Биоинженерия / Polioxialkanoaty_POA__biorazrushaemye_polimery_dlya_meditsiny

ления аппетита, контроля нарушений метаболизма, в качестве парентерального питания, стимуляции сердечной деятельности, при диабете, для контроля поврежденных клеток мозга при болезни Альцгеймера, эпилепсии и нейродегенеративных нарушениях. Потенциальное использование двух типов полиоксиалканоатов, ПОБ и ПОБ-со-ПОВ, исследовано in vivo. В самых ранних исследованиях данных полимеров было показано, что ПОБ переваривается in vivo крысами и свиньями (Brune and Niemann, 1977a, б). Позднее, былf сопоставлена переваримость нативного ПОБ и предварительно обработанного NaOH. Была установлена лучшая переваримость обработанного полимера (Forri et al., 1999 a,b). Разрушение ПОБ в рубце крупного рогатого скота отмечал также в своей работе (Holmes,1988). Переваримость ПОБ и сополимера ПОО-со-ПОГ изучена у бройлерных цыплят и показано, что количество высвобождаемой из этих полимеров энергии лежит между полисахарами и жирами (Peoples et al., 1999).

270

Заключение

Полиоксиалканоаты (ПОА) – природные полиэфиры алкановых кислот, продуцируемые природными микроорганизами и трансгенными организмами, обладают вариабельностью состава и спектром ценных коммерческих свойств. В силу этого ПОА имеют широкие перспективы применения в различных сферах, прежде всего, в различных областях медицины, а также фармакологии. ПОА по ряду физико-химических свойств сходны с широко применяемыми и выпускаемыми в огромных количествах и неразрушаемыми в природной среде синтетическими полимерами (полипропиленом, полиэтиленом). Однако помимо термопластичности, полиоксиалканоаты обладают оптической активностью, антиоксидантными свойствами, пьезоэлектрическим эффектом и, что самое главное, биоразрушаемостью и биосовместимостью. Полиоксиалканоаты чрезвычайно различаются между собой по структуре и свойствам (гибкости, кристалличности, температуре плавления и др.) в зависимости от таксономического положения и физиолого-биохимических свойств мик- роорганизмов-продуцентов, условий биосинтеза и типа углеродного субстрата. Более того, продемонстрированные возможности получения на основе ПОА композитов с различными природными и синтетическими материалами, позволяющие направленно изменять их структуру, состав и, следовательно, базовые свойства материала – пластичность, механическую прочность, температурные и другие характеристики, еще более усиливает привлекательность ПОА и расширяет возможные сферы применения.

Линейная структура молекул ПОА придает им свойство термопластичности. При нагревании молекулярные цепи в ПОА легко сдвигаются относительно друг друга, в результате этого материал размягчается и приобретает текучесть. Данное технологическое свойство имеет большую коммерческую ценность, так как позволяет с использованием различных методов получать из полиоксиалканоатов разнообразные изделия и материалы.

Биодеградируемость и биосовместимость открывают широкие перспективы ПОА для применения в фармакологии и медицине, остро нуждающейся в настоящее время в связи с развитием трансплантологии и тканевой инженерии в функциональных и биосовместимых материалах. Несмотря на то, что активные биомедицинские исследования полиоксиалканоатов развернуты сравнительно недавно, уже сейчас убедительно продемонстрирован их высокий потенциал для применения в сердечно-сосудистой хирургии и трансплантологии, ортопедии и урологии, челюстно-лицевой хирургии и фармакологии.

271

Таким образом, ценные медико-биологические свойства полиоксиалканоатов, прежде всего биосовместимость и биоразрушаемость, разнообразие состава и в силу этого вариабельность физико-хими- ческих и технологических свойств, возможность получения различными биотехнологическими методами и переработки в специальные изделия медицинского назначения определяют широту и разнообразие реальных и потенциальных возможностей биомедицинского использования. Все это указывает на необходимость дальнейших, более глубоких и разносторонних исследований данного интереснейшего биоматериала.

272

Литература

Адамян А. А. Основные направления и перспективы в создании и клиническом применении полимерных имплантатов // Биосовместимость. –

1994. – № 2. – С. 97–107.

Базаров И. П., Геворкян Э. В. Статистическая физика жидких кристаллов // М.: Изд – во МГУ. – 1992. – 496 с.

