Таблица реакций

Сероиндикация – это обнаружение АГ возбудителя в исследуемом материале с помощью известных АТ(диагностических сывороток)

Реакция

Цель

Где ставится

Компоненты реакции

Ход реакции

Учет

Интерпретация

Применение

1. РПГА

Сероиндикация

На стекле

1. Исследуемый материал

2. Суспензионные АТ

3. Электролит

Добавить к исследуемому материалу суспензионные АТ, перемешать, инкубировать.

Визуальный

При «+» реакции – красные хлопья

При «-» реакции – хлопьев нет

Диагностики заболеваний, вызванных бактериями: бруцеллез, туляремия, брюшной тиф и паратиф, бациллярная дизентерия, сыпной тиф, дизентерия, чума, холера, простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, краснуха, эпидемический паротит, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), стафилококковые энтеротоксины.

Определения группы крови и резус-фактора, определения беременности, а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например, пенициллину и инсулину.

2. Латекс-агглютинация

Сероиндикация

Сероидентификация

Серодиагностика

Стеклянные, полистироловые пластинки

1. Исследуемый материал/ чистая культура/ сыворотка крови больного

2. АТ, адсорбированные на микросферах латекса/ АГ, адсорбированные на поверхности латекса

3. Электролит

К исследуемому материалу 50 мкл добавляют латекс-препарат, сенсибилизированный АТ/АГ 10 мкл. Перемешивают чистым аппликатором. Помещают пластинки на вращающийся столик или в шуттель-аппарат на 3…5 мин, после чего производят регистрацию результатов реакции.

Обязательно использование контролей.

Визуальный

Результат реакции оценивают по трехбалльной системе:

«++++» — четкая агглютинация, крупные хлопья в прозрачной жидкости;

«++» — четкая видимая агглютинация диагностикума, однако фон полностью не просветляется;

«-» — жидкость остается гомогенно-мутной (отрицательная реакция).

Применять промежуточные оценки интенсивности реакции («+++», «+») нецелесообразно, так как они достаточно субъективны.

3. Реакция коагглютинации

Сероиндикация

Сероидентификация

Предметное стекло

1. Исследуемый материал/чистая культура

2. АТ, адсорбированные на клетках стафилококка

3. Электролит

Жидкий реактив стафилококков необходимо тщательно встряхнуть. На предметное стекло помещают каплю Ко-сыворотки и с помощью бактериологической петли вносят часть исследуемой колонии, предварительно тщательно растерев ее в капле физиологического раствора рядом с каплей сыворотки, а затем смешивают с ней до получения гомогенной взвеси.

При наличии в исследуемой культуре искомого возбудителя через 1…3 мин наступает положительная реакция коагглютинации: просветление жидкости с образованием хлопьев. Учет результатов реакции следует проводить на темном фоне. Обязательно использование контролей.

Визуальный на темном фоне

«++++» — все стафилококки агглютинированы и легко скатываются к краю капли при наклоне стекла, при этом остальная часть полностью просветлена;

«+++» — агглютинация большей части стафилококков, частичное просветление капли;

«++» — на фоне слабо просветленной взвеси четко виден агглютинат;

«+» — агглютинация слабо выражена; мелкие легкие хлопья (отрицательный результат);

«—» — взвесь гомогенна, сходна с отрицательным контролем.

За положительную учитывают реакцию не менее чем на «++».

4,1. РП в геле. Простая диффузия

Сероидентификация

Чашки Петри

1. Исследуемый материал (чистая культура)

2. Преципитирующая сыворотка

3. 1%-ый агар, приготовленный на физ р-ре

Один из компонентов реакции (иммунная сыворотка) смешивают с агаром, а другой компонент – антиген помещают в лунку. Инкубируют. При положительном результате (антиген соответствует антителу) вокруг лунки образуется кольцо преципитата.

Визуальный

Появление кольца вокруг лунки говорит и соответствии АГ и АТ – реакция положительная.

4,2. РП в геле. Двойная диффузия

Сероидентификация

Чашки Петри

1. Исследуемый материал (чистая культура)

2. Преципитирующая сыворотка

3. 1%-ый агар, приготовленный на физ р-ре

Готовят агаровый гель, которым заливают чашки Петри. После застывания в нем вырезают лунки, в которые добавляют компоненты реакции. Каждый компонент в отдельную лунку. Инкубируют. При положительном результате (антиген соответствует антителу) на месте встрече антитела и антигена образуются линии преципитации.

