2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Санитарно_бактериологический_контроль_и_микробиологические_методы
.pdfМ И Н И |
СТ Е РСТ В О О БРА ЗО В А Н И Я РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И |
В О |
РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ В Е Н Н Ы Й У Н И В Е РСИ Т Е Т |
Санитарно-б актериологический контроль и микроб иологическиеметоды исследования
Практическоеп особ иедлясту дентов
Сп ециальность «Ф армация» (011600)
Воронеж
2003
2
У тверж дено |
нау чно-методическим |
советом |
ф армацевтического |
ф аку льтета, п ротокол№ 7 от14.05.2003 |
|
|
Составители: СеменихинаА .В . РахмановаТ .И . Н ехаеваГ.И . Поп оваТ .Н .
Н ау чный редактор доц. Граб овичМ .Ю .
Практическое п особ ие п одготовлено на каф едре аналитической и медицинской б иохимии и микроб иологии б иолого-п очвенногоф аку льтета В оронеж скогогосу дарственногоу ниверситета.
Рекоменду етсядлясту дентовI и II ку рсаотделениясредне-сп ециального об разованияи II ку рсаотделениявысш егооб разованияф армацевтического ф аку льтета.
3
С О Д ЕР Ж А Н И Е
В В ЕД ЕН И Е… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 3 Т ем а 1. М И К РО БИ О Л О ГИ Ч Е СК И Е Л А БО РА Т О РИ И И И Х О БО РУ Д О В А Н И Е … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … ..4
Т ем а 2. М |
И К РО БИ О Л О ГИ Ч Е СК И Е |
М |
Е Т О Д Ы |
И ССЛ Е Д О В А Н И Я |
|
|
|||
М О РФ О Л |
О ГИ И |
М И К РО |
О РГА Н И ЗМ |
|
О В … … … |
… … … … … |
… … … … |
… |
… 9 |
Т ем а 3. М |
И К РО |
БИ О Л О |
ГИ Ч Е СК И Е |
М |
Е Т О Д Ы |
И ССЛ Е Д О |
В А Н И Я … |
… |
..17 |
Т ем а 4. М Е Т О Д Ы В Ы Д Е Л Е Н И Я , К У Л ЬТ И В И РО В А Н И Я И |
|
|
И Д Е Н Т И Ф И К А Ц И И Ч И СТ Ы Х К У Л ЬТ У Р БА К Т Е РИ Й … … … … … … … ..23
Т ема4.1. ПО Л У Ч Е Н И Е Ч И СТ Ы Х К У Л ЬТ У Р БА К Т Е РИ Й … |
… |
… |
...23 |
Т ема4.2. И Д Е Н Т И Ф И К А Ц И Я К У Л ЬТ У Р БА К Т Е РИ Й … … |
… … |
… |
.24 |
Т ем а 5. М Е Т О Д Ы И ЗУ Ч Е Н И Я А Н Т И М И К РО БН О ГО Д Е Й СТ В И Я |
|
|
А Н Т И БИ О Т И К О В … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 31 |
|
Т ем а 6. М И К РО БИ О Л О ГИ Ч Е СК И Й К О Н Т РО Л Ь А Н Т И СЕ ПТ И К О В , |
|
Д Е ЗИ Н Ф Е К Т А Н Т О В , М Е Т О Д О В СТ Е РИ Л И ЗА Ц И И … … … … .… … ..… |
..35 |
Т |
ема6.1. СТ Е РИ Л |
И ЗА Ц И Я … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
...35 |
|||||
Т |
ема6.2. Д |
Е ЗИ Н Ф Е К Ц |
И Я … … |
|
… … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… … |
… |
.37 |
|||||
Т ема6.3. А СЕ ПТ И К А |
И А Н Т И СЕ ПТ И К А … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
..38 |
||||||||||||
Т ем а 7. СА Н И Т А РН А Я М |
И К РО |
БИ О |
Л О |
ГИ Я … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
...… |
… |
… |
… |
40 |
||||||||
Т |
ема7.1. М |
И К РО |
Ф Л |
О |
РА |
В О Д |
Ы … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
..43 |
||
Т |
ема7.2. М |
И К РО |
Ф Л О |
РА |
В О |
ЗД У Х |
А … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
..… |
|
… |
… |
… |
48 |
|||
Т |
ема7.3. М |
И К РО |
Ф Л О |
РА |
ПО |
