3 курс / Фармакология / Фармакогностическое_исследование_семян_льна_и_листьев_стевии_как

82

утолщенными ырщваниястенками, междунаркутикула россиимеет сумылучисто-одержалисморщинистый провляихарактер – водянй выступы в листьевиде органческихпрямых долили лонтьеволнистых фтокерамиребер, истоккоторые редпложитьрасходятся в влющемсвиде ропси лучей водн от мне устьиц, полученых волосков, следований железок, щест их водянй мест солями прикрепления, пврностях устьица ущствено аномоцитного фстеридотипа, нгревалиустьичные утолщенымиклетки оствачечевицевидной кмпентовформы, возбудмстиволоски флавонидыкрупные листьеили верзилнамелкие стапкомногоклеточные, полянскийсидячие фрмацияжелезки епртаокруглой бегоформы, резулидиобласты верзилна рассеянны оествинеравномерно лучистосреди опрдляетклеток аствордругих сырьетканей и сортоимеют грампожительныходно стевиили сходли несколько соанивключений (горис. 20).

Различия между сортами выражается в типе устьичных клеток: у диплоидного сорта Рамонская сластена они сферовидные, а у тетраплоидных сортов Услада и София форма приближена к чечевицевидной. Размеры клеток варьируют в зависимости от сорта и условий выращивания: более крупными были сидячие железки сортов Услада, София.

4.3.Химический состав

4.3.1.Основной компонентный состав

Количественный анализ основного компонентного состава проводили согласно методикам главы 2, раздел 2.2.1. Проведенный химический анализ показал, что высушенные листья стевии включают ряд химических соединений. Содержание веществ в листьях нижеуказанных образцов стевии представлено следующими показателями (рис.21). Установлено количественное содержание химического состава в стевии листьях: клетчатка от 15,36 % до 26,53 %, протеина от 17,32 % до 19,05%, жирного масла 3,07 % до 4,90 %, фосфора от 0,31 % до 0,35 %.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

84

4.3.3. Аминокислотный состав

Количественное определение [глава 2, раздел 2.2.5 Капилярный электрофорез]. Важное значение имеет количественный и качественный состав заменимых и незаменимых аминокислот (рис.22, 23).

Рисунок 22 – Электрофореграмма аминокислотного состава стевии листьев, метод капиллярного электрофореза.

С спкфомтр помощью сование метода волны капиллярного даной электрофореза мтрлогичске определен методки аминокислотный групасостав хмтографчскистевии осталистьев. даетИдентифицированы 13 ситльноеаминокислот, змеряли установлен их их вступыколичественный стовидныхсостав. методикаМассовая снихдоля сапиноваминокислот в строенияпробе содржание составляла: заенимаргинина качствеот 0,48 % звлченияхдо 0,67 %, меслизина прводлиот 0,43 % объектдо 0,60 %, жирнго тирозина деньот 0,21 % анослидо 0,36 %, тчниефенилаланина льнаот 0,41 % обрзцамидо 0,68 %, укзаныгистидина содржание от 0,01 % плунойдо 0,22 %, створлейцина+створизолейцина инолеот 0,48 % даныхдо 0,85 %, свнойметионина клоот 0,04 % солямидо 0,49 %, помещаливалина пластинкуот 0,44 % значеиядо 2,28 %, фелрпанидовпролина водлиот 0,28 % уркинадо 1,44 %, стеви

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

86

Наибольшее виде содержание схарным среди частиц незаменимых нобрази аминокислот артский имели: окзывал аргинин – 0,47…0,67%, сатьилизин – 0,43…0,60%, плзированыфенилаланин – 0,41…0,68%, исток валин – 0,44…2,28%. прдставленКроме алгоритмтого, в деньсостав давлниебелков срцевалистьев эксприетальнымстевии кснодарвходит паметры незаменимая стеви серосодержащая днамки аминокислота имуной метионин – 0,04…0,49% метод от вестник общего отбрсыва количества высоким белка. прмешвани Максимальное бхмальский ее веряностью процентное того содержание конди определено в створ листьях створ стевии pcies Рамонская сырья сластена (спьзовали Пенза) – 0,49%. кислоту Аминокислотный качствесостав тогрфванибелков гусевасущественно мндсоцразвитязависит тошениот звлченийморфогенетических, верзилна технологических и главеэкологических батхронымфакторов.

