2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Топ_10_конспектов_по_микробиологии

Аминокислоты могут использоваться в конструктивном метаболизме, а могут у аммонифицирующих бактерий служить основным материалом в энергетических процессах при окислительном дезаминировании, в

результате которого происходит выделение аммиака.

Процесс аммонификации известен как гниение. Гнилостные бактерии осуществляют минерализацию белка, разлагая его до СО2, NН3 и H2S. К гнилостным бактериям относятся Proteus, Pseudomonas, Bacillus cereus и др.

Бродильный (ферментативный) метаболизм

Кислород в процессе брожения участия не принимает.

Ферментация, или брожение, — процесс получения энергии, при котором отщепленный от субстрата водород переносится на органические соединения.

Ферментироваться могут углеводы, аминокислоты (за исключением ароматических), пурины, пиримидины, многоатомные спирты. Не способны сбраживаться ароматические углеводороды, стероиды, каротиноиды, жирные кислоты. Эти вещества разлагаются и окисляются только в кислородной среде,

ванаэробных условиях они стабильны. Продуктами брожения являются кислоты, газы, спирты.

При ферментации гексоз (глюкозы) пируват лишь частично окисляется

вцикле трикарбоновых кислот, который выполняет только функцию поставщика предшественников для биосинтетических процессов. Энергия в форме двух молекул АТФ образуется в результате субстратного фосфорилирования. Отщепившийся от субстрата водород, находящийся в форме восстановленного НАД, переносится на пируват, превращая его в цепи реакций в этанол, кислоты, газы.

Исходя из природы конечных продуктов, различают несколько типов ферментации углеводов:

Спиртовое брожение встречается в основном у дрожжей. Конечными продуктами являются этанол и СО2. Сбраживание глюкозы происходит по ФДФ-пути в анаэробных условиях. При доступе кислорода процесс брожения ослабевает, на смену ему приходит дыхание. Подавление спиртового брожения кислородом называется эффектом Пастера.

Молочнокислое брожение делится на:

А) гомоферментативный тип расщепления-глюкоза проходит по ФДФ-пути, при этом образуется молочная кислота.

Б) гетероферментативный тип расщепления- им обладают бактерии, у которых отсутствует ФДФ-путь. Расщепление глюкозы происходит по ПФпути с образованием фосфоглицеринового альдегида, который превращается далее в пируват по ФДФ-пути. Дополнительными продуктами этого типа брожения являются также этанол, уксусная кислота.

12

Продукты молочнокислого брожения играют большую роль в формировании колонизационной резистентности бактериями родов Lactobacillus и Bifidobacterium, составляющих облигатную флору кишечника. Молочнокислые бактерии широко используются в молочной промышленности для получения молочнокислых продуктов, а также в создании пробиотиков.

Муравьинокислое (смешанное) брожение.Глюкоза расщепляется по ФДФ-пути, а глюконат — по КДФГ-пути. В зависимости от продуктов брожения, выделяющихся в анаэробных условиях, различают два процесса:

1)происходит расщепление пирувата с образованием ацетилкофермента

Аи муравьиной кислоты, которая, в свою очередь, может расщепляться на двуокись углерода и молекулярный водород.

2)при другом процессе брожения образуется целый ряд кислот, однако главным продуктом брожения являются ацетоин и 2,3-бутандиол. При последующем восстановлении ацетоина образуется 2,3-бутандиол. Эти вещества при взаимодействии с нафтолом в щелочной среде вызывают образование окраски бурого цвета, что выявляется реакцией Фогеса— Проскауэра, используемой при идентификации бактерий.

13

Маслянокислое брожение. Масляная кислота, бутанол, ацетон, изопропанол и ряд других органических кислот, в частности уксусная, капроновая, валерьяновая, пальмитиновая, являются продуктами сбраживания углеводов сахаролитическими строгими анаэробами. Спектр этих кислот, определяемый при помощи газожидкостной хроматографии, используется как экспресс-метод при идентификации анаэробов.

Ферментация белков. Пептолитические бактерии гидролизуют белки и сбраживают аминокислоты.