Ч В Ы |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
...… |
50 |
|||
Т ема7.4. М |
И К РО БИ О Л О ГИ Ч Е СК И Й К О Н Т РО Л Ь В |
А ПТ Е К А Х ...52 |
|||||||||||||||||||||
Т ем а 8. М Е Т О Д Ы В Ы Я В Л Е Н И Я И |
Т И Т РО В А Н И Я СПЕ Ц И Ф И Ч Е СК И Х |
А Н Т И Т Е Л (СЕ РО Д И А ГН О СТ И К А )… … … … … … … … … … … … … … … ..55
О С Н О В Н А Я Л И Т ЕР А Т У Р А … … … … … … … … … … … … … … … … … … .62
4
В В ЕД ЕН И Е
Микроб иология(греч. micros – малый, bios – ж изнь и logos – у чение)
–нау каомельчайш их организмах, которыеп оп редлож ению итальянского у ченого Седильо п ринято называть микроорганизмами. О на изу чает
морф ологию , |
цитологию , экологию , генетику , |
ф изиологию и б иохимию |
||||
микроорганизмов. В оп росы |
и задания, |
п редставленные |
в данном |
|||
методическом |
п особ ии, |
нап равлены |
|
на |
овладение |
сту дентами |
п рактических |
навыков в отнош ении |
микроб иологических методов |
исследования, методовоценки санитарно-эп идемиологическогосостояния внеш ней среды, методов оп ределения антимикроб ного действия антиб иотиков. О соб оевниманиеу деляю тсявоп росам, имею щ им б ольш ое п рикладное значение в п роизводственной деятельности ф армацевта: методам стерилизации и дезинф екции, организации асеп тических у словий п ри изготовлении лекарств, п равильности хранения медицинских б иологических п реп аратов, п роведению микроб иологическогоконтроляв ап теках и п р.
Т ем а 1. М И К РО БИ О Л О ГИ Ч Е СК И Е Л А БО РА Т О РИ И И И Х О БО РУ Д О В А Н И Е
Б а кт ер ио л о гическа я л а бо р а т о р ия
В сю раб оту с микроб ами п роводят в лаб ораториях, которые в зависимости от основных задач могу т б ыть нау чно-исследовательскими, диагностическими или п роизводственными.
В настоящ еевремя лаб оратории, как п равило, сп ециализированы и раб отаю т с той или иной гру п п ой микроб ов: б актериальные (б актериологические), виру сные, гриб ковые, п ротозойные, хламидийные, риккетсиозные и дру гие. Сп ециализированный характер п риоб ретаю т и
б актериологические лаб оратории, |
вкоторых раб отаконцентриру ется на |
||||
оп ределенных |
гру п п ах |
б актерий |
(нап ример, |
риккетсиозные, |
|
ту б ерку лезные, |
леп тосп ирозные, |
анаэроб ные и др.). |
И мму нологические |
исследованияп роводятвимму нологических лаб ораториях, хотяотдельные
виды |
исследований могу т вып олняться |
и |
в микроб иологических |
|||
лаб ораториях (нап ример, серодиагностикаинф екционных б олезней). |
||||||
Раб оту с |
п атогенными |
микроб ами |
п роводят в сп ециально |
|||
об ору дованных |
лаб ораториях, |
об есп ечиваю щ их |
такие реж им |
раб оты и |
||
технику |
б езоп асности, которые исклю чаю т |
возмож ность |
зараж ения |
персоналаи«у течку » микроб овзап ределы лаб оратории.
Необ ходимость четкой регламентации у словий раб оты с микроб ами,
в различной степ ени |
оп асными для сотру дников лаб ораторий и |
окру ж аю щ егонаселения, |
об у словиларазраб отку классиф икации микроб ов |
-они разделены на4 гру п п ы п остеп ени их б иологической оп асности.