Визуальный

Появление линий преципитации говорит о положительной реакции.

6,1. ИФА прямой метод

Сероиндикация

Лунки планшета

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Рисунок

ИФА анализатор

Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний: IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С; IgG к ВИЧ;

Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;

к вирусу Эпштейна-Барр;

к герпетическим инфекциям;

к токсоплазмозу;

к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;

IgG к паразитарным заболеваниям;

Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем; IgG к хеликобактерной инфекции.

Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и др). Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

6,2. ИФА непрямой метод

Сероиндикация

Лунки планшета

Рисунок

ИФА анализатор

6,3. ИФА непрямой метод

Серодиагностика

Лунки планшета

Рисунок

ИФА анализатор

5,1. РИФ прямой метод

Сероиндикация

Предметное стекло

1. Исследуемый материал

2. АТ, меченые флюорохромом

На фиксированный препарат наносят флуоресцирующую сыворотку к предполагаемому вирусу, выдерживают 30 мин при температуре 37 °С во влажной камере. Затем препарат отмывают от несвязанного конъюгата физиологическим раствором (pH 7,2 — 7,5), подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под микроскопом.

В качестве флуорохрома наиболее часто используют ФИТЦ-флуоресцеин изотиоционат (зеленое свечение) и РСХ-родамин сульфохлорид (красное свечение). Обязательно использование контроля.

Люминисцентный микроскоп

Бактерии в мазке, обработанные люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

5,2. РИФ непрямой метод

Сероиндикация

Серодиагностика

Предметное стекло

1. Исследуемый материал/ сыворотка крови больного

2. АТ, меченые

3. Антиглобулиновая сыворотка (АТ против АТ)

Мазки из взвеси микробов обрабатывают АТ антимикробной кроличьей диагностической сыворотки, выдерживают 30 мин при 37 °С, отмывают несвязанные АТ, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. Затем препарат отмывают от несвязанных меченых антител, подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под люминесцентным микроскопом.

В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Требует несколько контролей.

Люминисцентный микроскоп

Бактерии в мазке, обработанные люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Сероиндификация – это определение антигенных свойств выделенной чистой кульуры с помощью известных АТ(диагностических сывороток) Проводится на 3 этапе бактериологического метода.

Реакция

Цель

Где ставится

Компоненты реакции

Ход реакции

Учет

Интерпретация

Применение

1. РА ориентировочная, простая

Сероидентификация

Серодиагностика

На плоскости

1. Исследуемый материал (чистая культура)

2. Агглютинирующая диагностическая сыворотка

3. Электролит

На обезжиренное предметное стекло наносят раздельно каплю известной агглютинирующей сыворотки, например, сальмонелиозной, и каплю физиологического раствора (контроль). Затем бактериологической петлей берут бактериальную массу изучаемой культуры из колонии в чашке Петри или с поверхности скошенного МПА в пробирке и суспендируют раздельно в иммунной сыворотке и физиологическом растворе до получения гомогенной взвеси. Результат учитывают через 2…4 мин.

Визуальный

В контрольной пробе изменения должны отсутствовать. При специфическом соответствии культуры бактерий иммунной сыворотке появляются хлопья агглютината (положительный результат).

Диагностики заболеваний, вызванных бактериями: бруцеллез, туляремия, брюшной тиф и паратиф, бациллярная дизентерия, сыпной тиф, дизентерия, чума, холера, простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, краснуха, эпидемический паротит, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), стафилококковые энтеротоксины.

Определения группы крови и резус-фактора, определения беременности, а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например, пенициллину и инсулину.

1.1. РА развернутая

Серодиагностика

Сероидентификация

В пробирках

1. Сыворотка крови больного (раститрованная)

2. Корпускулярный диагностиум

3. Электролит

К разведениям сыворотки крови больного (последовательное двукратное) добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов) и через несколько часов инкубации при 37 °С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.

Титром сыворотки является максимальное ее разведение, дающее 50% агглютинации, - просветление, оцениваемое на 2+.

Визуальный

На темном фоне

В проходящем свете

По системе 4+

++++ все клетки осели на дно пробирки, надосадочная жидкость прозрачная. Реакция резко положительная.