Некислородное дыхание

Нитратное дыхание-использование в анаэробных условиях нитрата как конечный акцептор водорода. Восстановление нитрата может происходить двумя путями:

1)аммонификацией, при которой нитрат превращается в аммиак;

2)денитрофикацией, при которой происходит восстановление нитрата до молекулярного азота или закиси азота; этот процесс связан с деятельностью фермента нитратредуктазы.

Сульфатное дахание-использование сульфата как конечный акцептор водорода при анаэробном дыхании. К такому типу дыхания способны бактерии, которые являются строгими анаэробами, литотрофами, обитающими в сероводородном иле. Этим бактериям принадлежит ведущая роль в образовании сероводорода в природе. Некоторые представители обнаружены в полости рта и в кале.

14

Отношение бактерий к кислороду

По отношению к кислороду, а также по использованию его в процессах получения энергии микроорганизмы подразделяются на три группы:

1.облигатные аэробы

2.облигатные анаэробы

3.факультативные анаэробы.

Облигатные аэробы

Растут и размножаются только в кислородной среде, используя его для получения энергии путем кислородного дыхания.

Энергию они получают оксидативным метаболизмом, используя кислород как терминальный акцептор электронов в реакции, катализируемой цитохромоксидазой. Облигатные аэробы подразделяются на

строгие аэробы, которые растут при парциальном давлении атмосферы воздуха

микроаэрофилы, которые, используя кислород в процессах получения энергии, растут при его пониженном парциальном давлении

Это связано с тем, что у микроаэрофилов имеются ферменты, которые инактивируются при контакте с сильными окислителями и активны только при низких значениях парциального давления кислорода, например, фермент гидрогеназа.

Облигатные анаэробы

Не используют кислород для получения энергии.

Тип метаболизма у них — бродильный, (за исключение бактерий с сульфатным дыханием).

Облигатные анаэробы подразделяются на две группы:

Строгие анаэробы-молекулярный кислород для них токсичен, получают энергию маслянокислым брожением (некоторые клостридии).

Аэротолерантные-не используют кислород для получения энергии, но могут существовать в его атмосфере. К ним относятся молочнокислые бактерии, получающие энергию гетероферментативным молочнокислым брожением.

Факультативные анаэробы

Способны расти и размножаться как при наличии кислорода, так и в его отсутствии. Они обладают смешанным типом метаболизма. Процесс получения энергии у них может происходить кислородным дыханием при

15

наличии кислорода, а в его отсутствие переключаться на брожение. Для этой группы бактерий характерно наличие некислородного нитратного дыхания.

Различное отношение микроорганизмов к кислороду связано с наличием у них ферментных систем, позволяющих существовать в атмосфере кислорода. Следует отметить, что в окислительных процессах, протекающих в атмосфере кислорода, при окислении флавопротеидов образуются токсические продукты:

Перекись водорода (Н2О2) и закисный радикал кислорода (О2–), имеющий неспаренный электрон. Эти соединения вызывают перекисное окисление ненасыщенных жирных кислот и окисление SH-групп белков.

Для нейтрализации токсичных форм кислорода микроорганизмы, способные существовать в его атмосфере, имеют защитные механизмы.

Фермент супероксиддисмутаза, расщепляюший закисный радиакал на перекись водорода и молекулярный кислород

Каталаза, расщепляющая перекись водорода до воды и кислорода

Ионы марганца (характерно для аэротолерантных микроорганизмов, у которых отсутствует супероксиддисмутаза)

Фермет пероксидаза, аналог каталазы (у аэротолерантных микробов)

Строгие анаэробы не имеют ни каталазу, ни пероксидазу. Однако супероксиддисмутаза встречается у многих строгих анаэробов. И наличие этого фермента коррелирует с их устойчивостью к кислороду.

Некоторые строгие анаэробы не выносят присутствия даже незначительного количества молекулярного кислорода.

16

Конструктивный метаболизм (анаболизм)

Основные органические компоненты бактериальной клетки синтезируются в реакциях полимеризации из строительных блоков: аминокислот, фосфатов сахаров, пуриновых и пиримидиновых оснований, органических кислот. Поставщиками этих строительных блоков являются промежуточные продукты основных путей энергетического метаболизма. Среди бактерий выделяют:

Прототрофов, способны синтезировать все компоненты клетки из одного источника углерода и энергии.