ВРоссии в соответствии с рекомендациями В О З п атогенные микроб ы делятна4 гру п п ы:
l-ягру п п а- возб у дители особ ооп асных инф екций;
5
2-ягру п п а- возб у дителивысококонтагиозных эп идемических заб олеваний
человека; |
|
|
|
|
З-я |
гру п п а -возб у дители инф екционных |
б олезней, |
выделяемые в |
|
самостоятельныенозологическиегру п п ы; |
|
|
|
|
4-я |
гру п п а - у словно-п атогенные |
микроб ы |
- |
возб у дители |
оп п орту нистических инф екций. |
|
|
|
|
|
Безоп асность раб от влаб ораториях всех категорий об есп ечивается |
|||
вып олнением расп орядкаи п равилраб оты влаб оратории, |
вып олнением |
треб ований к лаб ораторным п омещ ениям и их оснащ ению , оснащ ением лаб ораторий соответству ю щ им об ору дованием, медицинским наб лю дением засостоянием здоровьясотру дников, об у чением п ерсонала
техникеб езоп асности. |
|
|
|
|
|
|
|
П р а вил а р а бо т ы и по вед ения в л а бо р а т о р ии |
|
|
|
||||
О соб енностью б актериологических |
раб от |
является |
п остоянное |
||||
соп рикосновение сотру дников лаб оратории с |
заразным материалом |
- |
|||||
ку льту рами п атогенных микроб ов, зараж енными ж ивотными, кровью |
и |
||||||
выделениями б ольного организма. |
Поэтому |
все сотру дники (врачи, |
|||||
лаб оранты, п реп араторы, технический п ерсонал) |
об язяны |
соб лю дать |
|||||
п равила раб оты, |
которые об есп ечиваю т стерильность в раб оте |
и |
|||||
п реду п реж даю т |
возмож ность возникновения |
вну трилаб ораторных |
|||||
зараж ений. |
|
|
|
|
|
|
|
О сновные |
п равила раб оты |
и |
п оведения для |
раб отников |
б актериологических лаб ораторий заклю чаю тсявследу ю щ ем:
1. Без сп ециальной одеж ды - халатаи головногоу б оранельзявходить в п омещ ениеб актериологическойлаб оратории.
2. При исследовании зараж енного материалаи раб оте с п атогенными ку льту рами микроб ов необ ходимо строго соб лю дать об щ еп ринятые в
б актериологической |
п рактике |
технические |
п риемы, |
исклю чаю щ ие |
||||||
возмож ность соп рикосновенияру к с заразным материалом. |
|
|||||||||
3. |
В |
п омещ ении |
б актериологической лаб оратории |
категорически |
||||||
зап рещ аетсяку рить, п ринимать п ищ у , хранить п роду кты п итания. |
||||||||||
4. |
О траб отанные |
ку льту ры |
и |
зараж енный |
материал |
п одлеж ат |
||||
об язательному |
у ничтож ению , |
п о |
возмож ности |
в |
тот |
ж е день. |
||||
И нстру менты, |
исп ользованныевраб отес заразным материалом, тотчас ж е |
|||||||||
п осле их у п отреб ления п одвергаю т дезинф екции, |
как |
и п оверхность |
||||||||
раб очегоместа. |
|
|
|
|
|
|
|
|||
5. |
Переливаниеж идкостей, содерж ащ их п атогенных микроб ов, п роизводят |
|||||||||
надсосу дом, нап олненным дезинф ициру ю щ им раствором. |
|
|
||||||||
6. |
При |
расп аковке п рисланного |
заразного |
материала необ ходимо |
соб лю дать осторож ность: б анки, содерж ащ иематериалдляисследования, п ри п олу чении об тираю тснару ж и дезинф ициру ю щ им раствором и ставят неп рямонастол, анап односы иливкю веты.
7. О слу чаях аварии с п осу дой, содерж ащ ей заразный материал, или п роливания ж идкого заразного материаланадо немедленно доводить до сведениязаведу ю щ еголаб ораториейилиегозаместителя. М ероп риятияп о
|
6 |
об еззараж иванию |
загрязненного п атогенным материалом п латья, |
п редметовраб очего инвентаря, раб очего местаи частей тела, накоторые п оп ал заразный материал, осу щ ествляю тся в п рису тствии врача- б актериолога.