+++ осадок меньше, нет полного просветления надосадочной жидкости.

++ осадок еще меньше, надосадочная жидкость мутная

+ незначительный осадок, жидкость мутная, реакция сомнительная

- осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле АГ. Реакция отрицательная.

2. РП в геле. Простая диффузия

Сероидентификация

Чашки Петри

1. Исследуемый материал (чистая культура)

2. Преципитирующая сыворотка

3. 1%-ый агар, приготовленный на физ р-ре

Один из компонентов реакции (иммунная сыворотка) смешивают с агаром, а другой компонент – антиген помещают в лунку. Инкубируют. При положительном результате (антиген соответствует антителу) вокруг лунки образуется кольцо преципитата.

Визуальный

Появление кольца вокруг лунки говорит и соответствии АГ и АТ – реакция положительная.

Применяют для обнаружения неизвестного антигена при ряде инфекционных заболеваний: при сибирской язве, туляремии, менингите, оспе. Для диагностики дифтерии. Определения токсигенности бактерий, например, дифтерийных.

В судебной медицине ее используют для определения видовой принадлежности крови, спермы; в санитарно-гигиенических исследованиях – для установления фальсификации пищевых продуктов.

2.2 РП в геле. Двойная диффузия

Сероидентификация

Чашки Петри

1. Исследуемый материал (чистая культура)

2. Преципитирующая сыворотка

3. 1%-ый агар, приготовленный на физ р-ре

Готовят агаровый гель, которым заливают чашки Петри. После застывания в нем вырезают лунки, в которые добавляют компоненты реакции. Каждый компонент в отдельную лунку. Инкубируют. При положительном результате (антиген соответствует антителу) на месте встрече антитела и антигена образуются линии преципитации.

Визуальный

Появление линий преципитации говорит о положительной реакции.

3. Латекс-агглютинация

Сероиндикация

Сероидентификация

Серодиагностика

Стеклянные, полистироловые пластинки

1. Исследуемый материал/ чистая культура/ сыворотка крови больного

2. АТ, адсорбированные на микросферах латекса/ АГ, адсорбированные на поверхности латекса

3. Электролит

К исследуемому материалу 50 мкл добавляют латекс-препарат, сенсибилизированный АТ/АГ 10 мкл. Перемешивают чистым аппликатором. Помещают пластинки на вращающийся столик или в шуттель-аппарат на 3…5 мин, после чего производят регистрацию результатов реакции.

Обязательно использование контролей.

Визуальный

Результат реакции оценивают по трехбалльной системе:

«++++» — четкая агглютинация, крупные хлопья в прозрачной жидкости;

«++» — четкая видимая агглютинация диагностикума, однако фон полностью не просветляется;

«-» — жидкость остается гомогенно-мутной (отрицательная реакция).

Применять промежуточные оценки интенсивности реакции («+++», «+») нецелесообразно, так как они достаточно субъективны.

Диагностики заболеваний, вызванных бактериями: бруцеллез, туляремия, брюшной тиф и паратиф, бациллярная дизентерия, сыпной тиф, дизентерия, чума, холера, простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, краснуха, эпидемический паротит, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), стафилококковые энтеротоксины.

Определения группы крови и резус-фактора, определения беременности, а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например, пенициллину и инсулину.

Серодиагностика – это обнаружение АТ к возбудителю в сыворотке крови с помощью известных АГ(диагностикумов)

Реакция

Цель

Где ставится

Компоненты реакции

Ход реакции

Учет

Интерпретация

Применение

1. РПГА

Серодиагностика

Лунки планшета

1. Сыворотка крови больного (раститрованная)

2. Эритроцитарный диагностикум

3. Электролит

К последовательным 2-кратным разведениям сыворотки добавляют равные дозы эритроцитов, сенсибилизированных антигеном.

Смесь оставляют на 2-3 ч при комнатной температуре или на 16-18 ч при 4 °С.

Учитывают результаты.

Если в сыворотке содержатся антитела к вирусу, которым были сенсибилизированы эритроциты, наблюдают гемагглютинацию, которую оценивают в крестах.

За титр антител в сыворотке принимают наивысшее разведение сыворотки, которое еще обеспечивает гемагглютинацию не менее чем на два креста.