Безбородов А. М. (Поли-β-оксимасляная кислота // В кн. Биотехнология продуктов микробного синтеза. Москва: Агропромиздат. – 1991. –

С. 32–42.

Белова Л. Л., Соколов А. П., Троценко Ю. А. Метаболические изменения у факультативного метилотрофа Methylobacterium extorquens, синтезирующего полиоксибутират // Прикладная биохимия и микробиоло-

гия. – 1997. – Т. 33. – С. 80–83.

Беляев Б. А., Дрокин Н. А., Тюрнев В. В., Шепов В. Н. СВЧ-ячейка для измерения диэлектрической проницаемости жидкости // Авт. свид. на полезную модель № 95106068. – БИ. – 1997 – № 3.

Беляев Б. А., Волова Т. Г., Дрокин Н. А., Шепов В. Н. СВЧ-диэлектрическая проницаемость полиоксибутирата – деградируемого полимера // Докл. РАН. – 2000а. – Т. 370. – № 6. – С. 828–831.

Беляев Б. А., Волова Т. Г., Дрокин Н. А., Шепов В. Н. Исследование СВЧдиэлектрической проницаемости в диапазоне сверхвысоких частот деградируемого биополимера полиоксибутирата // Биофизика. – 2000.

– Т. 45. – вып.4. – С. 636–640.

Беляев Б. А., Волова Т. Г., Дрокин Н. А., Шепов В. Н. Микрополосковые резонансные датчики для диэлькометрии жидких кристаллов и биополимеров. Тезисы Второй Международной научно-технической конференции // Барнаул. – 2001. – С. 30–35.

Беляев Б. А., Волова Т. Г., Дрокин Н. А., Шепов В. Н. Диэлектрическая проницаемость растворов полиоксиалканоатов // Известия ВУЗов. Серия «физика». – 2002. – № 4. – С. 63–68.

Биодеструктирующие полимерные материалы. Сб. научн. трудов // Киев: Наукова думка –1982.–88 с.

Биосовместимость. Под ред В. И. Севастьянова // М.: ИЦ ВНИИгеосистем.

– 1999. – 368 с.

Бонарцева Г. А. Тестирование активности клубеньковых бактерий по накоплению поли-β-оксибутирата при витальном окрашивании их колоний фосфином 3R // Микробиология. – 1985. – Т. 54. – С. 461–464.

Бонарцева Г. А., Мышкина В. Л., Мишустин Е. Н. Показатели активности клубеньковых бактерий. Изв. АН СССР. сер. биол. – 1988. – Т. 4. –

С. 546–557.

273

Бонарцева Г. А., Мышкина В. Л., Загреба Е. Д. Зависимость содержания поли-β-оксибутирата от активности нитрогеназы и гидрогеназы у некоторых штаммов Rhizobium // Микробиология. – 1989. – Т. 58. –

С. 920–922.

Бонарцева Г. А., Мышкина В. Л., Загреба Е. Д. Содержание поли-β-окси– бутирата в клетках видов Rhizobium в зависимости от источника углерода и азота в среде // Микробиология. –1994. – Т. 63. – С. 78–84.

Васин С. Л., Титушкин И. А., Прокопенко Р. А., Розанова И. Б., Севастьянов В. И. Методика получения и цифровой обработки изображений адгезированных клеток // Медицинская техника. – 1998. – № 1. – С. 6–9.

Веденов А. А. Физика растворов // М.: Наука. – 1984. – 108 с. Вильямс Д., Рауф Р. Имплантаты в хирургии. М.: Медицина. – 1978.

Волова Т. Г., Федорова Я. В., Калачева Г. С. Влияние лимитирования роста на накопление полиоксибутирата у водородокисляющих бактерий // В кн.: Материалы Всес. конф. Лимитирование и ингибирование роста микроорганизмов. Пущино. – 1989. – С. 16–24.

Волова Т. Г., Калачева Г. С. Полиоксибутират – термопластичный биодеградируемый полимер (получение, свойства, применение). Красноярск. Препринт 131Б – 1990. – 47 с.

Волова Т. Г., Калачева Г. С. , Федорова Я. В. Регуляция синтеза микробного полиоксибутирата параметрами среды // В сб.: Микробная биоконверсия. Рига. – 1990. – С. 119–129.

