6 курс / Кардиология / СЕРДЕЧНАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ

Глава 5. Механизмы влияния полиморфизмов генов BNP...

Таким образом, аллель Т (ОШ=1,67, 95%ДИ=1,237– 2,248, p=0,001) и генотип Т/Т (ОШ=3,13, 95%ДИ=1,611–6,060, p=0,001) ассоциируются с раз витием ХСН у больных ИБС.

Анализ влияния полиморфизма T 381C гена BNP на тяжесть ФК у больных ХСН показал, что аллель Т (75,0 и 71,8 против 60,3%, р=0,021) и генотип Т/Т (54,7 и 47,5 против 35,7%, II ФК/III ФК – нд, II ФК/IV ФК – р=0,023) чаще встречался у пациентов с тяжелой сердечной не достаточностью III и IV ФК ХСН по сравнению с II ФК (табл. 5.4). Генотип С/С и аллель С, напротив, чаще регистрировались у пациентов с I ФК ХСН, чем у паци ентов III и IV ФК ХСН (15,2 против 4,0 и 4,7%, р=0,012 для II ФК/III ФК и 38,8 против 28,2 и 26,6%, р=0,021 соответственно). Соответственно, носительство аллеля Т и генотипа Т/Т ассоциировалось с более тяжелыми клиническими проявлениями ХСН, а аллель С и генотип

С/С проявили себя в качестве протективных факторов.

5.3. Полиморфизмы генов цитокинов (ФНО8α , ИЛ81β , ИЛ86 и ИЛ81Ра) у больных хронической сердечной недостаточностью

Ген ФНО α расположен на шестой хромосоме (6p21.3) в локусе, кодирующем молекулы главного ком плекса гистосовместимости первого (HLA A, B, C) и вто рого классов (HLA DP, DQ, DR). Расположение в сред ней части генома определяет большую вариабельность локуса, в частности, промоторная зона гена ФНО α включает восемь полиморфных участков с единичны

ми нуклеотидными заменами: 1031T/C, 863C/A,

221

Тепляков А.Т., Березикова Е.Н., Шилов С.Н. Сердечная недостаточность

857C/T, 575G/A, 376G/A, 308G/A, 244G/A,238G/A. Однако наиболее значимыми для человека считаются два. Это единичные нуклеотидные замены гуанина на аденин в положениях: 308 и 238, которые вызывают изменения уровня продукции ФНО α , т.е. яв ляются функциональными. Позиции 308 и 238 при ходятся на промотор, что сказывается на возможности транскрипционных факторов связываться с этой частью гена и, таким образом, влиять на скорость транскрип ции. H. Fernandez et al. (2002) показали, что выработка ФНО α моноцитами периферической крови, стимули рованными конканавалином А, у доноров гомозиготных по полиморфному аллелю 308А происходит в 3 раза активнее, чем клетками лиц с генотипом G/G [220].

Результаты исследования уровней цитокинов ФНО α , ИЛ 1β , ИЛ 6 и ИЛ 1Ра в сыворотке крови в груп пе контроля в зависимости от генотипов соответствую

щих генов представлены на рисунках 5.2–5.5.

По результатам нашего исследования выявлено, что у здоровых доноров западно сибирской популяции, имевших генотип А/А, уровень ФНО α в крови был су щественно выше по сравнению с носителями генотипов G/A и G/G (2,7±0,21 против 2,1±0,18 и 2,2±0,16 пг/мл соответственно, р<0,05). Следовательно, носи тельство генотипа А/А полиморфного локуса G 308A гена ФНО α ассоциируется с высокой концентрацией цитокина в плазме крови.

Кластер генов ИЛ 1 находится на хромосоме 2q13 и содержит гены ИЛ 1α и ИЛ 1β , рецептор ИЛ 1 и рецеп торный антагонист ИЛ 1 (ИЛ 1Ра). Равновесие между

222

Глава 5. Механизмы влияния полиморфизмов генов BNP...

Рис. 5.2. Уровень ФНО α в сыворотке крови в группе контроля в зависимости от генотипа полиморфного локуса G 308A гена ФНО α . * – достоверность по сравнению

с генотипом А/А, р<0,05

Рис. 5.3. Уровень ИЛ 1β в сыворотке крови в группе контро ля в зависимости от генотипа полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ 1β . * – достоверность по сравнению

с генотипом Т/Т, р<0,05

223

Тепляков А.Т., Березикова Е.Н., Шилов С.Н. Сердечная недостаточность

Рис. 5.4. Уровень ИЛ 1Ра в сыворотке крови в группе контроля в зависимости от генотипа ИЛ 1Ра (VNTR intron 2)

Рис. 5.5. Уровень ИЛ 6 в сыворотке крови в группе контроля в зависимости от генотипа полиморфного локуса C 174G гена ИЛ 6. * – достоверность по сравнению с генотипом С/С, р<0,05

224

Глава 5. Механизмы влияния полиморфизмов генов BNP...

продукцией, экспрессией и ингибицией синтеза белков этого семейства играет одну из ключевых ролей в раз витии воспалительного процесса. Ген ИЛ 1β содержит 22 экзона, 20 из них альтернативные (т.е. имеют струк турные варианты), и 9 интронов, из которых альтерна тивных 8. Наиболее изучены биаллельные полиморфиз мы ИЛ 1β в позициях 511, 31 и +3953, которые пред ставляют замены единственного нуклеотида. Изучение полиморфизма гена ИЛ 1Ра важно в связи с его спо собностью ингибировать стимулирующие эффекты ИЛ 1.

