следующие: обращеннофазовая хроматографическая колонка LUNA C18 (250×4,6 мм) с диаметром сорбента 5 мкм; элюент: ацетонитрил/0,05 М раствор углекислого аммония в соотношении 40/60; скорость протекания элюента – 1 см3/мин; объем вводимой пробы - 50 мкл; спектр УФ-волны: 290 нм; время удерживания оксфендазола ~ 9 мин., фенбендазола ~ 23 мин. Оптимальные условия хроматографирования фенасала были достигнуты при следующих параметрах: обращеннофазовая хроматографическая колонка LUNA C18 (250×4,6 мм) с диаметром сорбента 5 мкм; элюент: ацетонитрил/дист. вода (рН 3,0-3,5); скорость протекания элюента - 1 см3/мин; объем вводимой пробы - 50 мкл; спектр УФ-волны: 340 нм; время удерживания фенасала: ~ 14,0 мин.

Комиссионное испытание вигисокса при смешанной инвазии овец. Вигисокс в дозе 60 мг/кг задавали овцам (30 голов) разного возраста, спон-