Волова Т. Г., Калачева Г. С. , Константинова В. М., Пузырь А. П. Влияние условий роста на накопление полиоксибутирата водородными бактериями // Прикладная биохимия и микробиология. –1992а. – Т. 28. –

С. .221–22.

Волова Т. Г., Луковенко С. Г., Васильев А. Д. Получение и исследование физико – химических свойств микробных полиоксиалканоатов // Биотехнология. – 1992б. – № 1. – С. 19–22.

Волова Т. Г., Константинова В. М., Гусейнов О. А. Образование термопластичных разрушаемых полиоксиалканоатов хемолитотрофными бактериями // Биотехнология. –1992в. – № 5. – С. 81–83.

Волова Т. Г., Луковенко С. Г., Васильев А. Д. Получение и исследование физико – химических свойств микробных полиоксиалканоатов // Биотехнология. – 1994а. – №1. – С. 19–22.

Волова Т. Г., Калачева Г. С., Константинова В. М. Накопление полиоксибутирата аэробной СО – окисляющей карбоксидобактерией Seliberia // Микробиология. – 1994б. – Т. 63. – С. 211–216.

Волова Т. Г., Терсков И. А., Сидько Ф. Я. Микробиологический синтез на водороде // Новосибирск: Наука. –1995. – 115 с.

Волова Т. Г., Калачева ГС. Способ получения полимера β-оксимаслянной кислоты // Патент РФ № 2051967. – БИ. – 1996. – № 3.

274

Волова Т. Г., Калачева Г. С. , Константинова В. М. Способ получения гетерополимера -оксимасляной и -оксивалериановой кислот. Патент РФ // № 2051968 (приоритет от 08.01.1992). – БИ. – 1996а. – № 3.

Волова Т. Г., Гительзон И. И., Пузырь А. П. Размерная гетерогенность в бактериальной популяции, аккумулирующей и деградирующей полиоксибутират // Докл. РАН. – 1996б. – Т. 346. – С. 256–258.

Волова Т. Г., Беляева О. Г., Калачева Г. С. , Плотников В. Ф. Получение и исследование микробных гетерополимерных полиоксиалканоатов // Докл. РАН. –1996в. – Т. 346. – С. 558–561.

Волова Т. Г., Беляева О. Г., Плотников В. Ф., Пузырь А. П. Исследование разрушаемости микробных полиоксиалканоатов // Докл. РАН. – 1996.

– Т. 350. – С. 498–501.

Волова Т. Г., Калачева Г. С., Пузырь А. П. Влияние внутриклеточного пула полиоксибутирата на рост водородных бактерий в неоптимальных условиях // Микробиология. –1996д. – Т. 65. – С. 594–598.

Волова Т. Г., Калачева Г. С., Плотников В. Ф. Биосинтез гетерополимерных полиоксиалканоатов хемолитотрофными бактериями // Микробиология. – 1998. – Т. 67. – С. 512–517.

Волова Т. Г., Беляева О. Г., Плотников В. Ф., Пузырь А. П. Исследование разрушаемости микробных полиоксиалканоатов // Прикладная биохимия и микробиология. – 1998. – Т. 34, № 5. – С. 539–543

Волова Т. Г., Калачева Г. С., Трусова М. Ю., Тюлькова Н. О., Пузырь А. П. Исследование внутриклеточной деградации полиоксибутирата в культуре водородных бактерий // Микробиология. – 1999. – Т. 68. – С. 72–78.

Волова Т. Г., Васильев А. Д., Зеер Э. П., Петраковская Э. А., Фалалеев О. В. Исследование молекулярной структуры полиоксибутирата – термопластичного разрушаемого биополимера // Биофизика. – 2000. – Т. 45, вып. 3. – С. 433–439.

Волова Т. Г., Шишацкая Е. И., Гордеев С. А., Зеер Э. П. Исследование структуры и свойств полиоксибутирата – термоплаcтичного биоразрушаемого полимера // Перспективные материалы. – 2001. – № 2. – С. 40–48.

Волова Т. Г., Калачева Г. С., Алтухова О. В. Автотрофный синтез полиоксиалканоатов бактериями Alcaligenes eutrophus в присутствии моноокиси углерода // Микробиология. – 2001. – Т. 70, № 6. – С. 745–752.