8. При вып олнении б актериологических раб от ну ж но строго следить за чистотой ру к: п оокончании раб оты с заразным материалом п одвергать их дезинф екции; раб очееместовконцедняп риводить вп орядок итщ ательно
дезинф ицировать, |
а заразный |
материал |
и |
ку льту ры |
микроб ов, |
||||
необ ходимые |
для |
дальнейш ей |
раб оты, |
ставить |
на |
хранение в |
|||
зап ираю щ ийсяреф риж ератор или сейф . |
|
|
|
|
|
||||
9. Раб отники б актериологических |
лаб ораторий п одлеж ат об язательной |
||||||||
вакцинации п ротивтех инф екционных б олезней, |
возб у дители которых |
||||||||
могу твстретитьсявисследу емых об ъ ектах. |
|
|
|
|
|
||||
Oбopyд oвaниe микpoбиoл oгичecкиx л aбopaт opий |
|
|
|
||||||
Л aб opaтopии |
cнaб ж eны |
cлeдyю щ ими |
п pиб opaми |
и |
aп п apaтaми: |
||||
б иoлoгичecкими иммepcиoнными |
микpocкoп aми |
c |
дoп oлнитeльными |
||||||
п pиcп ocoб лeниями |
(ocвeтитeль, |
ф aзoвo-кoнтpacтнoe |
|
ycтpoйcтвo, |
|||||
тeмнoп oльный |
кoндeнcop и |
дp.), лю минecцeнтным |
микpocкoп oм, |
тepмocтaтaми, aп п apaтypoй дляcтepилизaцни, pH-мeтpaми, aп п apaтoм для п oлyчения диcтиллиpoвaннoй вoды (диcтиллятop), цeнтpиф yraми, тexничecкими и aнaлитичecкими вecaми, aп п apaтypoй для ф ильтpoвaния (ф ильтp Зeйтцa и дp.), вoдяными б aнями, xoлoдильникaми, нaб opoм инcтpyмeнтoв(б aктepиoлoгичecкиe п eтли. ш п aтeли, иглы, п инцeты и дp.), лaб opaтopнoйп ocyдoй(п poб иpки, кoлб ы, чaш киПeтpи, мaтpaцы, ф лaкoны. aмп yлы, п acтepoвcкиe и гpaдyиpoвaнныe nип eтки) и дp.
B лaб opaтopии выдeлeнo мecтo для oкpacки микpocкoп ичecкиx
п peп apaтoв, гдe нaxoдятcя pacтвopы cп eциaльныx кpacитeлeй, cп иpт,
киcлoты, ф ильтpoвaльнaя б yмaгa и дp. Kaж дoe paб oчee мecтo cнaб ж eнo гaзoвoй гopeлкoй или cп иpтoвкoй и б aнкoй c дeзинф ициpyю щ им
pacтвopoм. Д ля п oвceднeвнoй paб oты лaб opaтopия дoлж нa |
pacп oлaгaть |
нeoб xoдимыми п итaтeльными cpeдaми, xимичecкими |
peaктивaми, |
диaгнocтичecкими п peп apaтaми и дpyгими лaб opaтopными мaтepиaлaми. B кpyп ныx лaб opaтopияx имeю тcя тepмocтaтныe кoмнaты для мaccoвoгo выpaщ ивaниямикpoоpгaнизмoв, п ocтaнoвки cepoлoгичecкиx peaкций.
Д ля выpaщ ивaния, xpaнeния кyльтyp, cтepилизaции лaб opaтopнoй п ocyды и дpyгиx цeлeй иcп oльзyeтcяcлeдyю щ aяaп п apaтypa:
1. |
Tepмocт aт . Aп п apaт, |
в кoтopoм |
п oддepж ивaeтcя п ocтoяннaя |
тeмп epaтypa. Oп тимaльнaя |
тeмп epaтypa |
для paзмнoж eния мнoгиx |
|
микpoopгaнизмoв37 °C. Tepмocтaты б ывaю твoздyш ными и вoдяными. |
|||
2. |
Л а мина р бо кс. С п омощ ью |
б оксов(настольных, ламинарных) создаю т |
ф изическиеб арьеры дляп редотвращ ениявозмож ных контактовп ерсонала с инф екционным материалом.
3. Xoл oд ил ьники. И cп oльзyю тcя вмикpoб иoлoгичecкиx лaб opaтopияx для xpaнeния кyльтyp микpoopгaнизмoв, п итaтeльныx cpeд, кpoви, вaкцин, cывopoтoк и п poчиx б иoлoгичecки aктивныx п peп apaтoвп pи темп epaтypе
7
oкoлo 4°C. Д ля xpaнeния п peп apaтoвиcп oльзyю тcя низкoтeмп epaтypныe
xoлoдильники, вкoтopыx п oддepж ивaeтcятeмп epaтypa - 20 °C и ниж e.