Ауксотрофов, бактерии, не способные синтезировать все компоненты клетки, вследствие потери способности какого-либо ферментов, участвующего в биосинтетических процессах.

Ауксотрофам для их роста и размножения требуется наличие недостающего вещества, которое называется фактором роста. Факторами роста могут служить аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, витамины, которые входят в состав простетических групп коферментов.

Биосинтез аминокислот и белков

Большинство бактерий обладают способностью синтезировать все 20 аминокислот, из которых состоят белки. Углеродные скелеты аминокислот образуются из промежуточных продуктов обмена. Исходным материалом служат промежуточные продукты фруктозодифосфатного (ФДФ) и пентозофосфатного (ПФ) путей, цикла трикарбоновых кислот.

Аминогруппы вводятся в результате непосредственного аминирования или переаминирования. Перевод неорганического азота в органические соединения происходит всегда через аммиак. Нитраты, нитриты и молекулярный азот предварительно восстанавливаются в аммиак и только лишь после этого включаются в состав органических соединений.

После синтеза на рибосомах молекул белков большинство из них приобретают нужную форму (третичную структуру) с помощью специальных белков шаперонов, которые обеспечивают правильное складывание белков. Шапероны необходимы для поддержания нормальной жизнедеятельности клетки как эутак и прокариот. Количество шаперонов резко возрастает, когда клетка подвергается стрессорному воздействию различных факторов окружающей среды (температуры — тепловой шок, токсинов, нарушающих метаболические реакции, и др.). При этом шапероны защищают многие белки, включая ДНК-полимеразы, от разрушения. Шапероны также участвуют в транспорте белков через мембраны.

17

Биосинтез нуклеотидов

Пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды — это те строительные блоки, из которых синтезируются нуклеиновые кислоты. Кроме того, пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды входят в состав многих коферментов и служат для активации и переноса аминокислот, сахаров, липидов в реакциях полимеризации.

Исходным соединением для образования пентозной части нуклеотидов служит рибозо-5-фосфат, образующийся в ПФ-пути. Углеродный скелет пиримидинов происходит из аспартата, который образуется в цикле трикарбоновых кислот. Атомы азота и аминогруппы пуринов и аминосодержащих пиримидинов происходят из аспартата и глутамина.

Биосинтез жиров

Ключевым промежуточным продуктом для синтеза жирных кислот является ацетилкоэнзим А, а для синтеза фосфолипидов — продукт ФДФпути: диоксиацетилфосфат, восстанавливающийся в глицерол-3-фосфат, который соединяется с остатками жирных кислот.

Биосинтез углеводов

Синтез глюкозы происходит из пирувата, за счет обратных реакций, путей распада глюкозы. Для обхода реакций, идущих только в одном направлении, имеются обходные пути, например, глиоксилатный цикл.

18

Транспорт веществ в бактериальную клетку

Ответственность за поступление в клетку питательных веществ лежит на цитоплазматической мембране.

Существует два типа переноса веществ в бактериальную клетку: Пассивный перенос- вещество проникает в клетку только по градиенту

концентрации. Затрат энергии при этом не происходит. Различают две разновидности пассивного переноса:

-Простая диффузия - неспецифическое проникновение веществ в клетку, при этом решающее значение имеет величина молекул и липофильность. Скорость переноса незначительна.

-Облегченная диффузия протекает с участием белка-переносчика. Скорость этого способа переноса зависит от концентрации вещества в наружном слое.

Активный перенос-вещество проникает в клетку против градиента концентрации при помощи белка-переносчика — пермеазы. При этом происходят затраты энергии. Имеется два типа активного транспорта:

-Первый тип, когда небольшие молекулы (аминокислоты, некоторые сахара) «накачиваются» в клетку и создают концентрацию, которая может в 100–000 раз превышать концентрацию этого вещества снаружи клетки.