Волова Т. Г., Войнов Н. А. Кинетические параметры культуры водородокисляющих бактерий Ralstonia eutropha в режиме биосинтеза полигидроксибутирата // Прикладная биохимия и микробиология. – 2003. – Т. 39, № 2. – С. 166–170.

Волова Т. Г., Шишацкая Е. И., Некрасов Ю. П., Гордеев С. А. Получение и исследование пленок и шовных нитей из полиоксиалканоатов // Пластические массы. – 2003. – № 3. – C. 6–8.

275

Волова Т. Г., Войнов Н. А. Кинетические и продукционные характеристики культуры Ralstonia eutropha, аккумулирующей полигидроксиалканоаты на продуктах переработки углей // Прикладная биохимия и микробиология. – 2003. – (в печати).

Волова Т. Г., Гительзон И. И., Калачева Г. С., Кузнецов Б. Н., Шабанов В. Ф. Способ получения полимера β-оксимасляной кислоты // Па-

тент РФ № 2207375 (приоритет от 27.02.2001).

Волошин А. И., Шехтер А. Б., Попов В. К. Тканевая реакция на акриловые пластмассы, модифицированные сверхкритической экстракцией двуокисью углерода // Стоматология. – 1998, – № 4. – C.4–9.

Волохина А. В., Годовский Ю. К., Кудрявцев Г. И. и др. Жидкокристаллические полимеры // М.: Химия. – 1988. – С. 7.

Галатенко Н. А., Яценко В. П. Пхакадзе Г. А., Липатова Т. Э. Определение гистотоксичности полимеров медицинского назначения с использованием тканевых культур // Доклады АН УССР. Серия Б.– 1982. – Т. 9. –

С. 52–56.

Говорухина Н. И., Троценко Ю. А. Содержание поли-β-оксибутирата у метилотрофных бактерий с различными путями первичной ассимиляции метанола // Прикладная биохимия и микробиология. –1991. – Т. 27. –

С. 98–101.

Горчаков В. Д., Сергиенко В. И., Владимиров В. Г. Селективные гемосорбенты. М.: Медицина. – 1989.

Доронина Н. В., Остафим М., Троценко Ю. А. Methylobacterium extorquens – новый факультативный метилотроф, образующий поли-β-гидроксибу- тират // Микробиология. – 1992. – Т. 61. – С. 678–682.

Заварзин Г. А. Литотрофные микроорганизмы // М: Наука. – 1972. – 340 с.

Заварзин Г. А. Водородные бактерии и карбоксидобактерии // М: Наука. –

1975. – 202 с.

Загреба Е. Д., Эйдус Я. А., Якобсон Ю. О. К вопросу об интерпритации инфракрасных спектров поглощения целых микробных клеток // Биофи-

зика. – 1980. – Т. 25. – С. 172–173.

Загреба Е. Д., Селиверствова Т. И., Гиновская М. К., Клинцаре А. Я., Якобсон Ю. О. Дифференциация штаммов Rhizobium leguminosarum методом ИК – спектроскопии // Изв. АН СССР. Сер.биол.наук – 1982. – Т. 6.

– С. 906–911.

Загреба Е. Д., Савенкова В. В., Гиновская М. К., Якобсон Ю. О. ИК-спектро- скопический контроль химического состава биомассы // В сб.: Микробная конверсия. Рига. – 1991. – С. 139–147.

Де Жен П.–Ж. Смачивание: Статика и динамика // Успехи физических наук.

– 1987. – Т. 151, вып. 1. – С. 619–681.

276

Джеймс Т. Теория фотографического процесса // Л.: Химия. – 1980. Искусственные органы. Под ред. В. И. Шумакова // М.: Медицина. – 1990. Папков С. П. Студнеобразное состояние полимеров // М.: Химия. – 1974.

Кацарава Р. В., Харадзе Д. П., Кирмелишвили Л. И., Заалишвили М. М. Гетероцепные полимеры на основе природных аминокислот: Оксазолиновый метод синтеза полиамидов, содержащих ферментативно расщепляемые связи в основных цепях макромолекулы // Acta Polymerica. – 1985. – V. 36. – P. 29–38.

Козловский А. Г., Желифонова В. П., Винокурова Н. Г., Антипова Т. В., Иванушкина Н. Е. Изучение биодеградации поли-β-гидроксибутирата микроскопическими грибами // Микробиология. – 1999. – Т. 68. – С. 340–346.

