личные / 04_Энтеробактерии_Вибрионы
.pdf
•После инкубации посевы просматривают в проходящем свете. При отсутствии роста на щелочном агаре дается отрицательный ответ в отношении нахождения возбудителя холеры в исследуемом материале.
•На среде Эндо отмечается наличие колоний малиново-красных, ферментирующих лактозу, входящую в состав среды и бесцветных – не ферментирующих лактозу.
Нормальная флора |
Патогенная флора |
•Бесцветные (подозрительные) колонии высевают на среду Ресселя (МПА, 1% лактозы, 1% глюкозы и индикатор Андреде) и инкубируют 24 часа при 37˚С.
•Одновременно для изучения протеолитической активности культуры лактозо-негативные колонии высевают в пробирку с МПА с индикаторными бумажками, пропитанными ацетатом свинца и щавелевой кислотой для определения образования сероводорода и индола и инкубируют 24 часа при 37˚С.
•При оценке роста бактерий на среде Ресселя учитывают, что при ферментации ими углеводов происходит изменение цвета среды. Разрывы столбиков свидетельствуют о газообразовании.
Изменение цвета всей среды наблюдается при ферментации лактозы, а только столбика Ресселя – при ферментации глюкозы.
•Культуру, расщепляющую только глюкозу подвергают дальнейшему изучению: делают мазки, окрашивают по Граму, изучают морфологию.
•При наличии в мазках Грам (-) палочек, расположенных беспорядочно, проводится серологическая идентификация, т.к. энтеробактерии морфологически идентичны, но отличаются по биохимическим свойствам и антигенной структуре.
Для сероидентификации выделенной культуры проводят РА на стекле с иммунными сыворотками:
•поливалентной эшерихиозной ОВ-сывороткой
•поливалентной сальмонеллезной О-сывороткой
•поливалентной шигеллезной сывороткой При положительной РА на стекле с одной из поливалентных
сывороток делается заключение о родовой принадлежности выделенной чистой культуры.
Допустим, что чистая культура агглютинируется на стекле с поливалентной сальмонеллезной сывороткой. Следовательно, данная культура относится к роду Salmonella
•Установив принадлежность чистой культуры к определенному роду, изучают ее в РА с О- и Н- монорецепторными агглютинирующими сыворотками для определения вида.
•Сначала ставят реакцию агглютинации отдельно с каждой О-сывороткой, входившей в смесь, чтобы установить серологическую группу.
•Определив групповую принадлежность культуры, ставят реакцию агглютинации с видовыми Н- сыворотками и, таким образом, определяют вид выделенной культуры сальмонелл.
Культура дала положительную реакцию агглютинации с сывороткой, рецептор «4» содержащей антитело к соматическому антигену сальмонелл 4. Следовательно, согласно схеме культура относится к серогруппе В.
Культура дала положительную реакцию с H-сыворотка «i» содержащей антитело к жгутиковому антигену «i» (см. схему Кауфмана–Уайта), следовательно она относится к серовару –
Salmonella typhimurium.
Бактериологическое исследование при сальмонеллезах тифо-паратифозной группы
•1-й день. Посев исследуемого материала (кровь 5-10 мл) на среду накопления (Раппопорта). Инкубация при 37˚С 24 часа.
•2-й день. Если вырастут сальмонеллы, среда помутнеет, если вырастут паратифозные палочки – среда покраснеет и всплывет поплавок.
•2-й день. Делают пересев со среды накопления в чашки Петри на среду Эндо (Плоскирева, Левина) для получения колоний.
•3-й день. Вырастают небольшие бесцветные колонии. Делают пересев их на среду Ресселя для получения чистой культуры.
•4-й день. Столбик агара посинеет, скошенный агар не изменит окраску.