ИММУНОФЕРМЕНТН ЫЙ АНАЛИЗ
Выполнила:
Протас И. В. 204 пед
Назначение реакции
Метод ИФА может применяться для диагностики:
1.Вирусных заболеваний (ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов, герпетической инфекции, коронавирусной болезни и пр.)
2.Инфекций, передающихся половым путем (сифилиса, хламидиоза, трихомониаза, гонореи и др.)
3.Уровня гормонов в эндокринологии.
4.Аутоантител и маркеров онкологических заболеваний в онкологии.
5.Общего IgE и специфических IgE антител в аллергологии.
6.Лекарственных препаратов, наркотиков в биологических образцах.
7.Белков сыворотки крови (ферритина, фибронектина и др.).
Ингредиенты
Специфические вирусные антигены;
Нормальные антигены;
Иммуноглобулины к М- и G-белкам человека;
Сецифические и нормальные иммуноглобулины;
Положительные IgM или IgG-позитивные сыворотки больных;
Нормальные сыворотки людей;
-Пероксидазные конъюгаты глобулинов;
-Карбонатно-бикарбонатный;
-Фосфатный;
-Цитратно-фосфатный буферы;
-Р-р для отмывания лунок планшетов;
-Хромоген (раствор тетраметилбензидина);
-Р-р бычьего альбумина;
-Перекись водорода;
-Серная кислота.
Ход реакции
В лунку вносят исследуемую сыворотку крови. При наличии искомого антигена он соединяется с антителом, и образуются комплексы. Лунки промывают и удаляют не связавшиеся компоненты. В лунки вносят антитела к искомому антигену, меченые ферментом. Меченые антитела присоединяются к предыдущему комплексу и также остаются на стенках. Затем в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат (перекись водорода) и хромоген. Если в исследуемой жидкости был антиген, фермент взаимодействует с перекисью водорода и разлагает его. Выделившийся при этом кислород окрашивает хромоген в желтый цвет. По интенсивности окрашивания, возникающего в результате реакции фермента и субстрата, можно судить о количестве антигенов.
По аналогичной схеме работают тест-системы для определения антител, но в качестве иммуносорбента в них используются антиген, а раствор, который добавляют, содержит раствор антигенов, меченых ферментом.
Учёт результатов
Результат реакции можно учитывать визуально с помощью сравнивания окраски в опытных и контрольных лунках, а также с помощью методов спектрофотометрии , флуориметрии, люминисценции и
др.