Визуальный

4+ - эритроциты покрывают все дно лунки равномерным слоем, иногда наблюдается зонтик.

3+ - эритроциты выстилают все дно лунки тонким равномерным слоем, но площадь его меньше, чем при 4-крестовой реакции, размеры зонтика также меньше.

2+ - агглютинат небольшой, расположен в центре лунки.

1+ - вокруг осадка эритроцитов в центре виден небольшой агглютинат.

Отрицательная реакция - осадок эритроцитов на дне лунки в виде пуговки или маленького кольца.

2.1. РА ориентировочная, простая

Сероидентификация

Серодиагностика

На плоскости

1. Исследуемый материал (чистая культура)

2. Агглютинирующая диагностическая сыворотка

3. Электролит

На обезжиренное предметное стекло наносят раздельно каплю известной агглютинирующей сыворотки, например, сальмонелиозной, и каплю физиологического раствора (контроль). Затем бактериологической петлей берут бактериальную массу изучаемой культуры из колонии в чашке Петри или с поверхности скошенного МПА в пробирке и суспендируют раздельно в иммунной сыворотке и физиологическом растворе до получения гомогенной взвеси. Результат учитывают через 2…4 мин.

Визуальный

В контрольной пробе изменения должны отсутствовать. При специфическом соответствии культуры бактерий иммунной сыворотке появляются хлопья агглютината (положительный результат).

Диагностики заболеваний, вызванных бактериями: бруцеллез, туляремия, брюшной тиф и паратиф, бациллярная дизентерия, сыпной тиф, дизентерия, чума, холера, простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, краснуха, эпидемический паротит, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), стафилококковые энтеротоксины.

Определения группы крови и резус-фактора, определения беременности, а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например, пенициллину и инсулину

2.2. РА развернутая

Серодиагностика

Сероидентификация

В пробирках

1. Сыворотка крови больного (раститрованная)

2. Корпускулярный диагностиум

3. Электролит

К разведениям сыворотки крови больного (последовательное двукратное) добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов) и через несколько часов инкубации при 37 °С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.

Титром сыворотки является максимальное ее разведение, дающее 50% агглютинации, - просветление, оцениваемое на 2+.

Визуальный

На темном фоне

В проходящем свете

По системе 4+

++++ все клетки осели на дно пробирки, надосадочная жидкость прозрачная. Реакция резко положительная.

+++ осадок меньше, нет полного просветления надосадочной жидкости.

++ осадок еще меньше, надосадочная жидкость мутная

+ незначительный осадок, жидкость мутная, реакция сомнительная

- осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле АГ. Реакция отрицательная.

3.РСК

4. РИФ непрямой метод

Сероиндикация

Серодиагностика

Предметное стекло

1. Исследуемый материал/ сыворотка крови больного

2. АТ, меченые

3. Антиглобулиновая сыворотка (АТ против АТ)

Мазки из взвеси микробов обрабатывают АТ антимикробной кроличьей диагностической сыворотки, выдерживают 30 мин при 37 °С, отмывают несвязанные АТ, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. Затем препарат отмывают от несвязанных меченых антител, подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под люминесцентным микроскопом.

В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Требует несколько контролей.

Люминисцентный микроскоп

Бактерии в мазке, обработанные люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

В настоящее время РИФ широко применяют в диагностике вирусных болезней животных.

Метод имеет решающее значение в ранней диагностике и лечении онкологических заболеваний (иммуногистохимия, онкогематология), диагностике инфекционных заболеваний (например определение CD4+ клеток при ВИЧ) и наследственных синдромов.

5.1. ИФА прямой метод

Сероиндикация

Лунки планшета

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Рисунок

ИФА анализатор

Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний: IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С; IgG к ВИЧ;

Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;

к вирусу Эпштейна-Барр;

к герпетическим инфекциям;

к токсоплазмозу;

к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;

IgG к паразитарным заболеваниям;

Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем; IgG к хеликобактерной инфекции.

Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и др). Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

5.2. ИФА непрямой метод

Сероиндикация

Лунки планшета

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Рисунок

ИФА анализатор

5.3. ИФА непрямой метод

Серодиагностика

Лунки планшета

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Рисунок

ИФА анализатор

6. Иммуноблоттинг

Метод идентификации антигенов или антител.

Электрофорез+ИФА

Заполнить самим