4. Цeнт pифyги. Пpимeняю тcя для ocaж дeния микpoopгaнизмoв, эpитpoцитoви дpyгиx клeтoк, для paздeлeния нeoднopoдныx ж идкocтeй (эмyльcии, cycп eнзии). B лaб opaтopияx иcп oльзyю т цeнтpиф yги c paзличными peж имaми paб oты.
5.Cyшил ьнo-cт epил изaциoнны й шкaф (пeчьП acт epa). Пpeдназначен для возду ш ной стерилизации лаб ораторнойп осу ды и дру гих материалов.
6.Cт epил изaт op пapoвoй (aвт oкл aв). Пpeднaзнaчeн для cтepилизaции
пapoм п oддaвлeниeм. B микpoб иoлoгичecкиx лaб opaтopияx иcп oльзyю тcя aвтoклaвы paзныx мoдeлeй (вepтикaльныe, гopизoнтaльныe, cтaциoнapныe,
пepeнocныe).
Mикpocкoпы и микpocкoпичecкaя т exникa
Д лямикpоб иoлoгичecкиx иccлeдoвaний иcп oльзyю тнecкoлькo тип oв микpocкoп oв (б иoлoгичecкий, лю минecцeнтный, элeктpoнный) и cп eциaльныe мeтoды микpocкoп ии (ф aзoвo-кoнтpacтный, тeмнoп oльный).
Oни п peднaзнaчeны для изyчeния ф opмы, cтpyктypы, paзмepoви дpyгиx п pизнaкoв paзличныx микpoopгaнизмoв, вeличинa кoтopыx нe
мeнee 0,2-0,3 мкм. Пpeдeльнaяpaзpeш aю щ aяcп ocoб нocть иммepcиoннoгo микpocкoп a - 0,2 мкм. Oб щ ee yвeличeниe микpocкoп a oп peдeляeтcя
п poизвeдeниeм yвeличeния oб ъ eктивa нa yвeличeниe oкyляpa. Haп pимep, yвeличeниe микpocкoп a c иммepcиoнным oб ъ eктивoм 90 и oкyляpoм 10 cocтaвляeт: 90x10=900 кpaт.
Teмнoпoл ьнaя микpocкoпия. Mикpocкoп ия в тeмнoм п oлe зpeния ocнoвaнa нa явлeнии диф paкции cвeтa п pи cильнoм б oкoвoм ocвeщ eнии взвeш eнныx вж идкocти мeльчaйш иx чacтиц (эф ф eкт Tиндaля). Э ф ф eкт дocтигaeтcя c п oмoщ ью п apaб oлoидили кapдиoид-кoвдeнcopa, кoтopыe зaмeняю тoб ычный кoндeнcop вб иoлoгичecкoм микpocкoп e.
Ф aзoвo-кoнт pacт нaя микpocкoпия. Ф aзoвo-кoнтpacтнoe
п pиcп ocoб лeниe дaeт вoзмoж нocть yвидeть в микpocкoп п poзpaчныe oб ъ eкты. Oни п pиoб peтaю твыcoкyю кoнтpacтнocть изoб paж eния, кoтоpaя мoж eтб ыть п oзитивнoйилинeгaтивнoй. Пoзитивным ф aзoвым кoнтpacтoм нaзывaю ттeмнoe изoб paж eниe oб ъ eктa вcвeтлoм п oлe зpeния, нeгaтивным - cвeтлoe изoб paж eниe oб ъ eктa нa тeмнoм ф oнe.
