4 курс / Акушерство и гинекология / Перитонеальные_макрофаги_и_репродуктивная_система_женщин_Храмова
.pdf
|
|
|
|
|
а |
|
|||
|
|
б |
|
|
|
|
|
в |
|
|||
|
|
г |
Рис. 24. Цитологическая картина перитонеальных макрофагов у женщин с бесплодием при окраске методом Романовского-Гимзе × 1000.
Клетки получены из пунктата заднего свода влагалища с последующим прикреплением к стеклу: а – препарат здоровой женщины: видны малые и средние макрофаги; б – препарат женщины с трубно-перитонеальным бесплодием: количество макрофагов повышено с увеличением числа средних и больших макрофагов; в – препарат женщины с эндокринным бесплодием: выражено количество больших макрофагов; г – препарат женщины с бесплодием неясного генеза: видны малые и большие макрофаги.
90 |
Глава VI |
|
|
|
|
|
а |
|
|
б |
|
|
|
|
|
в |
|
|||
|
|
г |
Рис. 25. Цитологическая картина перитонеальных макрофагов у женщин с бесплодием при окраске иммуноцитохимическим методом на CD16 × 1000.
Клетки получены из пунктата заднего свода влагалища с последующим прикреплением к стеклу, окрашены иммуноцитохимически с применением моноклональных антител к CD16: а – в препарате здоровой женщины видны малый, средний и большой макрофаги с сильной экспрессией CD16 – рецепторов (мелкогранулезное цитоплазматическое окрашивание); б – в препарате женщин с трубно-перитонеальным бесплодием количество макрофагов повышено с умеренной и сильной экспрессий CD16 – рецепторов; в – в препарате женщин с эндокринным бесплодием много макрофагов с умеренной и слабой экспрессией CD16 – рецепторов; г – при бесплодии неясного генеза макрофагов немного, со слабой экспрессией CD16 – рецепторов.
Патология репродуктивной системы женщин |
91 |
Следует отметить, что полученные препараты перитонеальных макрофагов наглядно свидетельствуют об изменении размеров клеток, их количестве, экспрессии рецепторов СD16 в зависимости от той или иной гинекологической патологии.
Также обнаружены различия между количеством, размерами макрофагов и экспрессией рецепторов СD16 при остром и хроническом воспалительном процессе матки и придатков матки, при различных формах бесплодия, что указывает на разную степень клеточной активации.
Обращает на себя внимание цитологическая картина перитонеальных макрофагов при бесплодии неясного генеза: количество макрофагов небольшое, размер средний, слабая экспрессия рецепторов СD16 (картина неактивных макрофагов). Это наше наблюдение становится особенно актуальным на современном этапе, когда число бесплодных браков продолжает увеличиваться, а консервативные методы лечения бесперспективны.
Исходя из полученных результатов, имеет смысл делать акцент в лечении подобных случаев на стимуляцию макрофагального звена иммунной системы.
Глава 7
Изменения активности моноцитов и макрофагов у женщин с разным уровнем секреции IL-8
7.1. Острый и хронический сальпигооофорит
Активация клеток системы макрофагов – важный процесс их включения в биологические реакции в организме. При активации макрофагов возникает усиление синтетических, секреторных процессов в клетках. В частности, происходит повышение синтеза и секреции лизосомных ферментов из клеток, усиление выработки провоспалительных цитокинов, в том числе секреции интерлейкина-8 (IL-8), уровень которого в крови заметно повышается [211, 228, 288].
Мы попытались определить сопряженность ПСЛМ, секреторносинтетическую активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с процессом их активации по уровню провоспалительного цитокина интерлейкина-8 (IL-8) у женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом (табл. 14).
Нахождение IL-8 в супернатанте культивированных клеток (оценивалась секреция интерлейкина-8 моноцитами крови) осуществлялось методом сендвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы «R&D DiagnosticsInc» (США).
В результате предпринятого исследования выявлено, что у здоровых женщин уровень секреции IL-8 моноцитами крови составляет 90-140 пг/мл/106 кл. При остром воспалительном процессе в придатках матки происходит возрастание уровня секреции IL-8 до 300-400 пг/мл/106 кл, а при хроническом воспалении – до 1100-1350 пг/мл/106 кл, что соответствует различной степени активации клеток-проду- центов интерлейкина.
