- •Демидюк
- •ЛИТЕРАТУРА
- •САЙТ-НАПРАВЛЕННЫЙ МУТАГЕНЕЗ
- •ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
- •Использование не полностью комплементарных праймеров позволяет получить продукт с мутацией
- •Мегапраймерная схема
- •ПЦР с достройкой перекрывания (overlap extension PCR)
- •Вопросы для
- •СОЗДАНИЕ И СКРИНИНГ БИБЛИОТЕК ГЕНОВ
- •Библиотека генов, геномная библиотека – набор клонированных фрагментов ДНК, в совокупности составляющих индивидуальный
- •МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ
- •ГЕНЕТИЧЕС
- •СЕЛЕКЦИЯ КЛОНОВ, НЕСУЩИХ
- •СЕЛЕКЦИЯ КЛОНОВ, НЕСУЩИХ
- •СЕЛЕКЦИЯ КЛОНОВ, НЕСУЩИХ
- •Как найти нужный клон ?
- •ПОДХОДЫ К АНАЛИЗУ БИБЛИОТЕК
- •Скрининг с помощью
- •Выбор зонда
- •Иммунологический скрининг
- •Скрининг по активности
- •Скрининг по активности
- •Скрининг по активности
- •Скрининг по активности
- •ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ У ПРО- и ЭУКАРИОТ
- •БИБЛИОТЕКИ кДНК
- •РАЗМЕР ГЕНОМОВ, ЕМКОСТЬ ВЕКТОРОВ И
- •ВЕКТОРЫ ДЛЯ КЛОНИРОВАНИЯ
- •Литический и лизогенный пути развития
- •Репликация ДНК фага λ
- •Векторы замещения на
- •Векторы замещения на основе фага λ
- •Негативные колонии бактериофагов T4, T3 и T7 (фаговые бляшки)
- •Космиды
- •Космиды
- •Искусственные бактериальные хромосомы
- •АЛЬТЕРНАТИВНЫЕ ПОДХОДЫ
- •Вопросы для
Демидюк
Илья
Валерьевич
(499) 196-1853 duk@img.ras.ru
ЛИТЕРАТУРА
Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия. // Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2006 (2 издание).
САЙТ-НАПРАВЛЕННЫЙ МУТАГЕНЕЗ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПЦР
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Использование не полностью комплементарных праймеров позволяет получить продукт с мутацией
TAG
CCAC AACGC AATGTСCCTGGTGCAATTGCGCTTGCA
мутация ПЦР
Мегапраймерная схема
|
R1 |
|
R2 |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
ПЦР1
|
R1 |
|
R2 |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
R1 ПЦР2 |
мегапраймер |
R2 |
Клонирование
ПЦР с достройкой перекрывания (overlap extension PCR)
R1 R2
ПЦР1
R1 R2
ПЦР2
|
|
Достройка |
||
|
|
перекрывания |
||
|
R1 |
|
|
R2 |
|
|
ПЦР3Амплификация
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
Клонирование
Вопросы для
самоподготовки
• Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
• Принцип модификации ДНК с использованием ПЦР.
• Мегапраймерная схема сайт- направленного мутагенеза с помощью ПЦР.
• Схема сайт-направленного мутагенеза с использованием ПЦР с достройкой перекрывания.
СОЗДАНИЕ И СКРИНИНГ БИБЛИОТЕК ГЕНОВ
Библиотека генов, геномная библиотека – набор клонированных фрагментов ДНК, в совокупности составляющих индивидуальный геном