ЗАНЯТИЕ 21

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ, ДИЗЕНТЕРИИ, ЭШЕРИХИОЗОВ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ (ГАСТРОЭНТЕРИТОВ) И ИНФЕКЦИЙ СВЯЗАННЫХ С ОКАЗАНИЕС МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ (ИСМП) САЛЬМОНЕЛЛЁЗНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Работа студента на практическом занятии

1. Продолжение исследования на гемокультуру. Отберите изолированную лактозоотрицательную колонию на среде Эндо и пересейте её на среду Олькеницкого (демонстрация). Запишите в рабочую тетрадь проделанную работу.

2. Продолжение исследования на копрокультуру. Учтите результат посева на среду Олькеницкого: сбраживание лактозы, глюкозы, газообразование, сероводород. Поставьте реакцию агглютинации на стекле выросшей культуры с монорецепторными сыворотками. Сформулируйте ответ. Опишите результаты проделанной работы в графе «Ход исследования», а окончательный ответ – в графе «Результат». Изучите демонстрационный набор агглютинирующих сывороток.

3. По таблицам разберите схему исследования при пищевой токсикоинфекциисальмонеллёзной этиологии.

4. Продолжение исследования на бактериальную дизентерию. Изучите колонии, выросшие на среде Плоскирева, отберите изолированную лактозонегативную колонию и проведите реакцию агглютинации на стекле с сыворотками Флекснер и Зонне. Запишите в рабочую тетрадь проделанную работу, а в графе «Результат» - предварительный результат, в графе «Примечания» - что необходимо сделать для получения окончательного ответа.

5. Продолжение исследования на коли–инфекцию. Изучите колонии, выросшие на среде Эндо. Отберите изолированные лактозоположительные колонии, поставьте реакцию агглютинации на стекле с комплексной сывороткой материала из нескольких колоний до положительного результата (до 10 колоний). Колонию, давшую положительный результат, пересейте на скошенный агар. Запишите в рабочую тетрадь проделанную работу. Изучите демонстрационные препараты агглютинирующих сывороток для диагностики коли–инфекции.

6. Изучите ферментативные свойства энтеробактерий по демонстрационным микротест-системам для биохимической идентификации энтеробактерий.

Контрольные вопросы

Как используется реакция агглютинации для определения вида микроба?

Реакция агглютинации - склеивание бактерий под влиянием спе­цифических антител. Реакция протекает в две фазы. В первой фазе происходит специфическое присоединение антител к поверхности клет­ки, во второй - образование хлопьев в присутствии электролита (хло­рида натрия). Видимая реакция происходит в том случае, если антите­ла имеют два активных центра, к каждому их них присоединяется анти­ген, и в результате образуется "решетка".

Методы постановки реакции агглютинации:

1) развернутая реакция агглютинации ставится в пробирках с пос­ледовательными разведениями сыворотки;

2) реакция агглютинации на предметном стекле в капле сыворотки, разведенной 1:5 - 1:10; наступает в течение нескольких минут.

Для определения антигенной структуры микробов, выделенных из организма пациента, используют агглютинирующую сыворотку, полу­ченную из крови животного (кролика, барана), иммунизированного этими микробами. Титром диагностической агглютинирующей сыво­ротки называется наибольшее ее разведение, которое вызывает агг­лютинацию.

Если агглютинирующая сыворотка содержит антитела против Н-антигена, то подвижные бактерии склеиваются своими жгутиками, об­разуются рыхлые хлопья. Это крупнохлопчатая агглютинация, нас­тупающая быстро - в течение двух часов.

Что такое монорецепторные сыворотки и как их получают? Как производится идентификация сальмонелл по антигенной структуре с помощью монорецепторных сывороток?

Монорецепторной агглютинирующей сывороткой называется сыворотка, содержащая антитело (рецептор) по отношению к одному антигену. О-сыворотка, рецептор «4» содержит антитело к соматическому антигену сальмонелл 4; H-сыворотка «в» содержит антитело к жгутиковому антигену «в» (см. схему Кауфмана–Уайта).

Агглютинирующие сыворотки, полученные путем иммунизации жи­вотных микробами, могут содержать антитела против родственных микробов, то есть являются поливалентными. Для повышения специ­фичности сывороток из них удаляют групповые антитела методом ад­сорбции по Кастелляни, с помощью групповых антигенов. Получен­ные сыворотки называют адсорбированными. Оставляя антитела толь­ко к одному антигену, получают монорецепторные сыворотки. С таки­ми сыворотками ставят реакцию агглютинации на стекле, которая в этом случае является окончательной, а не ориентировочной.

Для идентификации культуры сначала ставят реакцию агглютинации на стекле со смесью нескольких О-сывороток и при положительном результате агглютинации устанавливают принадлежность культуры к роду сальмонелл. После этого ставят реакцию агглютинации отдельно с каждой О-сывороткой, входившей в смесь, чтобы установить серологическую группу. Определив групповую принадлежность культуры, ставят реакцию агглютинации с видовыми Н-сыворотками и, таким образом, определяют вид выделенной культуры сальмонелл.

Как и с какой целью проводят фаготипирование брюшнотифозных палочек?

Фаготипирование - это определение принадлежности выделенного бактериального штамма к тому или иному фаготипу. Фаготип - это совокупность бактериальных штаммов, характеризующихся одинаковой чувствительностью к типовому набору бактериофагов. Бактериофаг - это вирус, способный инфицировать бактериальную клетку, репродуцироваться в ней и вызывать ее лизис. Фаготипирование применяется, как правило, в интересах эпидемиологического анализа - это сопоставление эпидемиологических, клинических, лабораторных и других данных применительно к определенной инфекционной болезни с целью установления причин ее распространения, определения характера и масштабов необходимых противоэпидемических мер.

Фаготипирование проводится по следующей методике. На чашки Петри засевают шпателем взвеси исследуемых культур. На засеянную поверхность агара пипетками наносят аккуратными каплями индикаторные бактериофаги различных типов. Места нанесения фагов маркируют на дне чашки. Пипетки и шпатель помещают в стакан с дезраствором. Посевы помещают в термостат на 24 часа. Через сутки учитывают результат. На поверхности выросших исследуемых культур определяют зоны лизиса бактерий соответствующим типом фага. Сравнивают фаготипы культур, выделенных из разных источников.

В данном случаев даны две культуры: выделенная от больного и из водного источника. На чашках видно, что лизис культур происходит при действии одного и того же вида фага Д5. Фаготип обеих выделенных культур - Д5, значит, выделенные культуры микроорганизмов идентичны по фаготипу больной мог заразиться при употреблении инфицированной воды.