Изменения активности моноцитов и макрофагов у женщин с разным уровнем секреции 93
Таблица 14
Показатели активности моноцитов крови и перитнеальных макрофагов
уздоровых женщин и больных воспалением матки
ипридатков матки с разным уровнем IL-8
|
|
Здоровые женщины и больные женщины |
|||
Показатели |
с воспалением матки и придатков |
||||
|
уровень секреции IL-8 |
|
|||
активности |
|
|
|||
нормальный |
повышенный |
|
высокий (женщины |
||
клеток |
|
||||
(здоровые |
(женщины с острым |
|
с хроническим |
||
|
|
|
|||
|
|
женщины) |
воспалением) |
|
воспалением) |
моноцитов: |
|
|
|
|
|
ПСЛМ в % |
53,8+1,3 |
57,5+1,2 |
|
64,7+2,7 |
|
Lсекр |
в мкг/мл |
0,76+0,03 |
0,85+0,02 |
|
0,95+0,06 |
Lсинт |
в мкг/мл |
0,44+0,01 |
0,57+0,05 |
|
0,59+0,07 |
макрофагов: |
59,6+1,4 |
63,7+1,1 |
|
69,3+2,5 |
|
ПСЛМ в % |
|
||||
Lсекр |
в мкг/мл |
0,9+0,07 |
0,98+0,03 |
|
1,2+0,08 |
Lсинт |
в мкг/мл |
0,7+0,012 |
0,79+0,03 |
|
0,8+0,03 |
Состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови
иперитонеальных макрофагов, их секреторная и синтетическая активность при разном уровне секреции IL-8 моноцитами крови также имеют различие у здоровых женщин и у женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом.
Выявлено, что при остром сальпингооофорите наряду с увеличением секреции IL-8 происходит повышение ПСЛМ моноцитов крови
иперитонеальных макрофагов по сравнению с ПСЛМ здоровых женщин с нормальным уровнем секреции IL-8 (p<0,05). Еще больше по сравнению со здоровыми женщинами возрастает ПСЛМ моноцитов/ макрофагов у женщин с хроническим сальпингооофоритом, имеющим высокий уровень секреции IL-8 (p<0,01).
Параллельно с лабилизцией лизосомных мембран моноцитов крови перитонеальных макрофагов происходит увеличение секреции клеточного лизоцима. При этом, наиболее выраженная секреция лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами наблюдается у женщин с хроническим сальпингооофоритом, у которых прослеживается более высокий уровень секреции моноцитами крови IL-8.
Наряду с повышением IL-8 у женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом ускоряется и синтез лизоцима моноцитами/макрофагами. Но есть заметные различия между синтезом лизоцима и уровнем IL-8 у больных острым и хроническим воспалительным про-
94 |
Глава VII |
цессом. Если при хроническом сальпингооофорите отмечается значительное повышение секреции IL-8 моноцитами крови по сравнению с уровнем секреции IL-8 при остром воспалении (p<0,05), то синтез лизоцима моноцитами/макрофагами при хроническом воспалительном процессе возрастает незначительно и практически находится на одном уровне с синтезом лизоцима клетками женщин с острым сальпингооофоритом (p>0,05).
Оценивая полученный результат с точки зрения изменения функционального состояния моноцитов/макрофагов у женщин при остром
ихроническом сальпингооофорите, выявлены как общие закономерности, так и существенные различия. При хроническом сальпингооофорите по сравнению с острым процессом отмечен более высокий уровень секреции IL-8 моноцитами крови. Гиперпродукция IL-8 моноцитами крови происходит одновременно с процессом выраженной лабилизации лизосомных мембран и отсутствием дополнительного повышения секреции лизосомного фермента лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами. По-видимому, данные внутриклеточные процессы связаны с разной активацией моноцитов/макрофагов при остром и хроническом воспалении.
Таким образом, при остром сальпингооофорите наряду с повышением уровня секреции интерлейкина-8 моноцитами крови происходит лабилизация лизосомных мембран, повышение секреции
исинтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами.
При хроническом сальпингооофорите имеет место гиперсекреция IL-8 моноцитами крови, выраженная лабилизация лизосомных мембран, высокий уровень секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами при относительно невысоком синтезе этого фермента.
Неоптимальное повышение активности моноцитов/макрофагов с нарушением их секреторно-синтетических процессов при воспалении женских половых органов может привести к хронизации процесса, частым обострениям воспаления, отсутствию эффекта от проводимой антибактериальной терапии. Правильно подобранная иммунокоррегирующая терапия под контролем уровня секреции IL-8 моноцитами крови, секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при остром и хроническом сальпингооофорите может благоприятно сказаться на исходе заболевания с полным восстановлением репродуктивного здоровья женщины.