Л юминecцeнт нaя (ил и фл юopecцeнт нaя) микpocкoпия. Ocнoвaнa нa
явлeнии ф oтoлю минecцeнции. Л ю минecцeнция - cвeчeниe вeщ ecтв, вoзникaю щ ee п ocлe вoздeйcтвия нa ниx кaкиx-либ o иcтoчникoвэнepгии: cвeтoвыx, элeктpoнныx лyчeй, иoнизиpyю щ eгo излyчeния. Ф oтoлю минecцeнциялю минecцeнцияoб ъ eктa п oдвлияниeм cвeтa. Ecли ocвeщ aть лю минecциpyю щ ий oб ъ eктcиним cвeтoм, тo oн иcп ycкaeтлyчи кpacнoгo, opaнж eвoгo, ж eлтoгo или зeлeнoгo цвeтa. B peзyльтaтe вoзникaeт
цвeтнoe изoб paж eниe oб ъ eктa. |
Д линa вoлны излyчaeмoгo |
cвeтa (цвeт |
лю минecцeнции) зaвиcит |
oт ф изикo-xимичecкoй |
cтpyктypы |
лю минecциpyю щ eгo вeщ ecтвa. |
Пepвичнaя (coб cтвeннaя) лю минecцeнция |
8
нaб лю дaeтcя б eз п peдвapитeльнoгo |
oкpaш ивaния oб ъ eктa, втopичнaя |
(нaвeдeннaя) - вoзникaeт п ocлe oб paб oтки п peп apaтoв cп eциaльными |
|
лю минecциpyю щ ими кpacитeлями - |
ф лю opoxpoмaми. Л ю минecцeнтнaя |
микpocкoп ия п o cpaвнeнию |
c oб ычными мeтoдaми oб лaдaeт pядoм |
п peимyщ ecтв: вoзмoж нocтью |
иccлeдoвaть ж ивыe микpoopгaнизмы и |
oб нapyж ивaть иx виccлeдyeмoм мaтepиaлe внeб oльш иx кoнцeнтpaцияx вcлeдcтвиe выcoкoй cтeп eни кoнтpacтнocти.
B лaб opaтopнoй п paктикe лю минecцeнтнaя микpocкoп ия ш иpoкo п pимeняeтcядлявыявлeнияи изyчeп иямнoгиx микpoopгaнизмoв.
Эл eкт poннaя микpocкoпия. Пoзвoляeтнaб лю дaть oб ъ eкты, paзмepы кoтopыx лeж aт зa п peдeлaми paзpeш aю щ eй cп ocoб нocти cветoвoгo микpocкoп a (0,2 мкм). Э лeктpoнный микpocкoп п pимeняeтcядляизyчeния
виpycoв, |
тoнкoгo |
cтpoeния |
paзличныx |
микpoopгaнизмoв, |
мaкpoмoлeкyляpныx |
cтpyктyp и дpyгиx |
cyб микpocкoп ичecкиx oб ъ eктoв. |
Cвeтoвыe лyчи втaкиx микpocкoп ax зaмeняeтп oтoк элeктpoнoв, имeю щ ий п pи oп peдeлeнныx ycкopeнияx длинy вoлны oкoлo 0,005 нм, т. e. п oчти в 100 000 paз мeньш e длины вoлны видимoгo cвeтa. Bыcoкaяpaзpeш aю щ aя
cп ocoб нocть элeктpoннoгo микpocкoп a, п paктичecки cocтaвляю щ aя0,1-0,2
нм, п oзвoляeтп oлyчить oб щ ee п oлeзнoe yвeличeниe дo l09 кpaт.
|
Hapядy |
c п pиб opaми «п pocвeчивaю щ eгo» |
тип a |
иcп oльзyю т |
|||||
cкaниpyю щ иe |
элeктpoнныe |
микpocкoп ы, |
oб ecп eчивaю щ иe peльeф нoe |
||||||
изoб paж eниe |
п oвepxнocти |
oб ъ eктa. |
Paзpeш aю щ aя |
cп ocoб нocть этих |
|||||
п риб оров значительно ниж е, |
чем |
y |
электронных |
микроскоп ов |
|||||
«п росвечиваю щ его» тип а. |
|
|
|
|
|
|
|
||
|
П р инципы микр о био л о гическо йд иа гно ст ики инфекцио нны х бо л езней |
||||||||
|
|
|
|
||||||
|
Л а бо р а mо р на я д uа гно сmuка |
б олезней человека основана на |
|||||||
об нару ж ении |
в организме |
б ольного микроб а, вызвавш его б олезнь, |
микроб ных комп онентов(антигенов) или п роду ктовж изнедеятельности (токсинови др.) либ оизменений вп оказателях гомеостазап оддействием этогомикроб а(нап ример, ф орму лы крови, б иохимическогосоставакрови и др.).
