Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Капель КЭФ

.pdf
Скачиваний:
69
Добавлен:
06.06.2020
Размер:
1.7 Mб
Скачать

98

 

 

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Анализ биологически активных веществ в винах и виноградных соках

(Якуба Ю. Ф., Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский институт

садоводства и виноградарства, г. Краснодар)

 

 

 

 

0,17 mAU

 

 

 

 

 

галловая

аскорбиновая хлорогеновая никотиновая

 

оротовая

 

кофейная

 

14

15

16

17

18

19

мин

0,486 mAU

 

 

 

 

 

 

аскорбиновая хлорогеновая никотиновая

кофейная

 

протокатеховая

 

 

фталевая

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

оротовая

галловая

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

24

26

28

30

32

34

36

мин

Буфер

бура

 

 

Проба

вино красное

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

300 мбархс

Напряжение

+12 кВ

 

 

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

комнатная

 

 

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

99

Анализ неорганических катионов в растительном материале

(Якуба Ю. Ф., Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский институт садоводства и виноградарства, г. Краснодар)

0,681 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Kалий

Натрий

Магний

 

Кальций

2

3

4

5

6

7

8

мин

Буфер

 

катионный

 

 

 

 

 

Проба

 

лист вишни (после СВЧ-экстракции)

 

 

 

Капилляр

 

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

 

 

 

Ввод пробы

 

150 мбархс

 

 

 

 

 

Напряжение

 

+16 кВ

 

 

 

 

 

Детектирование

 

254 нм, косвенное

 

 

 

 

Температура

 

комнатная

 

 

 

 

 

Проведение листовой диагностики на основе определения подвижных форм щелочных и щелочно-земельных металлов представляет собой оперативный метод контроля физиологического состояния плодовых, ягодных, цветочных культур и винограда, а также может служить критерием иммунной устойчивости сорта.

Высушенную, гомогенизированную и усредненную пробу листьев, побегов или виноградной лозы подвергали СВЧ-гидролизу в среде 5 %-ной уксусной кислоты (использовали СВЧ-минерализатор «Минотавр®-1» производства фирмы «Люмэкс»).

Виноградные соки и вина содержат в себе большое количество биологически активных веществ, включая витамины и витаминоподобные соединения, а также фенолкарбоновые кислоты.

100

 

 

 

 

 

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Анализ органических кислот в растительном материале

 

 

 

(Марковский М. Г., Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский

 

институт садоводства и виноградарства, г. Краснодар)

 

 

 

 

 

6,58 mV

 

 

 

к-та

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

винная к-та

яблочная к-та янтарная к-та

лимонная

уксусная к-та

 

 

молочная к-та

 

 

 

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

мин

Буфер

буфер на основе пиромеллитовой кислоты

 

 

Проба

растительный образец

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

150 мбархс

Напряжение

–25 кВ

 

 

Детектирование

254 нм, косвенное

 

 

Температура

комнатная

 

 

На этапе подготовки пробы использована спиртовая экстракция в СВЧ-поле.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

 

101

Анализ аминов в рыбе

 

 

 

 

 

 

(Якуба Ю. Ф., Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский институт

садоводства и виноградарства, г. Краснодар)

 

 

 

 

0,217 mAU

 

 

 

 

 

 

 

аммоний

монометиламин

диметиламин

триметиламин

 

 

 

 

4

5

 

6

7

8

9

мин

Буфер

катионный

 

 

Проба

рыба (после отгонки аминов с водяным паром)

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

150 мбархс

Напряжение

+16 кВ

 

 

Детектирование

254 нм, косвенное

 

 

Температура

комнатная

На этапе подготовки пробы проводят отгонку с водяным паром. Условия капиллярного электрофоретического разделения аналогичны катионной схеме.