Кондратьева Е. Н. Хемотрофы и метилотрофы // изд-во МГУ – 1989. – 176 с.

Кондратьева Е. Н., Гоготов И. Н. Молекулярный водород в метаболизме микроорганизмов // М.: Наука. – 1981. – 344 с.

Кондратьева Е. Н., Красильникова Е. Н. Фототрофные бактерии как продуценты поли-β-гидроксибутирата // Прикладная биохимия и микробио-

логия. –1989. – Т. 25. – С. 785–789.

Короткова Н. А., Доронина Н. А., Троценко Ю. А. // В кн.: тез. конф. Биосинтез и деградация микробных полимеров. Пущино.–1997. – С. 31.

Короткова Н. А., Ашин В. В., Доронина Н. В., Троценко Ю. А. Определение поли-3-оксибутирата и сополимера 3-оксибутирата-3-оксивалерата в микробной биомассе методом обращенно-фазовой высоэффективной жидкостной хроматографии // Прикладная биохимия и микробиология.

– 1997. – Т. 33. – С. 339–343.

Короткова Н. А., Доронина Н. В., Троценко Ю. А. Биосинтез сополимера 3- гидроксибутирата/3-гидроксивалерата метилобактериями с сериновым путем метаболизма // Прикладная биохимия и микробиология. –

1997. – Т. 33. – С. 397–402.

Костюков В. И., Лопатов Ю. С., Яншевский А. В. и др. Имплантаты на основе углерода в травматологии и ортопедии. // В сб. Конструкционные углеродные материалы. М.: Металлургия. – 1985. – C. 100–103.

Лопатин В. Н., Волова Т. Г., Шаповалов К., Щур Л. А. Оптические характеристики клеток водородных бактерий, аккумулирующих полиоксибутират // Журнал прикладной спектроскопии. – 1996. – Т. 63. – С. 404–440.

Липатова Т. Э., Пхакадзе Г. А. Применение полимеров в хирургии. – Киев.: Наукова думка. – 1977. – 132 с.

Михалковский С. В., Алексеева Т. А., Носков А. М. и др. Иммуносорбенты на основе синтетических углей // Украинский биохимический журнал. –

1987. – T. 59. – C. 100–106.

Морфологические и биохимические аспекты биодеструкции полимеров. Под ред. Г. А. Пхакадзе // Киев.: Наукова думка. – 1986. – 152 с.

277

Музыкант Л. И., Дудникова Г. Н. Современные данные о функциональной морфологии клеток грануляционной ткани в кожной ране // Архив патологии. – 1975. – № 5. – С. 80–87.

Немец Е. А., Севастьянов В. И. Сравнительная эффективность применения гематологических методов для анализа прокоагулянтной активности медицинских материалов // Медицинская техника. – 1999. – № 6. –

С. 18–22.

Николаев В. Г. Гемоперфузия в эксперименте и клинике. Киев: Наукова Думка. – 1984.

Ножевникова А. Н., Заварзин Г. А. К таксономии СО-окисляющих грамотрицательных бактерий. Изв. АН СССР сер. биол. – 1974. – Т. 3. –

С. 436–440.

Петраковская. Э. А., Волова. Т. Г., Иванов. Ю. Н., Зеер. Э. П. Исследование структурных и динамических особенностей твердого полиоксибутирата методами магнитного резонанса // Докл. РАН. –1995. – Т. 344.

– С. 270–273.

Платэ Н. А. Полимеры для медицины // Наука в СССР. – 1986. – № 1. – С. 2–9.

Платэ Н. А., Васильев В. Е. Физиологически активные полимеры // М.: Химия. – 1986. – 294 с.

Полимеры медицинского назначения. Под ред. С. Манабу // М.: Медицина.

– 1981. – 248 с.

Производство белка на водороде. (Под. ред И. И. Гительзона). Новосибирск: Наука. – 1980. – 150 с.

Применение плазменного напыления в производстве имплантатов для стоматологии. Под ред. Лясникова В. Н. Саратов: Сарат. гос. ун-т. – 1993.

Пшежецкий С. Я., Котов Ф. Г., Милинчук В. К. Рогинский В. А., Тупиков В. И. ЭПР свободных радикалов // М.: Химия. – 1972. – 480 с.