М атериалом для исследования в медицинской микроб иологии слу ж атразличныеб иологическиеж идкости и дру гиематериалы, взятыеиз макроорганизма(кровь, гной, моча, мокрота, ликвор, кал, рвотныемассы, п ромывныеводы и т.п .), и ткань, п олу ченнаяметодом б иоп сии отж ивого или ау топ сии от тру п а. В некоторых слу чаях на исследование б еру т об ъ екты окру ж аю щ ей среды: возду х, воду , п ищ евые п роду кты, смывы и т.п .
М икроб иологическая диагностика вклю чает в себ я 5 методов:
микроскоп ический, ку льту ральный, |
б иологический, |
серологический и |
аллергический. |
|
|
М uкр о ско nuческuй меmо д |
заклю чается |
в п риготовлении |
микроскоп ических п реп аратов(нативных или окраш енных п ростыми или слож ными сп особ ами) из исследу емого материалаи их микроскоп ии с п рименением различных видов микроскоп ической техники (световая,
9
темноп ольная, ф азово-контрастная, лю минесцентная, электроннаяидр.). В
б актериологии |
микроскоп ический |
метод |
п олу чил |
название |
||||
б актериоскоп ическоrо, ввиру сологии - виру соскоп ического. |
|
|
||||||
Кул ьmур а л ьны й |
меmо д |
заклю чается в |
п осеве |
исследу емого |
||||
материаланаиску сственные п итательные среды с целью |
выделения и |
|||||||
идентиф икации чистой ку льту ры возб у дителя. |
|
|
|
|
||||
Б uо л о гuческuй |
меmо д |
(эксп ериментальный, |
или |
б иоп роб а) |
||||
заклю чается в зараж ении исследу емым материалом |
чу вствительных |
лаб ораторных ж ивотных. Е гоисп ользу ю тдлявыделениячистой ку льту ры возб у дителя, оп ределения тип а токсина и активности антимикроб ных химиотерап евтических п реп аратови т.д.
Сер о л о гuческuй меmо д заклю чается в оп ределении титра сп ециф ических антителвсывороткекрови б ольного, реж евоб нару ж ении микроб ногоантигенависследу емом материале. С этой целью исп ользу ю т реакции имму нитета.
Ал л ер го л о гuческuй меmо д заклю чается ввыявлении инф екционной аллергии (ГЗТ ) надиагностический микроб ный п реп арат-аллерген. Сэтой
целью ставят |
кож ные аллергические п роб ы |
с |
соответству ю щ ими |
|
аллергенами. |
|
|
|
|
О чевидно, |
что диагностическая ценность п еречисленных методов |
|||
неравнозначна. |
В еду щ ий |
метод микроб иологической диагностики |
||
ку льту ральный, |
так как он |
п озволяет выделять |
и |
идентиф ицировать |
возб у дитель, т.е. оп ределять п ервоп ричину б олезни. |
О стальные методы |
менее инф ормативны, п оскольку с их п омощ ью |
оцениваю т изменения в |
|
организме, |
об у словленные наличием внем микроб а. В торое место п о |
|
значимости |
занимает серологический метод, |
так как взаимодействие |
антигенаи антителахарактеризу ется высокой степ енью |
сп ециф ичности. |
И нф ормативность трех остальных методов невысокая, |
и их об ычно |
п рименяю ткак доп олнениек ку льту ральному и серологическому методам. О соб ое значение п риоб ретаю т методы эксnр есс-д uа гно сmuкu, которые п озволяю т п оставить микроб иологический диагноз в течение короткого п ромеж у тка времени (от нескольких мину т до нескольких часов) с моментадоставки исследу емогоматериалавлаб ораторию . К этим
методам относятсяРИ Ф , И Ф А , РИ А , ПЦ Р, газоваяхроматограф ияи др.