Изменения активности моноцитов и макрофагов у женщин с разным уровнем секреции 95
7.2. Трубно-перитонеальное бесплодие и бесплодие неясного генеза
Нам интересно было проследить связь между состоянием стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, уровнем синтеза и секреции лизоцима этими клетками с процессом их активации при трубно-перитонеальном бесплодии и бесплодии неясного генеза. В результате проведенного исследования мы установили, что у здоровых фертильных женщин уровень секреции IL-8 моноцитов крови колеблется в пределах от 80 до 130 пг/мл/106 кл и в среднем составляет 118+25 пг/мл/106 кл. У женщин с трубно-пери- тонельным бесплодием происходит значительное возрастание уровня секреции IL-8 по сравнению со здоровыми фертильными женщинами (p<0,01) и составляет 1130+112 пг/мл/106 мл, а при бесплодии неясного генеза уровень IL-8 (128+30 пг/мл/106 кл) незначительно превышает этот показатель здоровых фертильных женщин (p>0,05), что соответствует различной степени эндогенной активации клеток-продуцентов интерлейкина, в частности моноцитов.
При этом, состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторно-синте- тическая активность при разном уровне секреции IL-8 моноцитами крови имеет различие у здоровых фертильных женщин, пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием и бесплодием неясного генеза. При трубно-перитонеальном бесплодии наряду с усилением секреции IL-8 происходит выраженное повышение ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по сравнению с показателями здоровых фертильных женщин (p<0,05 и p<0,01, соответственно). Установлена прямая сильная корреляционная связь секреции IL-8 и показателя стабильности лизосомных мембран (r<0,74, p<0,05). Это свидетельствует
опроисходящей лабилизации лизосомных мембран таких клеток при данной патологии (табл. 15).
Уженщин с бесплодием неясного генеза при незначительном повышении IL-8, напротив, наблюдается снижение ПСЛМ моноцитов/макрофагов по отношению к здоровым женщинам, что говорит
остабилизации лизосомных мембран клеток (p<0,05 и p<0,01, соответственно).
Секреция лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами при бесплодии отличается от уровня секреции здоровых женщин: при трубно-перитонеальном бесплодии она повышена (p<0,05), при бесплодии неясного генеза, напротив, снижена (p<0,01) (табл. 16).
96 |
Глава VII |
Таблица 15
Стабильность лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов фертильных женщин,
женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и бесплодием неясного генеза
Группы сравнения |
|
ПСЛМ в % моно- |
ПСЛМ в % мак- |
|||||
|
цитов (M±m) |
рофагов (M±m) |
||||||
|
|
|||||||
фертильные женщины, уровень секреции |
52,8±1,4 |
57,9±1,5 |
||||||
IL8 118±25 пкг/мл 106 кл |
p |
|||||||
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
с трубно-перитонеальным бесплодием, |
|
|
|
|
|
|
|
|
уровень секреции IL8 1130+112 пкг/мл |
58,5±1,2 |
65,7±1,3 |
||||||
106 кл |
p |
p |
|
–p |
* |
p |
–p |
** |
|
2 |
1 |
2 |
|
1 |
2 |
|
|
с бесплодием неясного генеза, уровень |
45,3±1,9 |
48,4±1,8 |
||||||
секреции IL8 128+30 пкг/мл 106 кл |
p |
p |
–p ** |
p |
–p |
** |
||
|
3 |
1 |
|
3 |
|
1 |
3 |
|
Примечание (достоверность различий между сравниваемыми группами): * – p<0,01; ** – p<0,001.
Таблица 16
Уровень секреции лизоцима (Lсекр) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у фертильных женщин,
женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и бесплодием неясного генеза
|
|
Группы сравнения |
|
ПСЛМ в % моно- |
ПСЛМ в % мак- |
|||||
|
|
|
цитов (M±m) |
рофагов (M±m) |
||||||
|
|
|
|
|||||||
фертильные женщины, уровень секреции |
0,7±0,02 |
0,89±0,018 |
||||||||
IL8 118±25 пкг/мл 106 кл |
p |
|||||||||
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
с трубно-перитонеальным бесплодием, |
0,78±0,015 |
0,96±0,014 |
||||||||
уровень секреции IL8 1130+112 пкг/мл |
||||||||||
p1–p2* |
p1–p2** |
|||||||||
10 |
6 |
кл |
p2 |
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
||||
с бесплодием неясного генеза, уровень |
0,6±0,01 |
0,76±0,03 |
||||||||
секреции IL8 128+30 пкг/мл 106 кл |
p |
p |
–p |
** |
p –p |
3 |
** |
|||
|
|
|
3 |
1 |
3 |
|
1 |
|
Примечание (достоверность различий между сравниваемыми группами): * – p<0,01; ** – p<0,001.