102

 

 

 

 

 

Система капиллярного электрофореза «Капель»

7.4. Ветеринария

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Анализ свободных форм аминокислот (в форме ФТК-производных)

 

в сыворотке крови животных

 

 

 

 

 

 

 

2,45 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ЭОП

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Lys Trp

Phe His

Val

Thr

Ser

 

Gly

 

 

 

 

 

Tyr

Leu+Ile Met

 

 

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

мин

Буфер

30 мМ фосфатный, 4,5 мМ -ЦД (рН 7,7)

Проба

сыворотка

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 65/75 см, ID = 50 мкм

Ввод пробы

150

мбархс

Напряжение

+25

кВ

 

 

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

30 °С

 

 

 

При определении свободных форм аминокислот в сыворотке крови аликвоту пробы (100 мкл) непосредственно использовали для получения ФТК-производных аминокислот, после чего анализировали методом капиллярного зонного электрофореза. Предел обнаружения каждой из протеиногенных аминокислот в среднем составляет 1–2 мкмоль/л.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

 

103

7.5. Фармация

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Анализ лекарственных препаратов с использованием МЭКХ

 

 

(Гремяков А. И., Шпак А. В., Шпигун О. А., МГУ, химический факультет, кафедра

аналитической химии, г. Москва)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Препарат цефоперазона

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

пик 3 — действующее вещество

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

пики 1, 2, 4–13 — примеси

 

 

 

 

 

 

 

 

25 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

13

 

 

 

 

9

 

 

 

 

 

 

12

 

 

 

 

 

 

 

1 2

 

678

 

 

 

 

10

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

мин

Буфер

боратный с ДДСН

 

 

Проба

порошок для инфузий

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 65/75 см, ID = 50 мкм

Ввод пробы

100

мбархс

Напряжение

+25

кВ

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

20 °С

 

 

 

Определение чистоты и подлинности современных фармацевтических препаратов, таких как цефалоспориновые антибиотики, представляет сложную аналитическую задачу. Капиллярный электрофорез в варианте МЭКХ успешно применяется для ее решения.

104

 

 

 

 

 

 

 

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Анализ лекарственных препаратов с использованием КЗЭ

 

 

 

(Гремяков А. И., Шпак А. В., Шпигун О. А., МГУ, химический факультет, кафедра

аналитической химии, г. Москва)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Смесь цефалоспориновых антибиотиков

 

 

 

 

 

 

75 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

 

1. ЭОП (маркер – ацетон)

 

 

3

5

 

 

 

 

 

 

2.

цефоперазон

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.

цефтазидим

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

 

4.

цефотаксим

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5.

цефазолин

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6.

цефтриаксон

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

мин

Буфер

фосфатный (рН 7,8)

 

 

Проба

раствор смеси соответствующих препаратов

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

150

мбархс

Напряжение

+25

кВ

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

20 °С

 

 

 

Благодаря высокой эффективности и отличным от ВЭЖХ принципам разделения достигается высокая селективность при анализе соединений, имеющих сходную структуру.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

105

Анализ лекарственных препаратов с использованием МЭКХ

 

 

(Гремяков А. И., Шпак А. В., Шпигун О. А., МГУ, химический факультет, кафедра

аналитической химии, г. Москва)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Комбинированный препарат цефоперазона

 

 

 

 

 

 

300 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1. цефоперазон

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2. сульбактам

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

 

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23 мин

Буфер

боратный, с добавкой ДДСН

 

 

Проба

раствор комбинированного препарата цефалоспоринового

антибиотика

 

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 65/75 см, ID = 50 мкм

Ввод пробы

90 мбархс

Напряжение

+25 кВ

 

 

Детектирование

200 нм

Температура

20 °С

 

 

Современные медицинские препараты могут содержать компоненты, усиливающие активность действующего вещества. При использовании МЭКХ со спектрофотометрическим детектированием возможно одновременное определение содержания как активного компонента, так и вспомогательных.

106

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Анализ лекарственных препаратов с использованием МЭКХ

 

 

(Гремяков А. И., Шпак А. В., Шпигун О. А., МГУ, химический факультет, кафедра

аналитической химии, г. Москва)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Стандартная смесь синтетических кортикостероидов

 

 

 

 

 

80 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1. метилпреднизолон

 

 

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2. дексаметазон

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19 20

21

22 23

24

25

26

27

28

мин

Буфер

фосфорная кислота с добавкой ДДСН

 

 

Проба

стандартная смесь дексаметазона и метилпреднизолона

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 65/75 см, ID = 50 мкм

Напряжение

–25 кВ

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

20 °С

 

 

On-line концентрирование компонентов методом SRW (Stacking using reversed-migrating micelles)

Использование различных вариантов on-line концентрирования позволяет многократно повысить чувствительность определения и проводить анализ препаратов с низким содержанием действующего вещества без предварительного концентрирования методами экстракции или хроматографии.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

107

Разделение оптических изомеров (энантиомеров) лекарственных препаратов

(Буданова Н. Ю., Шаповалова Е. Н., МГУ, химический факультет, кафедра аналитической химии, г. Москва)

1,48 mAU

10

11

12

13

14

15

16

17

мин

Буфер

10 мМ фосфатный, 2 % декстран сульфата, (рН 6,8)

 

 

Проба

модельный раствор энантиомеров флуоксетина

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

гидродинамический

 

 

Напряжение

+20 кВ

 

 

Детектирование

200 нм

 

 

Температура

20 °С

Важным направлением в фармакологии являются исследования в области разделения оптических изомеров биологически активных соединений.

