новая папка 2 / 47069
.pdf
Министерство сельского хозяйства РФ Федеральное государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования «Мичуринский государственный аграрный университет»
Кафедра биологии растений и селекции плодовых культур
УТВЕРЖДЕНО протокол № 6
методической комиссии Плодоовощного института от 21 января 2008г.
МЕТОДИЧЕСКОЕ УКАЗАНИЕ
по выполнению лабораторно-практического задания по дисциплине
«Физиология и биохимия сельскохозяйственных растений»
на тему:
«Влияние температуры и рН среды на активность фермента сахаразы » для студентов специальностей:
110202 – «Плодоводство и виноградарство»
110204 – «Селекция и генетика сельскохозяйственных культур»
110102 – «Агроэкология»
110201 – «Агрономия»
110302 – «Технология производства и переработки сельскохозяйственной продукции»
Мичуринск – наукоград РФ
2008
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
Методическое указание составлено профессором Ю.В. Крысановым, доцентом З.Н. Таровой, ассистентом В.И. Конюшенко на основании типовой учебной программы по дисциплине «Физиология растений», М.: МСХА, 2000 г.
Рецензент:
Р.В. Кузнецова, доцент кафедры химии
Методическое пособие рассмотрено на заседании кафедры биологии рас- тений и селекции плодовых культур.
Протокол № 5 от 28 декабря 2007г.
|
Содержание |
|
1. |
Введение ……………………………………………………. |
3 |
2. |
Ход работы …………………………………………………. |
3 |
3. |
Контрольные вопросы …………………………………….. |
5 |
©Издательство Мичуринского государственного аграрного университета, 2008
2
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Проследить влияние температуры и рН среды на гидролитическую активность фермента сахаразы, выделив его из пекарских дрожжей.
МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ: жидкость Фелинга, бюретки,
пробирки, ступки, пипетки, водяная баня, вата, воронки, прессованные пекар- ские дрожжи, 20% раствор сахарозы, карандаши по стеклу
Сахараза является ферментом, ускоряющим гидролитическое расщеп- ление сахарозы в растении на моносахара – глюкозу и фруктозу (инвертный са- хар).
С12Н22О11 + Н2О = С6Н12О6 + С6Н12О6
Сахароза Глюкоза Фруктоза
Оптимальная температура, при которой лучше всего проявляется актив- ность фермента сахаразы - + 40°С. Для активности фермента важна и реакция среды: кислая - активирует сахаразу, щелочная среда подавляет ее активность.
Скорость гидролиза раствора сахарозы при разных температурах и раз- ных значениях рН устанавливают по количеству капель инвертированного рас- твора, который расходуется на обесцвечивание реактива Фелинга, взятого для опытов в одинаковом количестве.
ХОД РАБОТЫ
I.Получение фермента сахаразы
10г пекарских дрожжей поместить в фарфоровую ступку, добавить 1г речного песка, 5мл воды и тщательно растереть. Затем добавить 15мл воды, на- греть до 40 0С, и продолжить растирание в течение I мин. Слить полученную жидкость в воронку с ватным фильтром и профильтровать в стеклянную кол- бочку. В водной вытяжке из дрожжей будет находиться фермент сахараза (ин- вертаза).