У носителей генотипа Т/Т полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ 1β выявлен повышенный уровень эк спрессии цитокина по сравнению с носителями геноти па С/С (7,8±0,2 и 7,2±0,2 пг/мл соответственно, р<0,05) (рис. 5.3). У носителей генотипа Т/С уровень экспрессии пептида носил промежуточный характер,

однако достоверных отличий от носителей генотипов Т/Т и С/С не обнаружено. Таким образом, генотип Т/Т полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ 1β ассо циируется с повышенным уровнем экспрессии данного провоспалительного цитокина.

Проведенный анализ не выявил достоверных разли чий в уровне экспрессии противовоспалительного ци токина в зависимости от генотипа гена ИЛ 1Ра (VNTR intron 2) (рис. 5.4).

Ген ИЛ 6 находится на коротком плече 7 й хромосо мы и состоит из 5 экзонов и 4 интронов [111, 404]. Нами изучен полиморфный локус С 174G (замена нуклеоти да гуанина на цитозин в регуляторной области гена).

225

Глава 5. Механизмы влияния полиморфизмов генов BNP...

Рис. 5.6. Уровень гомоцистеина в сыворотке крови в группе контроля в зависимости от генотипа полиморфного локуса С677Т гена MTHFR. * – достоверность по сравнению

сгенотипом С/С, р<0,05

Уздоровых носителей генотипа G/G полиморфно

го локуса C 174G (rs1800795) гена ИЛ 6 обнаружен по вышенный уровень экспрессии цитокина по сравнению

сносителями генотипа С/С (5,8±0,3 и 4,9±0,2 пг/мл соответственно, р<0,05) (рис. 5.6). У здоровых людей, имевших генотип C/G, выработка ИЛ 6 (5,5±0,5 пг/мл) достоверно не отличалась от носителей генотипов С/С и G/G (рис. 5.5). Следовательно, аллели С и G поли морфного локуса C 174G гена ИЛ 6 определяют раз личный уровень экспрессии гена: генотип G/G ассоци

ируется с повышенным уровнем экспрессии кодируемо го пептида; при варианте С/С уровень продукции ин терлейкина 6 понижен.

Распределение частот встречаемости генотипов по лиморфного локуса C 174G гена ИЛ 6 в группе боль

227

Глава 5. Механизмы влияния полиморфизмов генов BNP...

ных и в контрольной группе соответствовало ожидае мому при равновесии Харди–Вайнберга (табл. 5.5).

У больных ХСН по сравнению с группой контроля частота встречаемости аллеля G (62,6 против 48,9%) генотипа G/G была выше (39,0 против 22,8%). Аллель С и генотип С/С, напротив, встречались чаще в конт рольной группе по сравнению с больными ХСН.

Таким образом, аллель G (ОШ=1,75, 95%ДИ=1,306–2,350, p=0,0008) и генотип G/G (ОШ=3,12, 95%ДИ=1,692–5,744, p=0,0002) являются факторами повышенного риска развития ХСН.

Анализ распределения частот встречаемости геноти пов и аллелей гена ИЛ 6 (C 174G) в зависимости от ФК ХСН (NYHA) не выявил каких либо закономерностей влияния изученного полиморфизма на тяжесть течения заболевания (табл. 5.6).

5.4. Полиморфизм гена MTHFR как предиктор развития и тяжести течения хронической сердечной недостаточности

Ген MTHFR кодирует фермент метилентетрагидро фолатредуктазу, участвующей в фолатном обмене и, как следствие, в метилировании и синтезе ДНК и бел ков. Данный фермент восстанавливает 5,10 метилентет рагидрофолат до 5 метилтетрагидрофолата как часть превращения гомоцистеина в метионин. Активность MTHFR влияет на уровни фолатов в плазме крови. Де фекты метаболизма фолатов ведут к понижению уров ня фолиевой кислоты и высоким уровням гомоцистеи

на (гипергомоцистеинемия). Оба этих нарушения влия

229

Тепляков А.Т., Березикова Е.Н., Шилов С.Н. Сердечная недостаточность

ют на многие органы и ткани, включая почечную ткань, мозг и эндотелий.

Нами изучен полиморфизм С677Т в гене MTHFR.

Однонуклеотидный полиморфизм этого гена, приводя щий к замене нуклеотида цитозина на тимин в кодиру ющей области гена, определяет замену аминокислоты аланина на валин в белке, обуславливая термолабиль ные свойства фермента, что приводит к его сниженной активности на 35% (при генотипе C/T) и на 70% (при генотипе T/T) [447].

Результаты исследования уровня гомоцистеина в сыворотке крови в группе контроля в зависимости от генотипа полиморфного локуса С677Т гена MTHFR представлены на рисунке 5.6.

По результатам нашего исследования выявлено, что у здоровых доноров популяции Западной Сибири, имев ших генотип T/Т, уровень гомоцистеина в крови суще

ственно превышал таковой у носителей генотипа С/С (7,1±0,4 и 5,9±0,3 мкмоль/л соответственно, р<0,05). У носителей генотипа С/Т уровень гомоцистеина в сы воротке крови достоверно не отличался от носителей генотипов С/С и Т/Т. Таким образом, вариант Т677Т, обуславливающий термолабильность фермента, ассо циируется c повышенным уровнем гомоцистеина в плаз ме крови.

Распределение частот встречаемости генотипов по лиморфного локуса С677Т гена MTHFR в группе боль ных и в контрольной группе соответствовало ожидае мому при равновесии Харди–Вайнберга (табл. 5.7).

На основании анализа по распределению частот

230