Материалы 5 семестр / Раздел 2_Лейкопоэз / Занятие 4 / Занятие 4_ВК_Лейкопоэз _ДО

ТЕМА 4. Защитная функция крови. Физиология лейкопоэза. характеристика функций лейкоцитов, лейкоцитозы, лейкопении. Методики подсчета лейкоцитов и оценка мазка крови.

Теоретическая часть

Физиология лейкоцитов

Лейкоциты – ядросодержащие клетки крови, размеры которых от 4 до 20 мкм. Продолжительность их жизни сильно варьируется и составляет от 4–5 до 20 дней для гранулоцитов и до 100 дней для лимфоцитов.

Количество лейкоцитов в норме у мужчин и женщин одинаково и составляет 4–9 на 10⁹/л. Однако уровень клеток в крови непостоянен и подвержен суточными и сезонным колебаниям в соответствии с изменением интенсивности обменных процессов.

Функции лейкоцитов:

1. Защитная – бактерицидным и антитоксическим действием агранулоцитов, участием в процессах свертывания крови и фибринолиза

2. Деструктивная - фагоцитоз

3. Регенеративная – способствуют заживлению ран через воспаление.

4. Ферментативная.

Лейкоцитоз

Повышение количества лейкоцитов в крови более 9∙10⁹/л

Причины – инфекционные, вирусные, бактериальные, воспалительные заболевания.

Лейкоз – резко выраженная пролиферация гранулоцитов в костном мозге и высокие цифры лейкоцитоза в крови.

Лейкопения

Снижение общего числа лейкоцитов менее 4∙10⁹/л

Причины:

-угнетение функций костного мозга

-под влиянием рентгеновского излучения или токсических веществ

Лейкоциты делятся на две группы: гранулоциты (зернистые) и агранулоциты.

Развитие гранулоцитов (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы)

1. Митотическая группа (делящиеся клетки):

миелобласт (Млб)

промиелоцит (Промлц)

миелоцит (Млц)

2. Созревающие и зрелые гранулоциты:

метамиелоцит (Ю)

палочкоядерный (П/я) - функционально зрелая клетка, но морфологически незрелая клетка

сегментоядерный нейтрофил (С/я) – зрелая клетка.

Лимфопоэз (агранулоциты)

1. бласты,

2. пролимфоциты,

3. морфологически зрелые, после

бласттрансформации пролимфоциты,

4. функционально зрелые плазмоциты

и Т-лимфоциты

Моноцитарно-макрофагальный росток (агранулоциты)

Монобласт

Промоноцит

Моноцит (зрелая клетка)

Периферическая кровь

Среди гранулоцитов в периферической крови встречаются:

1) нейтрофилы – 47–72 %;

2) эозинофилы – 0–5 %;

3) базофилы – 0–1 %.

В группе незернистых клеток выделяют:

1) моноциты – 3—11 %;

2) лимфоциты – 19–38 %.

Процентное содержание лейкоцитов в периферической крови называется лейкоцитарной формулой, сдвиги которой в разные стороны свидетельствуют о патологических процессах, протекающих в организме.

Методы оценки лейкопоэза

1. Общее количество лейкоцитов (WBC) – подсчет в камере Горяева, на геманализаторе. Норма 4–9 на 10⁹/л.

2. Подсчет лейкоцитарной формулы – определение относительного содержания клеток (%).

3. Расчет абсолютного числа клеток (×10⁹/л).

4. Расчет индекса сдвига ядра (ИСЯ).

Морфология зрелых клеток

Нейтрофильные гранулоциты 

сегментоядерный нейтрофил (1) (47-72 % от всех лейкоцитов). Ядро состоит из нескольких (обычно 3-4) связанных друг с другом сегментов. В цитоплазме - трудно различимая мелкая зернистость. Её образуют гранулы двух видов:	б-I)
специфические (нейтрофильные, фиолетово-розового цвета), содержащие антибактериальные вещества, и неспецифические (производные лизосом). Нейтрофилы являются микрофагами: убивают и затем фагоцитируют микроорганизмы.

палочкоядерный нейтрофил (1) (1-6% от всех лейкоцитов). В отличие от предыдущего случая, ядро ещё не сегментировано, а имеет форму изогнутой палочки. Зернистость в цитоплазме - по внешнему виду такая же, как в сегментоядерном нейтрофиле.

б-II)

базофильный гранулоцит (1) (0-0,5% от всех лейкоцитов). В цитоплазме - гранулы крупные базофильные (фиолетово-вишнёвого цвета), содержащие	в)
медиатор воспаления гистамин и противосвёртывающее в-во гепарин. Благодаря этому, базофилы способствуют развитию воспалительных и аллергических реакций. Сквозь гранулы с трудом просматривается ядро. Оно обычно имеет слабодольчатую структуру, но разглядеть последнюю не всегда удаётся.

эозинофильный гранулоцит(0-5% от всех лейкоцитов). Его ядро обычно состоит из двух сегментов. В цитоплазме специфические оксифильные, окрашенные эозином в розовый цвет.	г)
эозинофилы обладают двумя видами активности: антигистаминной   и также противопаразитарной

лимфоцит (19-38 % от всех лейкоцитов). Он имеет небольшие размеры, крупное ядро, занимающее основную часть клетки, узкий ободок базофильной цитоплазмы.	д)

моноцит (3-11% от всех лейкоцитов): они более, чем вдвое, крупнее окружающих эритроцитов; ядро - бобовидное, а цитоплазма дымчатая имеет вид светлого широкого ободка.

е)

Методика подсчета количества лейкоцитов в камере Горяева.

Оснащение: камера Горяева, капилляр на 0,02 мл крови, покровное стекло, линза микроскопа (× 8), пробирка, 3% раствор уксусной кислоты с метиленовым синим (раствор Тюрка), тигель, резиновая груша, резиновые перчатки.

Методика работы. В пробирку набрать 0,4 мл раствора Тюрка, добавить 0,02 мл крови (разведение в 20 раз), перемешать. Оставить на 5 минут (уксусная кислота растворяет оболочки эритроцитов и лейкоцитов, метиленовый синий окрашивает ядра лейкоцитов). Создать камеру, притерев покровное стекло к камере Горяева, заполнить её раствором с лейкоцитами. Рассмотреть сетку Горяева под малым увеличением микроскопа, найти левый верхний квадрат, разделенный на маленькие. Подсчитать ядра белых кровяных телец в 25 больших квадратах, деленных на малые (их 5 по горизонтали и 5 по вертикали сетки, всего 25, каждый третий квадрат по горизонтали и вертикали сетки разделен на малые, в нашем протоколе – окрашен в желтый цвет).

Расчет по формуле: Л = В*20*4000*10⁶/ 400,

где B - количество лейкоцитов в 25 больших квадратах, 20 - разведение, 400 - количество маленьких квадратов в 25 больших квадратах, 4000 – во столько раз объем жидкости над маленьким квадратом меньше объема 1 мм3 (сторона квадрата 1/20 мм, высота камеры -1/10 мм), 10 в 6 степени - для перевода значения в 1 литр.

Окраска по методу Май-Грюнвальд – Гимза выполняется в два этапа:

1) фиксация в краске-фиксаторе Май-Грюнвальда;

2) окрашивании в краске Романовского (Романовского -Гимза).

Нормы лейкоформулы

Б %	Э %	Нейтрофилы %				Л %		М %
		Ю, %	П, %	С, %
0-0,5	0-5	0	1-6	47-72	19-38		3-11