Пузырь А. П., Букаемский А. А., Белобров П. И., Волова Т. Г. Равномерное распределение и стабилизация наночастиц в полимерном геле полиоксибутирата. – Доклады РАН. –2001. – Т. 376, № 4, – С. 547–549.

Пхакадзе Г. А., Яценко В. П., Коломийцев А. К., Григорьева М. В., Коноплицкая К. Л. Биодеструктивные полимеры // Киев.: Наукова думка. – 1990. – 143 с.

Розанова И. Б. Биодеструкция имплантатов // В кн. Биосовместимость. Под. ред В. И. Севастьянова. – 1999. – С. 212–242.

Розанова И. Б., Васин С. Л. Кальцификация имплантатов // в кн. Биосовместимость. Под. ред В. И. Севастьянова. – 1999. – С. 246–294.

Романов В. И. Физиологическая роль и метаболизм поли-β-оксимасляной кислоты у микроорганизмов // Успехи биол. химии. М.: Наука. – 1977. –

№ 18. – С. 211–230.

278

Романов В. И., Юшкова Л. А., Кретович В. Л. (Связь между содержанием поли-β-оксимасляной кислоты в бактероидах Rhizobium lupini, их дыханием и азотфиксацией // Докл. РАН. – 1974. – Т. 216. – С. 694–697.

Романова А. К. Регуляция автотрофной ассимиляции углекислоты при фотосинтезе и хемосинтезе // Успехи микробиологии. М.: Наука. – 1975.

– № 10. – С. 27–53.

Савельева Н. Д., Жилина Т. Н. К систематике водородных бактерий // Микробиология. – 1968. – Т. 309, № 1. – С. 223–226.

Савельева Н. Д., Заварзин Г. А., Веденина И. Я. Водородные бактерии // Успехи микробиологии. М.: Наука. –1971. – № 7. – С. 121–155.

Савенкова Л. Ф., Загреба Е. Д., Ваганас Ю. Я. Микроорганизмы как продуценты полиэфира D(-)-β-оксимасляной кислоты // В кн.: Биосинтез вторичных метаболитов. Пущино. –1987. – С. 52.

Савенкова Л. Ф., Тупурейна В. В., Дзене А. В., Гончарова Н. Е. Получение и физико-химическая характеристика полимера β-оксимасляной кислоты из биомассы штамма Azotobacter 83 // В кн.: Тез. конференции Биоконверсия–83. Рига. – 1988. – С. .94.

Савенкова Л. Ф., Загреба Е. Д., Герцберг З. В., Озолинь Р. К. Микробиологическое получение поли-β-оксимасляной кислоты // В кн. Микробная конверсия. Рига. – 1990. – С. 130–138.

Санжиева Э. У., Заварзин Г. А. Бактерии, окисляющие окись углерода // Докл. РАН. – 1971. – Т. 196. – С. 956–959.

Сакураи Я., Акаикэ Т. Взаимодействие полимеров медицинского назначения с живым организмом. Введение в биоматериаловедение. В кн. Полимеры медицинского назначения. Под ред. С. Манабу // М.: Медицина. – 1981. – С. 194–243.

Сапин М. П. Иммунные структуры пищеварительной системы // М.: Медицина, – 1987. – 213 с.

Севастьянов В. И. Биоматериалы для искусственных органов. В кн.: Искусственные органы. Под ред. В. И. Шумакова // М.: Медицина. – 1990. –

С. 214–220.

Севастьянов В. И. Биосовместимые материалы медицинского назначения // Перспективные материалы. – 1995. – № 5. – C. 41–55.

Cевастьянов В. И. Новое поколение материалов медицинского назначения // Перспективные материалы. – 1997. – № 4. – С. 41–55.

Севастьянов В. И., Беломестная З. М., Дубович Т. И., Петров М. В. О предварительной оценке тромборезистентности полимерных материалов // Высокомолекулярные соединения. – 1981. – Т. 23А. – С. 1864–1867.

Севастьянов В. И., Розанова И. Б., Цейтлина Е. А., Хазен Л. З., Горшов А. В., Корниенко Г. Н., Эберхарт Р., МакМиллен К. Методология отбора гемосовместимых материалов в условиях in vitro для искусственных органов // Медицинская техника. – 1990. – № 4. – С. 26–29.

279