3
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
II.Изучение гидролитического действии фермента сахаразы
Для выполнения данной работы в соответствие с вариантами опыта (см.таб. №1 ) необходимо взять семь чистых пробирок, пронумеровать их и на- лить во все пробирки по 5мл раствора сахарозы. Затем в них добавить:
Пробирка № 1: 2 мл воды и 1 мл водной вытяжки из дрожжей, содержа- щей фермент сахаразу;
Пробирка № 2: 2 мл воды и 1 мл фильтрата (водной вытяжки) из дрож-
жей;
Пробирка № 3: 2 мл воды и 1 мл фильтрата, предварительно охлажденно- го в снегу в течение 10 минут;
Пробирка № 4: 2 мл воды и I мл вытяжки из дрожжей, предварительно прокипяченной в течение 3-5 мин;
Пробирка № 5: 1,5 мл воды, 1 мл водной вытяжки из дрожжей и 0,5 мл 3% уксусной кислоты для создания слабокислой среды (рН=5,0);
Пробирка № 6: 1 мл фильтрата и 2 мл 3% уксусной кислоты, для создания сильной кислотности среды (рН=3,5-4,0);
Пробирка № 7: 1 мл водной вытяжки из дрожжей и 2 мл 0,1н едкого на- тра для создания щелочной среды (рН 8,0);
Пробирку №1 оставить при комнатной температуре (18-20°С), пробирку №3 поместить немедленно в снег (0°С). Остальные (№ 2,3,4,5,6 и 7) выдержать в водяной бане с температурой 40°С в течение получаса.
Через 30 минут пробирки из водяной бани поставить в холодную воду для прекращения дальнейшего гидролиза сахарозы.
Затем взять семь чистых пробирок, пронумеровать их и налить во все пробирки по I мл реактива Фелинга и 1мл воды. Отдельно каждую пробирку нагреть до кипения и постепенно по каплям в горячий раствор внести инверти- рованный (гидролизованный) раствор сахарозы до полного обесцвечивания раствора Фелинга (от синего до кирпично-красного и коричневого). При этом учесть количество капель (в каждом варианте опыта), необходимое для восста- новления оксида меди (I) реактива Фелинга. Результаты записать в таблицу 1.
Сделать вывод о зависимости активности фермента сахараза от темпера- туры и рН среды.
4
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
1.Схема и результаты опыта
Вари |
20 |
Во- |
Фер- |
30% |
0,1н |
Темпе- |
рН |
Кол-во |
Окра- |
Вы- |
ант |
% |
да, |
мент, мл |
укс. |
р-р |
ратура |
р-ра |
капель |
ска |
воды |
|
р-р |
мл |
|
к-та |
NaO |
Опы- |
|
|
|
|
опы- |
са- |
|
|
|
H |
та,0С |
|
|
|
|
та |
ха- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ро- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
зы, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
мл |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
5 |
2 |
1 |
- |
- |
18 |
7 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
5 |
2 |
1 |
- |
- |
40-45 |
7 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
5 |
2 |
1(охлаж |
- |
- |
0 |
7 |
|
|
|
|
|
|
д.) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
4 |
5 |
2 |
1(кипяч. |
- |
- |
40-45 |
7 |
|
|
|
|
|
|
) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
5 |
1,5 |
1 |
0,5 |
- |
40-45 |
5 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
5 |
- |
1 |
2 |
- |
40-45 |
4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
7 |
5 |
- |
1 |
- |
2 |
40-45 |
8 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1.К какому классу ферментов относится сахараза?
2.Что является носителем фермента в Ваших опытах?
3.Чем объяснить изменение действия фермента при разных температу- рах и разной рН среды?
5
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
ЛИТЕРАТУРА:
1.Третьяков Н.Н., Лосева А.С. и др. – Физиология и биохимия сельскохо- зяйственных растений (под общей редакцией Третьякова Н.Н.). -М.: Ко-
лос, 2000 г.
2.Практикум по физиологии растений (под редакцией члена- корреспондента РАСХН, профессора Н.Н. Третьякова).- Москва, «Колос С», 2003 г.
6
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
Технический редактор – М.Е. Кабанова Отпечатано в издательско-полиграфическом центре МичГАУ
Подписано в печать 5.02.08 г. Формат 60х84 1/ 16, Бумага офсетная № 1. Усл.печ.л. 0,34 Тираж 55 экз. Ризограф
Заказ №
_______________________________________________________________
Издательско-полиграфический центр
Мичуринского государственного аграрного университета 393760, Тамбовская обл., г. Мичуринск, ул. Интернациональная, 101,
тел. +7 (47545) 5-55-12 E-mail: vvdem@mgau.ru
7
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
8
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com