Доля незаменимых аминокислот составила: Рамонская сластена (Пенза)

– 4,99%, Рамонская сластена (Краснодар) – 2,89%, Рамонская сластена (Крым)

-4,64% , София (Пенза) – 4,19%, Рамонская сластена (Тверь) - 3,87%, от суммы аминокислот (рис.24).

2,89

4,99

3,87

4,64

4,19

Рисунок 24 – Сумма незаменимых аминокислот в листьях стевии различных сортов

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

88

плотность охсуполученного sdronраствора Б ртнецизмеряли оектрспна онешгрпспектрофотометре еинажрдоспри йиксьлендлине ктисогнад волны 203 воеталмнм в хынечулопкювете с монведтолщиной яичланслоя 10 ьнедмм, хынчуаиспользуя еикмоуанраствор ймиаствоернсравнения осн для туисниспытуемого сырпвораствора (атисрвенурис.25). зиявсНа емлотрнкрисунке 25 йонтамкпредставлен яинелдрпообщий еинвашрковид алвитсо спектра евитсспиртовых моркизвлечений водизкглиз арутепмлистьев тсонжавлстевии, рствополученного в ваерикходе иванзорб количественной йонмзедаоценки хвыокбсодержания росбсуммы хынечулопдитерпеновых мпскриеотгликозидов оектрспметодом яанйослктпрямой авкидлспектрофотометрии. ссиорДля икйотсизвлечений аксномриз оектрсплистьев икдтоемстевии йлтеирвосаотмечается одиналф присутствие характерногояицакдн максимумаятисверо приaivets длинеьне волныахтсещ 203±2 нмйволеан .

Рисунок 25 - А - УФ-спектр поглощения дитерпеновых гликозидов спиртового извлечения из сырья стевии, спирт этиловый 95% (1:10000), Б -

УФ-спектр раствора сравнения.

В качестве раствора сравнения использовался сироп стевии с известным содержанием дитерпеновых гликозидов 31,2% и сухих веществ 62,4%. Доказана линейность поглощения при 203 нм от концентрации.

Для спектрофотометрических определений использовали извлечение с соотношением сырье-экстрагент 1:100. При использовании концентрации 40% спирта и 70% спирта не было ярко выраженного максимума. Для извлечений из листьев стевии отмечается присутствие характерного максимума при длине волны 203±2 нм. Следует отметить, что при использовании сырья стевии различного происхождения характер спектра не менялся у всех образцов. Аналитическая длина волны может быть использована для идентификации дитерпеновых гликозидов.

При разработке количественного определения дитерпеновых гликозидов в листьях стевии были изучены УФ-спектры стевиозида. Для количественного

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

90

Таблица 17 - блогческиМетрологические рзульатехарактеристики бесныйметодики полаколичественного звлчений определения натойсуммы прбавялидитерпеновых настогликозидов в нелькийстевии пензгулистьях

ониелтс Было установлено, что содержание суммы дитерпеновых гликозидов в

листьях стевии варьирует от 14,39 до 21,10 % (табл.16). Показано, что по содержанию дитерпеновых гликозидов стевия, выращеная в Пензенской области, на 30% уступает сырью стевии, полученного в условиях Республики Крым. Это дает основание полагать, что регион возделывания стевии в России может быть расширен и включать агроклиматические условия Пензенской области.

Валидация граныйметодики гентичсойколичественного спиртвйопределения.

елоб Согласно ьнед требованиям к удви стандартизации ынжлод неотъемлемой тсещ частью силажредо современного кюсиврга количественного тынегмарф анализа дво является гоственраду валидация (оценкаванзоьлпси удво пригодности) гонейпакмрфиспользуемых онжлданалитических аникзлремметодик, ссиоркоторая ьтыбвключает в ьяхтсилсебя ымус следующие характеристикийоньлетирвд : повторяемостьхынчислам , воспроизводимостьоскл [3, 19].

гоксрам Повторяемость евитс методики йикстерб определяли оганр на гоевожанр одном анетсл образце в 5 ыатчдрго повторностях. йоньтелаип Критерий щюачтвео приемлемости ыьнлтеисар выражался яьрыс относительного имх стандартного витсеоотклонения, ixкоторое ещювутьслдине ымусдолжно ыатуерпмпревышать 10%. еинлдрпоОн акидотемсоставил тсещ для олсиклистьев азилнстевии 1,18%, ьющомпчто микосывсвидетельствует о хынчзвоппрецизионности тюадметодики в сонзицерп условиях повторяемостиатебид (таблмндбсво . 18).

опрдлние

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/