108

 

 

 

 

 

 

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Определение флавоноидов в экстракте цветков бессмертника

 

 

(Гаврилин М. В., Пятигорская государственная фармацевтическая академия, ка-

федра фармацевтической химии, г. Пятигорск)

 

 

 

 

 

 

Сухой экстракт цветков бессметрника

 

 

 

 

 

 

 

0,5 mAU

 

 

 

 

 

 

изосалипурпозид

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

мин

Экстракт цветков бессметрника

 

 

 

 

 

 

 

 

0,5 mAU

 

 

 

 

 

 

изосалипурпозид

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

мин

Буфер

боратный

 

 

Проба

экстракты бессмертника

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 65/75 см, ID = 50 мкм

Ввод пробы

150

мбархс

Напряжение

+20

кВ

 

 

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

22 °С

 

 

 

Использование боратного электролита позволяет разделять флавоноиды в зависимости от количества и расположения гидроксильных групп. Сравнивали содержание флавоноидов в спиртовой вытяжке из цветков бессмертника и в сухом экстракте этих же цветков.

Глава 7.

Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

109

Определение флавоноидов в экстракте клевера

 

 

 

 

(Гаврилин М. В., Пятигорская государственная фармацевтическая академия, ка-

федра фармацевтической химии, г. Пятигорск)

 

 

 

 

 

6,81 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ононин

 

формононетин

 

рутин

 

 

 

кверцетин

 

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

мин

Буфер

боратный

 

 

Проба

спиртовой экстракт

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

150

мбархс

Напряжение

+20

кВ

 

 

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

22 °С

 

 

 

Получали спиртовой экстракт клевера (спирт 40 %), разбавляли водой 1:1.

110

 

 

 

 

 

 

 

 

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Определение флавоноидов в траве овса

 

(Гаврилин М. В., Пятигорская государственная фармацевтическая академия, ка-

федра фармацевтической химии, г. Пятигорск)

 

0,148 mAU

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

витексин

 

4

5

6

7

8

9

10

11 12 13

14 15

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29

мин

Буфер

боратный

 

 

Проба

спиртовой экстракт

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

150

мбархс

Напряжение

+20

кВ

 

 

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

22 °С

 

 

 

Из травы овса был получен спиртовой экстракт, который разбавили водой 1:1. С помощью КЗЭ определяли витексин-2'-О-рамнозид.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

111

Определение примесей в рифампицине

 

 

(Сенченко С. П., Овчаренко Л. П., Пятигорская государственная фармацевтическая

академия, кафедра фармацевтической химии, г. Пятигорск)

 

 

0,1 mAU

 

 

 

1. рифампицин

 

 

 

2. примесь №1

 

 

 

3. примесь №2

1

 

 

4. примесь №3

 

 

 

 

3

4

 

 

2

 

10

11

12

мин

Буфер

фосфатный с -ЦД

 

 

Проба

стандартный раствор рифампицина

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 65/75 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

150

мбархс

Напряжение

+20

кВ

 

 

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

23 °С

 

 

 

Использование добавок макроциклических реагентов позволяет разделять примеси лекарственных веществ, в том числе и изомеры, что можно использовать для установления сроков хранения лекарственных средств.

112

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Анализ лекарственных препаратов

10 mAU

4

1.кофеин

2.анальгин

3.ибупрофен

4.фенобарбитал

5.

барбитал

5

 

6.