Т ем а |
2. |
М |
И К РО СК О ПИ Ч Е СК И Е М |
Е Т О Д Ы |
И ССЛ Е Д О В А Н И Я |
||||||
М О РФ О Л О |
ГИ И |
М |
И К РО О |
РГА Н И ЗМ О В |
|
|
|
|
|
|
|
М о р фо л о гия ба кт ер ий |
|
|
|
|
|
|
|
||||
Бактерии |
имею т разнооб разну ю |
ф орму |
и |
довольно |
слож ну ю |
||||||
стру кту ру , |
оп ределяю щ у ю |
многооб разие |
их |
ф у нкциональной |
|||||||
деятельности. |
Д ля б актерий |
характерны |
четыре |
основные |
ф ормы: |
||||||
сф ерическая (ш аровидная), цилиндрическая (п алочковидная), |
извитая и |
||||||||||
нитевидная. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Размеры |
б актерий |
колеб лю тся |
от 0,1 |
до 10 мкм. |
В |
состав |
|||||
б актериальной |
|
клетки |
входят |
кап су ла, |
клеточная |
|
стенка, |
10
цитоп лазматическая мемб рана и цитоп лазма, в которой содерж атся
ну клеоид, |
риб осомы и вклю чения. Н екоторые б актерии |
снаб ж ены |
|
ж гу тиками |
и ворсинками. |
Ряд б актерий об разу ю т сп оры, |
которые |
расп олагаю тся терминально, |
су б терминально или центрально; |
п ревыш ая |
п оп еречный размер клетки, сп оры п ридаю тей веретенооб разну ю ф орму .
Размеры б актерий измеряю тся |
в микрометрах (мкм). О дин |
микрометр равен 1000 нанометров(нм). В |
нанометрах выраж аю тразмеры |
отдельных комп онентовб актерий. |
|
1. Ко кко вид ны еба кт ер ии (ко кки) - ш аровидныеклеткиразмером 0,5- 1,0 мкм, которые взависимости от взаимного расп олож ения делятся на микрококки, дип лококки, стреп тококки, тетракокки, сарцины и стаф илококки.
М икр о ко кки п редставляю тсоб ойотдельнорасп олож енныеклетки. Дипл о ко кки, или п арныекокки, расп олагаю тсяп арами (п невмококк,
гонококк, менингококк), так как клетки п оследелениянерасходятся.
Ст р епт о ко кки (от греч. strер tos - цеп очка) - клетки окру глой или вытяну той ф ормы, составляю щ ие цеп очку вследствие деления клеток в однойп лоскости исохранениясвязи меж ду ними вместеделения.
Са р цины (отлат. sа rсiпа - связка, тю к) расп олагаю тсяввидеп акетов из 8 и б олеекокков, так как они об разу ю тся п ри делении клетки втрех взаимноп ерп ендику лярных п лоскостях.
Ст а фил о ко кки (отгреч. stа р hуlе- винограднаягроздь) п редставляю т соб ойкокки, расп олож енныеввидегроздивиноградаврезу льтатеделения
вразных п лоскостях. |
|
2. П а л о чко вид ны е ба кт ер ии |
(п алочки) различаю тся п о размерам, |
ф орме концовклетки и взаимному |
расп олож ению клеток. Д линаклеток |
варьиру етот1,0 до 8,0 мкм, толщ инаот0,5 до 2,0 мкм. Палочки могу т
б ыть п равильной (киш ечная |
п алочка и др.) и неп равильной |
(коринеб актерии и др.) ф ормы, |
в том числе ветвящ иеся, нап ример у |
актиномицетов. К наиб олеемелким п алочковидным б актериям относятся риккетсии.
Слегка изогну тые п алочки называю тся вибр ио на ми (холерный виб рион). Больш инство п алочковидных б актерий расп олагается б есп орядочно, так как п осле деления клетки расходятся. Е сли п осле деления клетки остаю тся связанными об щ ими ф рагментами клеточной стенки и не расходятся, то они расп олагаю тся п од у глом дру г к дру гу (коринеб актерии диф терии) или об разу ю т цеп очку (сиб иреязвенная
бацилла).
3.Извит ы ефо р мы - сп иралевидныеб актерии, нап ример спир ил л ы , имею щ иевид ш топ орооб разно извитых клеток. К п атогенным сп ириллам
относится возб у дитель содоку (б олезнь у ку сакрыс). К извитым такж е относятсякамп илоб актеры, имею щ иеизгиб ы как у крылалетящ ей чайки; б лизки к ним и такиеб актерии, как сп ирохеты.
Спир о хет ы - тонкие, длинные, извитые (сп иралевидной ф ормы) б актерии, отличаю щ иеся от сп ирилл п одвиж ностью , об у словленной