-Второй тип, получивший название транслокация радикалов, обеспечивает включение в клетку некоторых сахаров (например, глюкозы, фруктозы), которые в процессе переноса фосфорилируются, т.е. химически модифицируются. Для осуществления этих процессов в бактериальной клетке локализуется специальная фосфотрансферная система.

Поступив в клетку, органический источник углерода и энергии вступает в цепь биохимических реакций, в результате которых образуются АТФ и ингредиенты для биосинтетических процессов. Биосинтетические (конструктивные) и энергетические процессы протекают в клетке одновременно. Они тесно свяаны между собой через общие промежуточные продукты, которые называются амфиболитами.

19

Транспорт веществ из бактериальной клетки

В процессе жизнедеятельности бактериям требуется выделять в окружающую среду различные белки и ферменты. Секретируемые белки необходимы для жизнедеятельности бактерий. Они участвуют в построении клеточных оболочек, жгутиков, пилей, расщепляют крупные полимерные молекулы, используемые в качестве питательных веществ, до способных проходить через цитоплазматичесаую мембрану; осуществляют взаимодействие с системами макроорганизма.

У грамположительных бактерий белки секретируются непосредственно во внешнюю среду. А у грамотрицательных бактерий они должны пересечь наружную мембрану. Наличие наружной мембраны привело к формированию у грамотрицательных бактерий различных по структуре и функциям шести типов секреции. Все они протекают с поглощением энергии.

Выделение молекул из клетки также осуществляется с помощью белковпереносчиков и фосфотрансферазным путем. Фосфотрансферазный путь широко используется при выведении молекул, необходимых для построения различных структур бактерий, расположенных кнаружи от цитоплазматической мембраны, в частности клеточной стенки, капсулы и др.

Некоторые из стадий подобного транспорта подавляются антибиотиками. Например, транспорт через мембрану N-ацетилглюкозамина - компонента пептидогликана, блокируется гликопептидным антибиотиком ванкомицином.

20

Рост и способы размножения бактерий

Рост-бактериальной клетки понимают согласованное увеличение количества всех ее компонентов. После достижения критических размеров клетка подвергается делению. Большинство бактерий делится поперечным делением надвое.

Деление бактериальной клетки начинается спустя некоторое время после завершения цикла репликации хромосомы, которая у бактерий протекает по полуконсервативному механизму.

Размножение бактерий бинарным делением приводит к росту числа бактериальных клеток в геометрической прогрессии. При внесении бактерий в питательную среду они растут и размножаются до тех пор, пока содержание какого-нибудь из необходимых компонентов среды не достигнет минимума, после чего рост и размножение прекращаются. Если на протяжении всего этого времени не прибавлять питательных веществ и не удалять конечных продуктов обмена, то получаем статическую бактериальную культуру,

ведущую себя как многоклеточный организм, с генетическим ограничением роста.

Если построить график, по оси абсцисс которого отложить время, а по оси ординат — число клеток, то получим кривую, описывающую зависимость числа образующихся клеток от времени размножения, которая называется

кривой роста.

В жидкой питательной среде

На кривой роста бактерий выделяют нескольких фаз, сменяющих друг друга в определенной последовательности (лаг-фаза, экспоненциальная, стационарная и фаза отмирания).

1.Лаг-фаза (от англ. lag — отставать) — начальная фаза, которая охватывает промежуток времени между посевом бактерий и началом размножения. Ее продолжительность составляет в среднем 2–5 ч и зависит от состава питательной среды и возраста засеваемой культуры. Во время лагфазы бактерии адаптируются к новым условиям культивирования, идет синтез индуцибельных ферментов.

2.Экспоненциальная (логарифмическая) фаза характеризуется постоянной максимальной скоростью деления клеток, которая зависит от вида бактерий и питательной среды. Период удвоения клеток называется временем генерации, которое варьирует от вида бактериальной культуры-от 10 мин до 24 ч. Величина клеток и содержание белка в них во время экспоненциальной фазы остаются постоянными. Бактериальная культура в этой фазе состоит из стандартных клеток.

3.Стационарная фаза наступает тогда, когда число клеток перестает увеличиваться. Так как скорость роста зависит от концентрации питательных

21