5 курс / Пульмонология и фтизиатрия / Лабораторная_служба_в_программах_борьбы_с_туберкулезом_ВОЗ_культуральное
.pdfВВЕДЕНИЕ
10
ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ
2
2 . 1
11
12
Окно |
Окно |
(постоянно закрыто) |
(постоянно закрыто) |
Термостат на 35–37°С
Вытяжной вентилятор
Раковина |
Рабочий стол |
Раковина |
|
|
|
|
|
|
|
|
Холодильник |
Раковина |
Свертыватель |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Шкаф |
Место для учета |
|
|
|
|
Место для |
микроскопии |
с полками |
результатов |
|
|
|
|
мазков |
|
Рабочий стол |
||||
|
|
|
Мойка |
Песок |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Зона регистрации материала
Шкаф
вентилятор Вытяжной
Окно Вытяжной вентилятор (постоянно закрыто)
Холодильник
Центрифуга
Основная рабочая зона
Ванна
Направление движения проб
Рабочий стол Автоклав
Полки
Моечная
Рабочий стол
|
Раковина с решеткой |
|
Мойка |
Шкаф с |
Мойка |
полками |
|
|
Место для приготовления |
|
питательных сред |
Окно (постоянно вентилятор Вытяжной закрыто)
Шкаф |
Рабочий стол с полками |
Шкаф |
Рабочий стол |
|
|
|
ЛаминарныйBiological safetyшкафcabine
Окно |
Окно |
Окно для приема |
(постоянно закрыто) |
(постоянно закрыто) |
образцов |
ОБОРУДОВАНИЕ И ЛАБОРАТОРИИ РАБОТЫ ОРГАНИЗАЦИЯ
ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ
2 . 2
13
ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИИ И ОБОРУДОВАНИЕ
Дезинфицирующий раствор
Стерильные петли |
Метиловый спирт |
|
2 . 3
2.3.1
14
ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ
Крышка вытяжной вентиляции
Высокоэффективный вытяжной фильтр
Контрольная панель
Рабочая поверхность
Передняя решетка
Подвижный щиток
15
ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИИ И ОБОРУДОВАНИЕ
Крышка вытяжной вентиляции
Высокоэффективный вытяжной фильтр
Предварительный фильтр
Основной высокоэффективный фильтр
Контрольная панель
Рабочая поверхность
Передняя решетка
Подвижный щиток
К вытяжному вентилятору
Воздух из помещений лаборатории
Воздух из ламинарного шкафа
16
ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ
2.3.2
17
ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИИ И ОБОРУДОВАНИЕ
Скорость вращения ротора, необходимую для получения требующейся ОСЦ, можно определить по следующей формуле:
ОСЦ
об/мин = 1000
1.12 Rmax
Если величина ОСЦ будет недостаточной, многие микобактерии после центрифугирования останутся в суспензии и будут удалены вместе с надосадочной жидкостью. Для получения оптимального результата при выделении культуры микобактерий необходимо добиться осаждения 95% бактериальных клеток. Для этого требуется использовать ОСЦ, равную 3000 g. Многие старые центрифуги, до сих пор используемые в бактериологических лабораториях, имеют не более 2300–3000 об/мин, т. е. позволяют получить ОСЦ, равную всего лишь 1500–2000 g. Большинство лаборантов, применяющих такие центрифуги, обрабатывают исследуемые пробы в течение 15 минут, что позволяет добиться осаждения не более 75–84% бактерий.
В зависимости от типа ротора в нерефрижераторной центрифуге и скорости его вращения температура воздуха в центрифуге и соответственно температура исследуемого образца может повышаться на 4–18°С. При этом температура образца в угловом роторе меняется незначительно, однако температура содержимого пробирки в крестовине с отклоняющимися центрифужными стаканами может превышать 40°С, если центрифуга используется повторно 5 раз и более. В этом случае, даже если время центрифугирования образца не превышает 15 минут, количество погибающих бактерий может возрасти с 13% при комнатной температуре 20°С до 22–30% при увеличении температуры до 30–40°С. Поэтому чрезвычайно важно центрифугировать исследуемые образцы в течение фиксированного времени (15 минут) и использовать высокую ОСЦ (3000 g) для достижения 95% седиментации. Применение угловых роторов позволяет свести до минимума нагревание образца, обусловленное сопротивлением воздуха.
Под воздействием центробежной силы стеклянные пробирки могут разрушиться. При этом происходит разбрызгивание жидкости и образование аэрозоля. Поэтому при обработке потенциально инфекционного материала необходимо использовать пластиковые пробирки с завинчивающимися пробками.
Ротор центрифуги перед началом работы должен быть хорошо уравновешен. Если этого не сделать, может возникнуть сильная вибрация, которая приведет к разрушению ротора. Если проводится исследование одной пробы, то с противоположной стороны ротора должна быть помещена аналогичная пробирка, имеющая такую же массу. Проще всего это сделать, если на центрифужных пробирках имеются метки, указывающие одинаковые объемы жидкости. В качестве дополнительной меры предосторожности можно использовать такой прием: в уравновешивающую пробирку наливают не воду, а 70% этиловый спирт; это снижает риск лабораторного заражения в случае повреждения пробирки.
Никогда не прикасайтесь к ротору, который еще продолжает вращаться, так как это не только может послужить причиной травмы, но и привести к ресуспендированию осадка из-за резкой остановки пробирки. Некоторые центрифуги оборудованы специальным тормозом, который обеспечивает плавную остановку ротора.
2.3.3Термостат с температурой 35–37°С
Инкубацию посевов производят при температуре 35–37°С в течение 8 недель. Существуют лабораторные термостаты различных размеров. Как правило, лучше всего приобрести самую большую модель, какую можно без проблем разместить в лаборатории и на какую имеются средства. В термостатах с маленьким объемом при откры-
18
ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ
2.3.4
19