По сравнению со здоровыми фертильными женщинами у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием наблюдается понижение синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами (p<0,05). Еще большее снижение этого фермента моноцитами/ макрофагами отмечается при бесплодии неясного генеза (p<0,01). Причем, снижение синтеза лизоцима перитонеальными макрофагами, более выражено (табл. 17).
Описанные результаты свидетельствуют о том, что при трубноперитонеальном бесплодии происходит лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с повы-
Изменения активности моноцитов и макрофагов у женщин с разным уровнем секреции 97
Таблица 17
Уровень синтеза лизоцима (Lсинт) моноцитами крови
и перитонеальными макрофагами у фертильных женщин, женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и бесплодием неясного генеза
Группы сравнения |
|
|
ПСЛМ в % моно- |
ПСЛМ в % мак- |
||||||
|
|
цитов (M±m) |
рофагов (M±m) |
|||||||
|
|
|
||||||||
фертильные женщины, уровень секреции |
0,49±0,01 |
0,7±0,015 |
||||||||
IL8 118±25 пкг/мл 106 кл |
p1 |
|||||||||
с трубно-перитонеальным бесплодием, |
0,45±0,008 |
0,63±0,018 |
||||||||
уровень секреции IL8 1130+112 пкг/мл |
||||||||||
p1–p2* |
p1–p2** |
|||||||||
6 |
p2 |
|||||||||
10 кл |
|
|
|
|
|
|
|
|||
с бесплодием неясного генеза, уровень |
|
0,4±0,02 |
0,59±0,02 |
|||||||
секреции IL8 128+30 пкг/мл 106 кл |
p |
3 |
p |
–p |
** |
p |
–p |
3 |
** |
|
|
|
1 |
3 |
|
1 |
|
|
Примечание (достоверность различий между сравниваемыми группами): * – p<0,01; ** – p<0,001.
шением секреции и снижением синтеза лизоцима этими клетками, и увеличением секреции IL-8 моноцитами крови. При бесплодии неясного генеза незначительное повышение секреции IL-8 сочетается со стабилизацией лизосомных мембран моноцитов/макрофагов, снижением секреции и синтеза лизоцима этими клетками. Повышение секреции IL-8 моноцитами крови и секреции лизоцима моноцитами/ макрофагами, тесно связанное с лабилизацией лизосомных мембран, при трубно-перитонеальном бесплодии может быть вызвано длительной активацией клеток системы макрофагов как результ хронического воспалительного процесса [210]. Незначительное усиление секреции IL-8, стабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, снижение секреции и синтеза лизоцима этими клетками, выявленные при бесплодии неясного генеза, могут отражать скрытые процессы в организме женщины, в том числе латентную инфекцию [205].
Таким образом, выраженные изменения секреторно-синтетиче- ской активности клеток макрофагальной системы при бесплодии неясного генеза открывают новые возможности диагностики и перспективы лечения этой патологии.
98 |
Глава VII |
Глава 8
Активация макрофагальных клеток и экспресия рецепторов
кполовым гормонам
Внастоящее время установлено, что решающую роль в имплантации оплодотворенной яйцеклетки играет количество функционально полноценных рецепторов ткани эндометрия к соответствующим стероидным гормонам [40]. При этом эстрадиол повышает концентрацию рецепторов эстрадиола (РЭ) и прогестерона (РП) в цитолизе клеток, а прогестерон ее снижает. В ходе нормального менструального цикла происходят широкие индивидуальные колебания содержания РЭ и РП в эндометрии. Максимальное количество РЭ и РП в эндометрии отмечается в овуляторный период, а в секреторную фазу их количество уменьшается [169].
Патология синтеза рецепторов в матке может происходить под влиянием изменения количества и соотношения половых гормонов, поражения патологическим процессом матки, дисбаланса других гормонов [32,77].
Нарушение экспрессии рецепторов стероидных гормонов является главной причиной в формировании гиперпластических процессов эндометрия и миомы матки. От состояния рецепторного аппарата матки и уровня сывороточных гормонов зависит также эффект от применяемой гормональной терапии, вплоть до полной нечувствительности к ней.
Эстрогены и прогестерон обладают способностью взаимодействовать с клетками системы макрофагов за счет присутствующих на их плазматической мембране рецепторов к стероидным гормонам [238].
Активация макрофагальных клеток сопровождается усилением экспрессии клеточных рецепторов [207, 211]. В клетках, при этом,
Глава VIII. Активация макрофагальных клеток и экспресия рецепторов |
99 |