кодеин

 

 

1

 

 

 

6

 

2

3

2 3 4 5 6 7 8 9 мин

Буфер

10 мМ натрий тетраборнокислый, 15 мМ ДДСН

 

 

Проба

модельный раствор

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

450 мбархс

Напряжение

+20 кВ

Детектирование

254 нм

 

 

Температура

комнатная

 

 

Метод мицеллярной электрокинетической хроматографии чаще всего используется для анализа лекарственных препаратов.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

113

Анализ лекарственных препаратов

1

20 mAU

1.парацетамол

2.кофеин

3.аспирин

4.бензойная кислота (добавка)

 

 

 

 

2

3

4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

мин

Буфер

 

50 мМ натрий тетраборнокислый, 40 мМ ДДСН

 

 

 

Проба

 

таблет-масса «Цитрамона-П»

 

 

 

 

 

Капилляр

 

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

 

 

 

 

Ввод пробы

 

900 мбархс

 

 

 

 

 

 

 

Напряжение

 

+20 кВ

 

 

 

 

 

 

 

Детектирование

 

254 нм

 

 

 

 

 

 

 

Температура

 

комнатная

 

 

 

 

 

 

 

Гомогенизированную пробу лекарственного препарата встряхивают с дистиллированной водой, фильтруют и анализируют методом МЭКХ.

114

Система капиллярного электрофореза «Капель»

Анализ кумаринов в экстрактах растительного сырья

 

(Кокорина Н. О., Новосибирское областное Бюро судебно-медицинской экспертизы

и Новосибирский государственный медицинский университет кафедра фармаког-

нозии, судебно-химическое отделение, г. Новосибирск)

 

174 mAU

 

 

1. эскулитин

 

 

2. умбеллиферон

 

2

 

1

 

5

10

мин

Буфер

10 мМ натрий тетраборнокислый

 

 

Проба

модельный раствор

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

450 мбархс

Напряжение

+20 кВ

 

 

Детектирование

210 нм

 

 

Температура

20 °С

 

 

Анализ растительного сырья для использования в фитотерапии.

Подготовка пробы: экстракция растительного сырья 96 % этиловым спиртом при нагревании на водяной бане.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

115

Анализ флавоноидов в экстрактах растительного сырья

(Кокорина Н. О., Новосибирское областное Бюро судебно-медицинской экспертизы и Новосибирский государственный медицинский Университет кафедра фармакогнозии, судебно-химическое отделение, г. Новосибирск)

55 mAU

1

3

1.байкалин

2.рутин

3.кверцетин

2

5 10 15 мин

Буфер

10 мМ натрий тетраборнокислый

 

 

Проба

модельный раствор

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

450 мбархс

Напряжение

+20 кВ

Детектирование

210 нм

Температура

20 °С

 

 

Анализ растительного сырья для использования в фитотерапии.

Подготовка пробы: экстракция растительного сырья 96 % этиловым спиртом при нагревании на водяной бане.

116

Система капиллярного электрофореза «Капель»

7.6. Клиническая биохимия

 

 

Определение белков в биологических жидкостях

 

(Козлов А. В., Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образо-

вания (МАПО), кафедра клинической лабораторной диагностики и Королева Е. М.,

ООО «Центр биохимических исследований», г. Санкт-Петербург)

 

20 mAU

альбумин

 

 

 

патология

-2 -1

 

 

 

норма

 

 

5

10

мин

Буфер

10 мМ натрий тетраборнокислый

 

 

Проба

сыворотка крови здорового человека и больного с миеломой

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

150 мбархс

Напряжение

+15 кВ

 

 

Детектирование

215 нм

 

 

Температура

20 °С

 

 

Определение концентрации альбумина и его отдельных фракций является очень важным диагностическим параметром при целом ряде заболеваний, особенно заболеваний почек и выделительной системы, а также других патологий, приводящих к выраженным нарушениям метаболизма.

Подготовка пробы представляет собой разбавление сыворотки в 50 раз дистиллированной водой.

Глава 7. Области применения метода капиллярного электрофореза и примеры использования

117

Определение альбумина в слезной жидкости

(Козлов А. В., Семесько С. Г., Адамсон В. Г., Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования (МАПО), кафедра клинической лабораторной диагностики, г. Санкт-Петербург)

5 mAU

 

1. альбумин

 

2. преальбумин

2

 

1

правый глаз

левый глаз

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13 мин

Буфер

10 мМ натрий тетраборнокислый, 5 мМ ДДСН

 

 

Проба

слезная жидкость из левого и правого глаза

 

 

Капилляр

Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм

Ввод пробы

450 мбархс

Напряжение

+15 кВ

 

 

Детектирование

215 нм

Температура

20 °С

 

 

Обнаружение альбумина и определение белкового состава слезной жидкости позволяет осуществлять раннюю диагностику диабетического поражения органа зрения.

Соседние файлы в предмете Физико-химические методы анализа